本发明专利技术公开了干酪乳杆菌在制备增强鱼抗寒能力的制剂中的应用。本发明专利技术发现干酪乳杆菌可成功进入并短时间定植在斑马鱼肠道中，通过改善斑马鱼肠道内的微生物组成结构，从而增强斑马鱼的低温耐受能力，为促进鱼类健康养殖提供新的方向。本发明专利技术公开了干酪乳杆菌对鱼类抗寒过程具有干预效果，对于为促进鱼类健康养殖提供新的方向；本发明专利技术对本领域了解益生菌的功效以及指导益生菌使用方面都具有重要的意义。效以及指导益生菌使用方面都具有重要的意义。效以及指导益生菌使用方面都具有重要的意义。
【技术实现步骤摘要】
干酪乳杆菌在制备增强鱼抗寒能力的制剂中的应用
[0001]本专利技术涉及鱼类健康养殖
，尤其涉及干酪乳杆菌在制备增强鱼抗寒能力的制剂中的应用。
技术介绍
[0002]微生物广泛存在于自然界，其中肠道微生物是一个庞大复杂的体内生态系统，被视为机体整体构成中至关重要的一部分。肠道中的许多细菌是有益的，与宿主之间存在着互利共生的关系，具有与内分泌器官相似的功能，可通过处理复杂化合物、提供必需营养素、解毒有害分子、调节发育和免疫等途径使宿主受益。
[0003]在硬骨鱼类中，微生物主要寄生于皮肤、鳃、肠道以及肠道内容物，其中肠道中的微生物种类最为丰富，而影响鱼类肠道菌群形成的因素也有很多，包括：鱼类的发育阶段、肠道结构、饲养条件、应激因子(化学药物、抗生素、杀虫剂)以及环境因子(比如水温)等。研究表明，鱼类肠道菌群的数量和种类都会随着季节而变动。
[0004]应激指的是机体在受到有害作用的刺激后引发的非特异防御反应。低温作为重要的环境应激因子，会导致生物的体温迅速下降，并引发生理及行为的级联放大反应。鱼类作为变温动物，其生长、繁殖、能量代谢等对温度的响应更为敏感。许多优良水产养殖鱼类具有不耐低温的缺点，冬季冷害常导致巨大经济损失，严重制约着我国水产养殖业的发展。
[0005]肠道微生物与环境应激存在着双向的互作机制，环境应激可通过神经内分泌以及改变肠道形态等途径来影响肠道菌群的结构；通过植入抗生素、益生菌可调节机体内肠道微生物组成结构，进而促进宿主抵抗环境刺激。研究表明，肠道菌群可通过多种机制向大脑发出信号，给大鼠饲喂乳酸菌能够显著减少脊髓神经中FOS蛋白(一种与应激有关的特征表达蛋白)的数量，能够在神经水平减轻应激对动物造成的不良影响。
[0006]缺少肠道菌群的小鼠会出现机体温度调节功能的损伤，通过饲喂细菌代谢产物丁酸盐可提高小鼠体内的生热能力，从而逆转肠道菌群缺失所产生的不利影响，说明肠道菌群在哺乳动物机体抵抗寒冷的产热过程中扮演着关键的诱导信号角色。
[0007]由于肠道菌群的可塑性，利用益生菌和益生元调节肠道微生物稳态已形成巨大的产业规模，特别是乳杆菌、乳酸杆菌、双歧杆菌等已广泛用于水产养殖中。
技术实现思路
[0008]为解决上述技术问题，本专利技术的目的是提供干酪乳杆菌在制备增强鱼抗寒能力的制剂中的应用，为水产鱼类的健康养殖提供了方向。
[0009]本专利技术的第一个目的是提供干酪乳杆菌在制备增强鱼抗寒能力的制剂中的应用。
[0010]优选，所述的干酪乳杆菌是干酪乳杆菌GDMCC1.80，其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，编号为GDMCC1.80。
[0011]优选，所述的干酪乳杆菌可以用MRS肉汤培养基培养获得。进一步优选是用MRS肉汤培养基于37℃培养48h，用无菌PBS洗三次，菌体细胞溶于无菌PBS，浓度为109～10
10
CFU/
mL。
[0012]优选，所述的鱼为斑马鱼或其它不耐低温鱼，特别是幼苗期到1月龄的斑马鱼或其它不耐低温鱼。
[0013]本专利技术的第二个目的是提供一种增强鱼抗寒能力的方法，其包括以下步骤：
[0014]将干酪乳杆菌添加到鱼生长环境中进行培养，增加鱼抗寒能力。
[0015]优选，所述的干酪乳杆菌是干酪乳杆菌GDMCC1.80，其保藏于广东省微生物菌种保藏中心，编号为GDMCC1.80。
[0016]优选，所述的鱼为斑马鱼或其它不耐低温鱼，特别是幼苗期到1月龄的斑马鱼或其它不耐低温鱼。
[0017]优选，干酪乳杆菌以终浓度为106～107CFU/mL直接添加于养鱼水中，每隔24h换新的养鱼水并添加新的菌液，添加干酪乳杆菌后立即喂食。
[0018]优选，干酪乳杆菌通过定植在鱼体肠道中，并通过改善肠道内的微生物组成结构，从而增强低温耐受能力。
[0019]本专利技术至少具有以下优点：
[0020]本专利技术发现干酪乳杆菌可成功进入并短时间定植在斑马鱼肠道中，通过改善斑马鱼肠道内的微生物组成结构，从而增强斑马鱼的低温耐受能力，为促进鱼类健康养殖提供新的方向。本专利技术公开了干酪乳杆菌对鱼类抗寒过程具有干预效果，对于为促进鱼类健康养殖提供新的方向；本专利技术对本领域了解益生菌的功效以及指导益生菌使用方面都具有重要的意义。
[0021]上述说明仅是本专利技术技术方案的概述，为了能够更清楚了解本专利技术的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下为本专利技术的较佳实施例并配合详细附图说明如后。
附图说明
[0022]图1是干酪乳杆菌对斑马鱼幼苗低温耐受能力的影响：(a)低温处理不同时间后，对照组和干酪乳杆菌处理组斑马鱼的存活率柱状图；(b)PBS对照组斑马鱼在10℃低温暴露12h后的照片；(c)干酪乳杆菌处理组斑马鱼在10℃低温暴露12h后的照片。
[0023]图2是干酪乳杆菌对1月龄斑马鱼低温耐受能力的影响：(a)低温水浴过程中，养鱼水的温度变化情况；(b)低温处理不同时间后，对照组和干酪乳杆菌处理组斑马鱼的存活曲线图。
[0024]图3是干酪乳杆菌对斑马鱼成鱼肠道菌群组成结构的影响：(a)对照组和干酪乳杆菌处理组斑马鱼的肠道菌群在Phylum(门)水平的分布；(b)对照组和干酪乳杆菌处理组的肠道菌群在Genus(属)水平的差异比较。
具体实施方式
[0025]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下将结合说明书附图和较优的实施例对本专利技术作更全面、细致地描述，如无特殊说明，各实施例及试验例中所用的设备和试剂均可从商业途径得到或者可通过现有方法制备得到。此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。
[0026]本专利技术提供一种增强鱼类耐寒能力的益生菌及其使用方法，所述益生菌为干酪乳
杆菌，来源于广东省微生物菌种保藏中心(GDMCC)，编号为GDMCC1.80，本领域技术人员可以从该菌种库购买到。
[0027]本专利技术中，培养干酪乳杆菌所用的培养基如下：
[0028]MRS液体培养基配方为：酪蛋白胨10.0g，牛肉粉10.0g，酵母浸粉5.0g，葡萄糖20.0g，硫酸镁0.1g，乙酸钠5.0g，柠檬酸铵2.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸锰0.05g，吐温80 1.0g，蒸馏水1000mL，将各成分混合均匀，调pH 6.2
±
0.2，121℃灭菌15min。
[0029]MRS固体培养基每升添加15g琼脂。
[0030]本专利技术中，干酪乳杆菌GDMCC1.80的复苏与保存：
[0031](1)在超净工作台将干酪乳杆菌冻干粉复苏。用无菌枪头吸取300μL MRS液体培养基，滴入冻干管中，轻轻振荡至其溶解。
[0032](2)吸取全部菌悬液，接种在MRS固体培养基平板上，于37℃静止培养48h。
[0033](3)待长出单克隆菌落后，用无菌枪头将单克隆挑至装有500μL MRS液体培养基的1.5mL离心管中，于37℃静止培养4本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.干酪乳杆菌在制备增强鱼抗寒能力的制剂中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的干酪乳杆菌是干酪乳杆菌GDMCC1.80。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的干酪乳杆菌用MRS肉汤培养基培养获得。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，是用MRS肉汤培养基于37℃培养48h，用无菌PBS洗三次，菌体细胞溶于无菌PBS，浓度为109～10
10
CFU/mL。5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的鱼为斑马鱼或其它不耐低温鱼。6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的鱼是幼苗期到1月龄的斑马鱼或...
【专利技术属性】
技术研发人员：崔宗斌，任静，葛国栋，
申请(专利权)人：广东省科学院微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：
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