【技术实现步骤摘要】
：本专利技术涉及食品安全防控领域，具体涉及小肠结肠炎耶尔森氏菌裂解性噬菌体及其应用。
技术介绍
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技术介绍
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1、小肠结肠炎耶尔森氏菌作为一种食源性的人畜共患病病原菌，广泛存在于各种野生及家养动物的体内。动物被感染后可长期携带该菌并通过粪便排出，从而导致食品、水源和环境等的污染。在动物屠宰加工过程、运输、销售过程中都可能使肉产品受到污染；奶畜的乳汁也可能被小肠结肠炎耶尔森氏菌污染。
2、小肠结肠炎耶尔森氏菌所引起的疾病被称为耶尔森氏菌病，它是欧盟第三大最常报告的细菌性食源性人畜共患病。该疾病不仅能引发发烧、腹痛、带血腹泻、频繁呕吐等症状，还能引起呼吸系统、心血管系统、骨骼、结缔组织和全身性疾病或者其他并发症，甚至死亡。因为其具有嗜冷性，在4℃低温环境下稳定繁殖并产生致病性热稳定肠毒素(yst)，因此该疾病又被称为“冰箱病”。近年来，耶尔森氏菌病在全球广泛流行，其中欧洲最为严重，其次，新西兰的耶尔森氏菌病通报率相对较高，且这一比例还在上升。2013年至2017年期间，新西兰耶尔森氏菌病通报率几乎翻了一番，从每10万人口感染10.8人增加到19.2人。新西兰报告的此类病例中，大约75％是由食物传播导致的，其中50％以上是由猪肉传播导致的。我国在20世纪80年代也遭受过2次由耶尔森氏菌病引起的大流行。小肠结肠炎耶尔森氏菌易侵袭幼龄期抵抗力比较低下的幼小动物，幼鼠、猪仔、婴幼儿等在相关文献中都有较高的感染率。调查数据显示，2010-2015年全国10省共计7304例5岁以下儿童腹泻病例中，从43例患病儿童粪便分
3、小肠结肠炎耶尔森菌引起的胃肠道感染通常是自限性的，即可通过机体免疫系统自愈，但是在免疫功能较低的个体中，败血症或浸润性感染的症状尤为突出，随后病灶转移，通常累及肝脏和脾脏，这些患者的死亡率可高达50％，需使用抗菌药物及时治疗。小肠结肠炎耶尔森菌的固有耐药机制复杂，再加上抗生素在临床和畜牧生产上的滥用，使得病原菌对临床上的许多抗生素都不再敏感，抗生素正在逐渐失去效果。这一现象迫使科研人员寻找新的治疗策略，从而达到预防和治疗耶尔菌森病的目的。
4、噬菌体最早发现于1915年，是一类具有高度特异性的“细菌杀手”。噬菌体主要分为裂解性噬菌体和溶原性噬菌体，其中，裂解性噬菌体通过附着到宿主细胞、注入噬菌体dna、dna复制、组装蛋白质、用头部和尾部蛋白质包装核酸，裂解宿主细胞以释放新的噬菌体来进行复制；溶原噬菌体可通过将dna整合到宿主基因组的方式进行繁殖。将噬菌体作为抗菌剂的疗法被称为噬菌体疗法，该疗法在20世纪20年代广泛应用；随后因抗生素的兴起，逐渐替代了噬菌体疗法的位置。尽管抗生素在抗菌方面效果显著，但多重耐药菌株的出现让科学家将重新关注噬菌体疗法。目前，噬菌体的应用已经涉及农业、水产养殖、食品安全等多个领域。其中，自2006年美国食品药品监督管理局(fda)批准了首个可应用于食品的噬菌体产品以来，噬菌体在食品中的应用已经取得了相当可观的进展。目前噬菌体主要应用于食品工业的三个领域中：(1)在初级生产中(动植物的生长过程中，收获阶段前)添加的噬菌体以消除植物或动物疾病的可能性；(2)在生物卫生处理中，噬菌体及裂解酶主要用于防止致病菌在食品生产加工中使用的设施设备表面形成生物膜。(3)在保存过程中，噬菌体可通过抑制食物中致病细菌的生长来延长产品的保质期。
5、目前噬菌体疗法主要受到以下几个方面的限制：
6、首先，由于噬菌体的高度特异性，其裂解谱相对狭窄，特定噬菌体产品抑制细菌的能力有限；其次，部分噬菌体具有溶原能力，溶原噬菌体只有在遇到环境胁迫的条件下，才会进入到裂解周期中，因此，溶原噬菌体并不能快速有效的杀灭宿主菌，还会引起耐药、致病基因的水平转移；最后，噬菌体制剂的稳定性也会影响噬菌体的实际应用，在食品运输及销售的过程中，需保持噬菌体效价在有效的范围内。目前缺乏能够同时解决以上应用缺陷并且遗传信息和理化性质清晰的小肠结肠炎耶尔森氏菌噬菌体。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服上述技术的不足之处，从而提供三株新型小肠结肠炎耶尔森氏菌噬菌体及其应用。本专利技术的噬菌体具有良好的热稳定性、ph稳定性，且具有较好的细菌生长及生物膜抑制效果，可作为单一抑菌剂或噬菌体组合剂成分用于抑制食品中小肠结肠炎耶尔森氏菌的生长。
2、为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为：
3、本专利技术的第一个目的是提供了三株小肠结肠炎耶尔森氏菌的新型烈性噬菌体：
4、yersinia enterocolitica phage vb_yenp_ww1于2023年11月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号为：gdmcc no：64014-b1。
5、yersinia enterocolitica phage vb_yenp_ww2于2023年11月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号为：gdmcc no：64015-b1。
6、yersinia enterocolitica phage vb_yenp_wx1于2023年11月13日保藏于广东省微生物菌种保藏中心(gdmcc)，地址：广州市先烈中路100号大院59号楼5楼，邮编：510070，保藏编号为：gdmcc no：64016-b1。。
7、本专利技术人从广东省广州市菜市场采集的污水水样中，分离得到小肠结肠炎耶尔森氏菌噬菌体ww1(yersinia enterocolitica phage vb_yenp_ww1)、ww2(yersiniaenterocolitica phage vb_yenp_ww2)、wx1(yersinia enterocolitica phage vb_yenp_wx1)，本专利技术的噬菌体均属于短尾噬菌体科烈性噬菌体。
8、经过基因组相似性比对，发现本专利技术中的噬菌体与现有噬菌体全基因组相似性低于95％，证明以上噬菌体均属于新型噬菌体。
9、本专利技术的噬菌体ww1潜伏期为20min，裂解量为37pfu/cell；ww2潜伏期为5min，裂解量为53pfu/cell；wx1潜伏期为10min，裂解量为40pfu/cell。
10、本专利技术的噬菌体ww1、ww2、wx1均具有良好的热稳定性和ph稳定性，且具有较宽的宿主范围。
11、本专利技术的第二个目的在于提供上述噬菌体ww1、ww2、wx1在制备抑制小肠结肠炎耶尔森氏菌的噬菌体制剂中的应用。
12、本专利技术的第三个目的是提供一种抑制小肠结肠炎耶尔森氏菌的噬菌体制剂，其特征在于，含有上述噬菌体ww1、ww2或wx1作为活性成分。
13、优选地，所述的噬菌体制剂是抑制人体、食品或环境中小肠结肠炎耶本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.小肠结肠炎耶尔森氏菌的噬菌体，其特征在于，为以下任一所示：
2.权利要求1所述的噬菌体在制备抑制小肠结肠炎耶尔森氏菌的噬菌体制剂中的应用。
3.一种抑制小肠结肠炎耶尔森氏菌的噬菌体制剂，其特征在于，含有权利要求1所述的噬菌体作为活性成分。
4.根据权利要求1所述的噬菌体制剂，其特征在于，所述的噬菌体制剂是抑制人体、食品或环境中小肠结肠炎耶尔森氏菌的制剂。
5.权利要求1中的Yersinia enterocolitica phage vB_YenP_WW1的特征分子靶标，其特征在于，核酸序列如SEQ ID NO.8所示。
6.Yersinia enterocolitica phage vB_YenP_WW2的特征分子靶标，其特征在于，核酸序列如SEQ ID NO.9所示。
7.Yersinia enterocolitica phage vB_YenP_WX1的特征分子靶标，其核酸序列如SEQID NO.
8.一种鉴定权利要求1中所述的噬菌体的鉴定引物，其特征在于，当鉴定噬菌体WW1时，其鉴定引物
9.一种鉴定权利要求1中所述的噬菌体的试剂盒，其特征在于，含有权利要求8所述的鉴定引物。
10.一种鉴定权利要求1中所述的噬菌体的鉴定方法，其特征在于，利用权利要求8所述的鉴定引物对待测样品进行鉴定，如果能够扩增出相应的产物，则为相应的噬菌体。
...【技术特征摘要】
1.小肠结肠炎耶尔森氏菌的噬菌体，其特征在于，为以下任一所示：
2.权利要求1所述的噬菌体在制备抑制小肠结肠炎耶尔森氏菌的噬菌体制剂中的应用。
3.一种抑制小肠结肠炎耶尔森氏菌的噬菌体制剂，其特征在于，含有权利要求1所述的噬菌体作为活性成分。
4.根据权利要求1所述的噬菌体制剂，其特征在于，所述的噬菌体制剂是抑制人体、食品或环境中小肠结肠炎耶尔森氏菌的制剂。
5.权利要求1中的yersinia enterocolitica phage vb_yenp_ww1的特征分子靶标，其特征在于，核酸序列如seq id no.8所示。
6.yersinia enterocolitica phage vb_yenp_ww2的特征分子靶标，其特征在于，核酸序列如seq id no.9所示。
7.yersinia enteroco...
【专利技术属性】
技术研发人员：王涓，王梓萌，徐天翔，丁郁，吴清平，张菊梅，刘鸣，
申请(专利权)人：广东省科学院微生物研究所广东省微生物分析检测中心，
类型：发明
国别省市：
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