细胞表面锚定的核酸适配体及其应用制造技术

本发明专利技术公开了细胞表面锚定的核酸适配体及其应用，其构建ATP响应性双链核酸适配体aptPD

【技术实现步骤摘要】
细胞表面锚定的核酸适配体及其应用


[0001]本专利技术涉及细胞表面锚定的核酸适配体及其应用。

技术介绍

[0002]过继T细胞疗法(AdoptiveTcelltherapy，ACT)对血液癌症取得了显著的疗效，ACT目前主要包括CAR
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T细胞(Chimeric antigen receptorTcell，CAR
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T)疗法，肿瘤浸润T淋巴细胞(Tumor infiltrating lymphocyte，TIL)疗法，T细胞受体
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T细胞(T cell receptor
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gene engineered T cell，TCR
‑
T)疗法等。
[0003]但ACT对实体瘤疗效不佳，免疫抑制性的肿瘤微环境(TME)是主要原因之一。在TME中，肿瘤细胞表面高表达的免疫检查点配体分子PD
‑
L1与T细胞上的PD
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1受体结合后激活免疫检查点信号通路，显著抑制T细胞活性。免疫检查点抑制剂(Immunecheckpointinhibitors，ICIs)可以竞争性地与肿瘤细胞或T细胞上的免疫检查点信号通路分子结合，从而阻断免疫抑制，增强T细胞对实体瘤的疗效。但目前ICI仅能对少数实体瘤患者(约20％)有显著疗效，且全身性运用ICI会导致免疫相关不良事件(irAE)。

技术实现思路

[0004]针对现有技术存在的不足，本专利技术在于提供细胞表面锚定的核酸适配体及其应用，其构建ATP响应性双链核酸适配体aptPD
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L1/aptATP
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DP，并将其通过插入细胞膜锚定在过继T细胞表面，得到aptPD
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L1/aptATP
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DP@T；双链核酸适配体锚定T细胞膜对T细胞功能、活性无负面影响，在肿瘤微环境中释放PD
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L1核酸适配体，显著增强了ACT细胞对实体瘤的浸润和疗效。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供了如下技术方案：
[0006]一方面，本专利技术提供了ATP响应性的aptATP核酸适配体，其与选自SEQ ID NO：1的核苷酸序列具有至少90％的序列同一性。
[0007]作为优选，其与选自SEQ ID NO：1的核苷酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％的序列同一性。
[0008]作为优选，其选自SEQ ID NO：1的核苷酸序列。
[0009]另一方面，本专利技术提供了PD
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L1核酸适配体，其与选自SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少90％的序列同一性。
[0010]作为优选，其与选自SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％和100％的序列同一性。
[0011]作为优选，其选自SEQ ID NO：2的核苷酸序列。
[0012]另一方面，本专利技术提供了ATP响应性双链PD
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L1核酸适配体，其特征是：包括权利要求1或2所述的ATP响应性的核酸适配体和权利要求3或4所述的PD
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L1核酸适配体。
[0013]作为优选，所述ATP响应性的核酸适配体选自SEQ ID NO：1的核苷酸序列，所述PD
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L1核酸适配体选自SEQ ID NO：2的核苷酸序列。
[0014]作为优选，所述ATP响应性的核酸适配体和所述的PD
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L1核酸适配体互补配对形成双链aptPD
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L1/aptATP
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DP。
[0015]另一方面，ATP响应性双链PD
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L1核酸适配体的应用，其特征是：所述双链PD
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L1核酸适配体在ATP的作用下解链。
[0016]作为优选，所述ATP的浓度大于等于1
×
102μM。
[0017]另一方面，本专利技术提供了细胞表面锚定的核酸适配体，向T细胞中加入上述所述的ATP响应性双链PD
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L1核酸适配体，共孵育得到aptPD
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L1/aptATP
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DP@T。
[0018]上述所述的ATP响应性的aptATP核酸适配体、上述所述的PD
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L1核酸适配体、上述所述的ATP响应性双链PD
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L1核酸适配体和/或上述所述的细胞表面锚定的核酸适配体在ACT细胞对实体瘤的浸润和疗效上的应用。
[0019]综上所述，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术将aptPD
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L1/aptATP
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DP@T静脉注射后，ACT细胞与核酸双链在体内时空共存，浸润肿瘤后双链在TME中响应高浓度ATP，释放aptPD
‑
L1，阻断肿瘤细胞对T细胞的免疫抑制，增强过继T细胞的抗肿瘤功能，提高疗效，同时该体系还可以减少全身性使用免疫检查点抑制剂所带来的毒副反应。
附图说明
[0020]图1为细胞膜锚定核酸适配体ICI的设计和治疗示意图；(A)aptATP与aptPD
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L1核酸适配体的序列设计；(B)将核酸适配体链接至T细胞表面的流程图；(C)过继T细胞协同细胞表面ICI核酸适配体增强对实体瘤疗效的示意图；
[0021]图2为aptATP
FAM
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DP的合成与表征；(A)aptATP
FAM
‑
DP的聚丙烯酰胺凝胶电泳图；(B)不同投料比aptATP
FAM
‑
DBCO与DP
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N3反应4h和(C)12h的产率；(D)AptATP
FAM
‑
DBCO和aptATP
FAM
‑
DP的高效毛细管电泳图；(E)AptATP
FAM
‑
DBCO和aptATP
FAM
‑
DP的MALDI
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TOFMS图谱；(F)aptATP
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DBCO(左)和aptATP
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DP(右)的紫外吸收图谱；(G)aptATP
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DBCO与aptATP
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DP在260nm和306nm处的紫外吸收值(n＝3)；
[0022]图3为aptPD
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L1的结合能力以及双链核酸适配体的结合与ATP响应性解链；(A)IFN
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γ提高肿瘤细胞表面PD
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L1的表达量；(B)aptPD
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L1
Cy5
结合肿瘤细胞表面PD
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L1的荧光直方图；(C)不同浓度aptPD
‑
L1...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.ATP响应性的aptATP核酸适配体，其特征是：其与选自SEQ ID NO：1的核苷酸序列具有至少90％的序列同一性。2.根据权利要求1所述的ATP响应性的aptATP核酸适配体，其特征是：其选自SEQ ID NO：1的核苷酸序列。3.PD
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L1核酸适配体，其特征是：其与选自SEQ ID NO：2的核苷酸序列具有至少90％的序列同一性。4.根据权利要求3所述的PD
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L1核酸适配体，其特征是：其选自SEQ ID NO：2的核苷酸序列。5.ATP响应性双链PD
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L1核酸适配体，其特征是：包括权利要求1或2所述的ATP响应性的核酸适配体和权利要求3或4所述的PD
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L1核酸适配体。6.根据权利要求5所述的ATP响应性双链PD
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L1核酸适配体，其特征是：所述ATP响应性的核酸适配体选自SEQ ID NO：1的核苷酸序列，所述PD
‑
L1核酸适配体选自SEQ ID NO：2的核苷酸序列。7.根据权利要求5或6所述的ATP响应性双链PD
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L1核酸适配体，其特征是：所述ATP响应性的核酸适配...

【专利技术属性】
技术研发人员：郑毅然，高梦倩，
申请(专利权)人：苏州大学，
类型：发明
国别省市：