一种用于治疗偏瘫的干细胞提取方法技术

本发明专利技术公开了一种用于治疗偏瘫的干细胞提取方法，涉及到生物领域，包括以下操作步骤：原材料准备，准备若干健康大鼠和新鲜健康脐带；嗅上皮神经干细胞提取，选取1

【技术实现步骤摘要】
一种用于治疗偏瘫的干细胞提取方法


[0001]本专利技术属于生物
，具体为一种用于治疗偏瘫的干细胞提取方法。

技术介绍

[0002]偏瘫又称半身不遂，是指一侧上、下肢体瘫痪，常伴有同侧中枢性面瘫和舌瘫，如为优势半球病变，则伴有失语症，偏瘫患者的病变多在对侧大脑半球内囊附近，见于脑血管病、炎症、肿瘤等，内囊损伤后可表现为“三偏”综合征，即偏瘫、偏盲、偏身感觉障碍。
[0003]引发偏瘫的最常见原因为脑卒中，多为缺血性脑卒中，此外，出血性卒中、自身免疫性疾病、外伤等疾病，也可通过损伤脑部相关神经进而发生偏瘫，目前，人们在对患者进行治疗偏瘫时，一般通过采用药物治疗，通过药物改善神经功能缺损，促进神经功能的恢复，从而治疗患者偏瘫，但是，采用药物治疗，治疗周期较长，且治疗效果不明显，且在治疗过程中，需要伴随长期的物理恢复治疗，增加了人们的负担，因此，人们通过大鼠的嗅上皮神经干细胞联合婴幼儿的脐带间充质干细胞，采用生物技术对偏瘫患者进行治疗，通过嗅上皮神经干细胞联合脐带间充质干细胞的分化、再生性能治疗人体偏瘫，但是，嗅上皮神经干细胞联合脐带间充质干细胞的提取培养却成为较大难题，急需解决。

技术实现思路

[0004]针对上述情况，为克服现有技术的缺陷，本专利技术提供一种用于治疗偏瘫的干细胞提取方法，有效的解决了目前
技术介绍
中的问题。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种用于治疗偏瘫的干细胞提取方法，包括以下操作步骤：
[0006]S1、原材料准备，准备若干健康大鼠和新鲜健康脐带；
[0007]S2、嗅上皮神经干细胞提取，选取1
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2只健康大鼠，放入密闭腔室中，并向密闭腔室中持续充入CO2，使大鼠窒息死亡，将死亡的大鼠的头部和躯体分离，并去除大鼠头部鼻甲和鼻中隔，然后用显微镊取出大鼠的嗅粘膜并放入玻璃培养皿中，向玻璃培养皿中倒入中性蛋白酶对嗅黏膜组织进行消化，再采用显微镊将嗅黏膜组织的上皮层与固有层分离并分别放入两个玻璃培养皿中，使用巴尔德斯管将上皮层轻轻吹打，向固有层所在的玻璃培养皿中导入胶原酶进行消化，用胶原酶消化后，将上皮层与固有层混合后，轻轻吹打，通过1000r/s离心10min后，用含10％FBS的DMEMF12培养液重悬，于培养皿中贴壁培养，2
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3天换一次液，进行原代培养，原代培养8
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12天后，将贴壁细胞用胰酶消化成单细胞悬液，以细胞密度为5x104个/cm2种植于已用PLL包被的玻璃培养皿中贴壁培养，培养液换为无血清促增殖培养液进行传代培养，每2
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3天换液一次，获得嗅上皮神经干细胞以作备用；
[0008]S3、脐带间充质干细胞提取，采用PBS将新鲜健康的脐带冲洗干净，采用剪刀镊子剔去其中的血管，并剥出里面的华氏胶组织，将所得组织使用剪碎装置充分剪碎至1mm大小，加入α
‑
MEM培养液置于37℃，5％的CO2培养箱中进行培养，一周后，细胞开始迅速增殖，形成大小不等的细胞集落，待细胞长满后，倒入0.25％胰蛋白酶进行消化传代培养，从而获
得脐带间充质干细胞以作备用。
[0009]优选的，S1中所述大鼠为雄性大鼠，且大鼠体重为250
‑
300g。
[0010]优选的，S2中所述无血清促增殖培养液采用DMEMF12、1％ITS、20ng/mlbFGF、40ng/mlEGF、青霉素及链霉素制成。
[0011]优选的，S3中所述α
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MEM培养液采用10％FBS，100U/ml青霉素和100U/ml链霉素制成。
[0012]优选的，所述剪碎装置包括矩形架(1)、第一气缸(2)、滑轨(3)、滑块(4)、单向螺纹杆(5)、伺服电机(6)、U形板(7)、圆辊(8)及多个条形切刀(9)，所述第一气缸(2)竖直设置在矩形架(1)的内部，且第一气缸(2)的上端与矩形架(1)的上内侧壁固定连接，所述第一气缸(2)的下端与滑轨(3)的上侧中部固定连接，所述滑块(4)可滑动设置在滑轨(3)中，所述单向螺纹杆(5)横向设置在滑轨(3)中并与滑块(4)螺纹连接，且单向螺纹杆(5)的左右两端均通过轴承分别与滑轨(3)的左右两侧转动连接，所述单向螺纹杆(5)的右端延伸至滑轨(3)的外部，所述伺服电机(6)固定设置在滑轨(3)的右侧，且伺服电机(6)输出端通过联轴器与单向螺纹杆(5)的右端固定连接，所述滑块(4)的下端与U形板(7)的上侧中部固定连接，所述圆辊(8)纵向设置在U形板(7)的内部下方，且圆辊(8)的前后两端均通过转轴分别与U形板(7)的前后两侧转动连接，多个所述条形切刀(9)呈环形均匀分布在圆辊(8)的圆周侧壁四周并与圆辊(8)固定连接，所述矩形架(1)的内部下方还设置有夹持机构。
[0013]优选的，所述夹持机构包括两个第二气缸(10)和两个夹持板(11)，两个所述第二气缸(10)分别与矩形架(1)的相对两个内侧壁下方固定连接，且两个第二气缸(10)的相对两端分别与两个夹持板(11)固定连接。
[0014]优选的，所述滑轨(3)的下侧左右两端均固定连接有侧板(12)，两个所述侧板(12)之间固定连接有两个横向设置在导向杆(13)，所述U形板(7)的侧面开设有两个前后对称分布的导向孔，所述U形板(7)与两个导向杆(13)滑动设置。
[0015]本专利技术的技术效果和优点：
[0016]1、通过提取大鼠的嗅黏膜组织和婴幼儿的脐带，能够对嗅上皮神经干细胞和脐带间充质干细胞进行体外培养、分化和再生，从而能够将嗅上皮神经干细胞和脐带间充质干细胞移植至患者体内，继而治疗患者的偏瘫，治疗周期短，且效果显著，丰富了神经干细胞对人体偏瘫的治疗发展，对于治疗人体偏瘫具有重要的意义。
附图说明
[0017]图用来提供对本专利技术的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本专利技术的实施例一起用于解释本专利技术，并不构成对本专利技术的限制。在附图中：
[0018]图1为本专利技术的正面结构示意图；
[0019]图2为本专利技术的U形架和圆辊的侧面结构示意图。
[0020]图中：1、矩形架；2、第一气缸；3、滑轨；4、滑块；5、单向螺纹杆；6、伺服电机；7、U形板；8、圆辊；9、条形切刀；10、第二气缸；11、夹持板；12、U形架；13、导向杆。
具体实施方式
[0021]本专利技术提供了如图1
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2所示的一种用于治疗偏瘫的干细胞提取方法，包括以下操
作步骤：
[0022]S1、原材料准备，准备若干健康大鼠和新鲜健康脐带；
[0023]S2、嗅上皮神经干细胞提取，选取1
‑
2只健康大鼠，放入密闭腔室中，并向密闭腔室中持续充入CO2，使大鼠窒息死亡，将死亡的大鼠的头部和躯体分离，并去除大鼠头部鼻甲和鼻中隔，然后用显微镊取出大鼠的嗅粘膜并放入玻璃培养皿中，向玻璃培养皿中倒入中性蛋白酶对嗅黏膜组织进行消化，再采用显微镊将嗅黏膜组织的上皮层与固有层分离并本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于治疗偏瘫的干细胞提取方法，其特征在于：包括以下操作步骤：S1、原材料准备，准备若干健康大鼠和新鲜健康脐带；S2、嗅上皮神经干细胞提取，选取1
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2只健康大鼠，放入密闭腔室中，并向密闭腔室中持续充入CO2，使大鼠窒息死亡，将死亡的大鼠的头部和躯体分离，并去除大鼠头部鼻甲和鼻中隔，然后用显微镊取出大鼠的嗅粘膜并放入玻璃培养皿中，向玻璃培养皿中倒入中性蛋白酶对嗅黏膜组织进行消化，再采用显微镊将嗅黏膜组织的上皮层与固有层分离并分别放入两个玻璃培养皿中，使用巴尔德斯管将上皮层轻轻吹打，向固有层所在的玻璃培养皿中导入胶原酶进行消化，用胶原酶消化后，将上皮层与固有层混合后，轻轻吹打，通过1000r/s离心10min后，用含10％FBS的DMEMF12培养液重悬，于培养皿中贴壁培养，2
‑
3天换一次液，进行原代培养，原代培养8
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12天后，将贴壁细胞用胰酶消化成单细胞悬液，以细胞密度为5x104个/cm2种植于已用PLL包被的玻璃培养皿中贴壁培养，培养液换为无血清促增殖培养液进行传代培养，每2
‑
3天换液一次，获得嗅上皮神经干细胞以作备用；S3、脐带间充质干细胞提取，采用PBS将新鲜健康的脐带冲洗干净，采用剪刀镊子剔去其中的血管，并剥出里面的华氏胶组织，将所得组织使用剪碎装置充分剪碎至1mm大小，加入α
‑
MEM培养液置于37℃，5％的CO2培养箱中进行培养，一周后，细胞开始迅速增殖，形成大小不等的细胞集落，待细胞长满后，倒入0.25％胰蛋白酶进行消化传代培养，从而获得脐带间充质干细胞以作备用。2.根据权利要求1所述的一种用于治疗偏瘫的干细胞提取方法，其特征在于：S1中所述大鼠为雄性大鼠，且大鼠体重为250
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300g。3.根据权利要求2所述的一种用于治疗偏瘫的干细胞提取方法，其特征在于：S2中所述无血清促增殖培养液采用DMEMF12、1％ITS、20ng/mlbFGF、40ng/mlEGF、青霉素及链霉素制成。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：何文丽，
申请(专利权)人：上海中赛德康生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：