包含靶向B2M的RNA指导物的组合物及其用途制造技术

本发明专利技术涉及包含靶向B2M的RNA指导物的组合物、表征这些组合物的方法、包含这些组合物的细胞以及使用这些组合物的方法。的细胞以及使用这些组合物的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】包含靶向B2M的RNA指导物的组合物及其用途
[0001]序列表
[0002]本申请含有已以ASCII格式以电子方式提交且特此通过援引以其全文并入的序列表。所述ASCII副本创建于2021年10月29日，名为51451
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014WO3_Sequence_Listing_10_29_21_ST25，并且大小为369,037字节。

技术介绍

[0003]成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)和CRISPR相关(Cas)基因(统称为CRISPR
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Cas或CRISPR/Cas系统)是古细菌和细菌中针对外来遗传元件而防御特定物种的适应性免疫系统。

技术实现思路

[0004]正是在上述背景下，本专利技术提供了优于现有技术的某些优点和进步。尽管本文披露的本专利技术不限于特定优点或功能，但本专利技术提供了包含RNA指导物的组合物，其中该RNA指导物包含(i)与B2M基因内的靶序列基本上互补的间隔子序列和(ii)同向重复序列；其中该靶序列与包含序列5'
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NTTN
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3'的原型间隔子相邻基序(PAM)相邻。
[0005]在组合物的一方面，靶序列在B2M基因的外显子1、外显子2、外显子3、外显子4、内含子1、内含子2或内含子3内。
[0006]在组合物的另一方面，B2M基因包含SEQ ID NO:773的序列、SEQ ID NO:773的反向互补序列、SEQ ID NO:773的变体、或SEQ ID NO:773的变体的反向互补序列。r/>[0007]在组合物的另一方面，间隔子序列包含：a.与SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸16；b.与SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸17；c.与SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸18；d.与SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸19；e.与SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸20；f.与SEQ ID NO:391
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸21；g.与SEQ ID NO:391
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552和554
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸22；h.与SEQ ID NO:391
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552和555
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸23；i.与SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸24；j.与SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸25；k.与SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸26；l.与SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸27；m.与SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸28；n.与SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸29；或o.与SEQ ID NO:391
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540、542
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸30。
[0008]在组合物的另一方面，间隔子序列包含：a.SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的核苷酸1至核苷酸16；b.SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的核苷酸1至核苷酸17；c.SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的核苷酸1至核苷酸18；d.SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的核苷酸1至核苷酸19；e.SEQ ID NO:391
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770或1019
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸21；g.SEQ ID NO:391
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552和554
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸22；h.SEQ ID NO:391
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552和555
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸23；i.SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸24；j.SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸25；k.SEQ ID NO:391
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552和556
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸27；m.SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸28；n.SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸29；或o.SEQ ID NO:391
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540、542
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸30。
[0009]在该组合物的另一方面，同向重复序列包含：a.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸36；b.与SE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含RNA指导物的组合物，其中该RNA指导物包含(i)与B2M基因内的靶序列基本上互补的间隔子序列和(ii)同向重复序列；其中该靶序列与包含序列5'
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NTTN
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3'的原型间隔子相邻基序(PAM)相邻。2.如权利要求1所述的组合物，其中该靶序列在该B2M基因的外显子1、外显子2、外显子3、外显子4、内含子1、内含子2或内含子3内。3.如权利要求1或2所述的组合物，其中该B2M基因包含SEQ ID NO:773的序列、SEQ ID NO:773的反向互补序列、SEQ ID NO:773的变体、或SEQ ID NO:773的变体的反向互补序列。4.如权利要求1至3中任一项所述的组合物，其中该间隔子序列包含：a.与SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸16；b.与SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸17；c.与SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸18；d.与SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸19；e.与SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸20；f.与SEQ ID NO:391
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸21；g.与SEQ ID NO:391
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552和554
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸22；h.与SEQ ID NO:391
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552和555
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸23；i.与SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸24；j.与SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸25；k.与SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸26；l.与SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸27；m.与SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸28；n.与SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸29；或o.与SEQ ID NO:391
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540、542
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552和556
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770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸30。5.如权利要求1至4中任一项所述的组合物，其中该间隔子序列包含：
a.SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的核苷酸1至核苷酸16；b.SEQ ID NO:391
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770或1019
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1218中任一个的核苷酸1至核苷酸17；c.SEQ ID NO:391
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1218中任一个的核苷酸1至核苷酸18；d.SEQ ID NO:391
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1218中任一个的核苷酸1至核苷酸19；e.SEQ ID NO:391
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1218中任一个的核苷酸1至核苷酸20；f.SEQ ID NO:391
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸21；g.SEQ ID NO:391
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552和554
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸22；h.SEQ ID NO:391
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552和555
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸23；i.SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸24；j.SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸25；k.SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸26；l.SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸27；m.SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸28；n.SEQ ID NO:391
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸29；或o.SEQ ID NO:391
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540、542
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552和556
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770中任一个的核苷酸1至核苷酸30。6.如权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中该同向重复序列包含：a.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸36；b.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸2至核苷酸36；c.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸3至核苷酸36；d.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸4至核苷酸36；e.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸5至核苷酸36；f.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸6至核苷酸36；g.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸7至核苷酸36；h.与SEQ ID NO:1
‑
8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸8至核苷酸36；i.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸9至核苷酸36；j.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸10至核苷酸36；k.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸11至核苷酸36；l.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸12至核苷酸
36；m.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸13至核苷酸36；n.与SEQ ID NO:1
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8中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸14至核苷酸36；o.与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸34；p.与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸2至核苷酸34；q.与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸3至核苷酸34；r.与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸4至核苷酸34；s.与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸5至核苷酸34；t.与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸6至核苷酸34；u.与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸7至核苷酸34；v.与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸8至核苷酸34；w.与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸9至核苷酸34；x.与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸10至核苷酸34；y.与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸11至核苷酸34；z.与SEQ ID NO:9的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸12至核苷酸34；或aa.与SEQ ID NO:10的序列或其一部分具有至少90％同一性的序列。7.如权利要求1至6中任一项所述的组合物，其中该同向重复序列包含：a.SEQ ID NO:1
‑
8中任一个的核苷酸1至核苷酸36；b.SEQ ID NO:1
‑
8中任一个的核苷酸2至核苷酸36；c.SEQ ID NO:1
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8中任一个的核苷酸3至核苷酸36；d.SEQ ID NO:1
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8中任一个的核苷酸4至核苷酸36；e.SEQ ID NO:1
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8中任一个的核苷酸5至核苷酸36；f.SEQ ID NO:1
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8中任一个的核苷酸6至核苷酸36；g.SEQ ID NO:1
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8中任一个的核苷酸7至核苷酸36；h.SEQ ID NO:1
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8中任一个的核苷酸8至核苷酸36；i.SEQ ID NO:1
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8中任一个的核苷酸9至核苷酸36；j.SEQ ID NO:1
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8中任一个的核苷酸10至核苷酸36；k.SEQ ID NO:1
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8中任一个的核苷酸11至核苷酸36；l.SEQ ID NO:1
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8中任一个的核苷酸12至核苷酸36；m.SEQ ID NO:1
‑
8中任一个的核苷酸13至核苷酸36；n.SEQ ID NO:1
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8中任一个的核苷酸14至核苷酸36；o.SEQ ID NO:9的核苷酸1至核苷酸34；p.SEQ ID NO:9的核苷酸2至核苷酸34；q.SEQ ID NO:9的核苷酸3至核苷酸34；r.SEQ ID NO:9的核苷酸4至核苷酸34；s.SEQ ID NO:9的核苷酸5至核苷酸34；t.SEQ ID NO:9的核苷酸6至核苷酸34；
u.SEQ ID NO:9的核苷酸7至核苷酸34；v.SEQ ID NO:9的核苷酸8至核苷酸34；w.SEQ ID NO:9的核苷酸9至核苷酸34；x.SEQ ID NO:9的核苷酸10至核苷酸34；y.SEQ ID NO:9的核苷酸11至核苷酸34；z.SEQ ID NO:9的核苷酸12至核苷酸34；或aa.SEQ ID NO:10或其一部分。8.如权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中该同向重复序列包含：a.与SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸36；b.与SEQ ID NO:788
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805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸2至核苷酸36；c.与SEQ ID NO:788
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805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸3至核苷酸36；d.与SEQ ID NO:788
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805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸4至核苷酸36；e.与SEQ ID NO:788
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805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸5至核苷酸36；f.与SEQ ID NO:788
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805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸6至核苷酸36；g.与SEQ ID NO:788
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805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸7至核苷酸36；h.与SEQ ID NO:788
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805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸8至核苷酸36；i.与SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸9至核苷酸36；j.与SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸10至核苷酸36；k.与SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸11至核苷酸36；l.与SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸12至核苷酸36；m.与SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸13至核苷酸36；n.与SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸14至核苷酸36；或o.与SEQ ID NO:806的序列或其一部分具有至少90％同一性的序列。9.如权利要求1至5或8中任一项所述的组合物，其中该同向重复序列包含：a.SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的核苷酸1至核苷酸36；
b.SEQ ID NO:788
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805中任一个的核苷酸2至核苷酸36；c.SEQ ID NO:788
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805中任一个的核苷酸3至核苷酸36；d.SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的核苷酸4至核苷酸36；e.SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的核苷酸5至核苷酸36；f.SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的核苷酸6至核苷酸36；g.SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的核苷酸7至核苷酸36；h.SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的核苷酸8至核苷酸36；i.SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的核苷酸9至核苷酸36；j.SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的核苷酸10至核苷酸36；k.SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的核苷酸11至核苷酸36；l.SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的核苷酸12至核苷酸36；m.SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的核苷酸13至核苷酸36；n.SEQ ID NO:788
‑
805中任一个的核苷酸14至核苷酸36；或o.SEQ ID NO:806或其一部分。10.如权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中该同向重复序列包含：a.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸36；b.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸2至核苷酸36；c.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸3至核苷酸36；d.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸4至核苷酸36；e.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸5至核苷酸36；f.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸6至核苷酸36；g.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸7至核苷酸36；h.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸8至核苷酸36；i.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸9至核苷酸36；j.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸10至核苷酸36；k.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸11至核苷酸36；l.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸12至核苷酸36；m.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸13至核苷酸36；n.与SEQ ID NO:807具有至少90％同一性的序列的核苷酸14至核苷酸36；或o.与SEQ ID NO:808或SEQ ID NO:809的序列或其一部分具有至少90％同一性的序列。11.如权利要求1至5或10中任一项所述的组合物，其中该同向重复序列包含：a.SEQ ID NO:807的核苷酸1至核苷酸36；b.SEQ ID NO:807的核苷酸2至核苷酸36；c.SEQ ID NO:807的核苷酸3至核苷酸36；d.SEQ ID NO:807的核苷酸4至核苷酸36；e.SEQ ID NO:807的核苷酸5至核苷酸36；f.SEQ ID NO:807的核苷酸6至核苷酸36；g.SEQ ID NO:807的核苷酸7至核苷酸36；h.SEQ ID NO:807的核苷酸8至核苷酸36；
i.SEQ ID NO:807的核苷酸9至核苷酸36；j.SEQ ID NO:807的核苷酸10至核苷酸36；k.SEQ ID NO:807的核苷酸11至核苷酸36；l.SEQ ID NO:807的核苷酸12至核苷酸36；m.SEQ ID NO:807的核苷酸13至核苷酸36；n.SEQ ID NO:807的核苷酸14至核苷酸36；或o.SEQ ID NO:808或SEQ ID NO:809或其一部分。12.如权利要求1至5中任一项所述的组合物，其中该同向重复序列包含：a.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸36；b.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸2至核苷酸36；c.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸3至核苷酸36；d.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸4至核苷酸36；e.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸5至核苷酸36；f.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸6至核苷酸36；g.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸7至核苷酸36；h.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸8至核苷酸36；i.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸9至核苷酸36；j.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸10至核苷酸36；k.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸11至核苷酸36；l.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸12至核苷酸36；m.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸13至核苷酸36；n.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸14至核苷酸36；o.与SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸15至核苷酸36；或p.与SEQ ID NO:812的序列或其一部分具有至少90％同一性的序列。
13.如权利要求1至5或12中任一项所述的组合物，其中该同向重复序列包含：a.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸1至核苷酸36；b.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸2至核苷酸36；c.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸3至核苷酸36；d.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸4至核苷酸36；e.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸5至核苷酸36；f.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸6至核苷酸36；g.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸7至核苷酸36；h.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸8至核苷酸36；i.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸9至核苷酸36；j.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸10至核苷酸36；k.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸11至核苷酸36；l.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸12至核苷酸36；m.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸13至核苷酸36；n.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸14至核苷酸36；o.SEQ ID NO:810或SEQ ID NO:811的核苷酸15至核苷酸36；或p.SEQ ID NO:812或其一部分。14.如权利要求1至13中任一项所述的组合物，其中该间隔子序列与SEQ ID NO:11
‑
390或819
‑
1018中任一个的序列的互补序列基本上互补。15.如权利要求1所述的组合物，其中该PAM包含序列5
’‑
ATTA
‑3’
、5
’‑
ATTT
‑3’
、5
’‑
ATTG
‑3’
、5
’‑
ATTC
‑3’
、5
’‑
TTTA
‑3’
、5
’‑
TTTT
‑3’
、5
’‑
TTTG
‑3’
、5
’‑
TTTC
‑3’
、5
’‑
GTTA
‑3’
、5
’‑
GTTT
‑3’
、5
’‑
GTTG
‑3’
、5
’‑
GTTC
‑3’
、5
’‑
CTTA
‑3’
、5
’‑
CTTT
‑3’
、5
’‑
CTTG
‑3’
或5
’‑
CTTC
‑3’
。16.如权利要求1或15所述的组合物，其中该靶序列紧邻该PAM序列。17.如权利要求1至16中任一项所述的组合物，其中该组合物进一步包含Cas12i多肽。18.如权利要求17所述的组合物，其中该Cas12i多肽是：a.Cas12i2多肽，其包含与SEQ ID NO:772、SEQ ID NO:782、SEQ ID NO:783、SEQ ID NO:784、SEQ ID NO:785、或SEQ ID NO:786的序列具有至少90％同一性的序列；b.Cas12i4多肽，其包含与SEQ ID NO:814、SEQ ID NO:815、或SEQ ID NO:816的序列具有至少90％同一性的序列；c.Cas12i1多肽，其包含与SEQ ID NO:817的序列具有至少90％同一性的序列；或d.Cas12i3多肽，其包含与SEQ ID NO:818的序列具有至少90％同一性的序列。19.如权利要求18所述的组合物，其中该Cas12i多肽是：a.Cas12i2多肽，其包含SEQ ID NO:772、SEQ ID NO:782、SEQ ID NO:783、SEQ ID NO:784、SEQ ID NO:785、或SEQ ID NO:786的序列；b.Cas12i4多肽，其包含SEQ ID NO:814、SEQ ID NO:815、或SEQ ID NO:816的序列；c.Cas12i1多肽，其包含SEQ ID NO:817的序列；或d.Cas12i3多肽，其包含SEQ ID NO:818的序列。20.如权利要求17至19中任一项所述的组合物，其中该RNA指导物和该Cas12i多肽形成核糖核蛋白复合物。
21.如权利要求20所述的组合物，其中该核糖核蛋白复合物与靶核酸结合。22.如权利要求20或21所述的组合物，其中该组合物存在于细胞内。23.如权利要求17至22中任一项所述的组合物，其中该RNA指导物和该Cas12i多肽被编码在载体中，例如表达载体中。24.如权利要求23所述的组合物，其中该RNA指导物和该Cas12i多肽被编码在单一载体中，或者该RNA指导物被编码在第一载体中并且该Cas12i多肽被编码在第二载体中。25.一种RNA指导物，其包含(i)与B2M基因内的靶序列基本上互补的间隔子序列和(ii)同向重复序列。26.如权利要求25所述的RNA指导物，其中该靶序列在该B2M基因的外显子1、外显子2、外显子3、外显子4、内含子1、内含子2或内含子3内。27.如权利要求25或26所述的RNA指导物，其中该B2M基因包含SEQ ID NO:773的序列、SEQ ID NO:773的反向互补序列、SEQ ID NO:773的变体、或SEQ ID NO:773的变体的反向互补序列。28.如权利要求25至27中任一项所述的RNA指导物，其中该间隔子序列包含：a.与SEQ ID NO:391
‑
770或1019
‑
1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸16；b.与SEQ ID NO:391
‑
770或1019
‑
1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸17；c.与SEQ ID NO:391
‑
770或1019
‑
1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸18；d.与SEQ ID NO:391
‑
770或1019
‑
1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸19；e.与SEQ ID NO:391
‑
770或1019
‑
1218中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸20；f.与SEQ ID NO:391
‑
770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸21；g.与SEQ ID NO:391
‑
552和554
‑
770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸22；h.与SEQ ID NO:391
‑
552和555
‑
770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸23；i.与SEQ ID NO:391
‑
552和556
‑
770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸24；j.与SEQ ID NO:391
‑
552和556
‑
770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸25；k.与SEQ ID NO:391
‑
552和556
‑
770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸26；l.与SEQ ID NO:391
‑
552和556
‑
770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸27；m.与SEQ ID NO:391
‑
552和556
‑
770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核
苷酸1至核苷酸28；n.与SEQ ID NO:391
‑
552和556
‑
770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸29；或o.与SEQ ID NO:391
‑
540、542
‑
552和556
‑
770中任一个的序列具有至少90％同一性的序列的核苷酸1至核苷酸30。29.如权利要求25至28中任一项所述的RNA指导物，其中该间隔子序列包含：a.SEQ ID NO:391
‑
770或1019
‑
1218中任一个的核苷酸1至核苷酸16；b.SEQ ID NO:391
‑
770或1019
‑
1218中任一个的核苷酸1至核苷酸17；c.SEQ ID NO:391
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：Q，
申请(专利权)人：阿伯生物技术公司，
类型：发明
国别省市：