靶向M2巨噬细胞外囊泡（M2-EVs）lncRNA的组合物及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种M2巨噬细胞外囊泡（M2

【技术实现步骤摘要】
靶向M2巨噬细胞外囊泡(M2
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EVs)lncRNA的组合物及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种靶向M2巨噬细胞外囊泡(M2
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EVs)lncRNA的组合物及其通过调控ILC2s活化在过敏性哮喘中的应用。

技术介绍

[0002]过敏性哮喘(AA)是一种与呼吸系统症状相关的炎症性气道疾病，如呼吸短促、胸闷和咳嗽。近几十年来，哮喘的发病率显著增加，影响全球约3亿人，预计到2025年将影响4亿人，Th2细胞被认为是哮喘发病的主要原因。然而，哮喘是先天免疫和适应性免疫相互作用的结果。这两者相辅相成，共同促进气道炎症的发生。气道组织中的固有免疫细胞群(如M2巨噬细胞和ILC2s)的相互作用在Th2气道炎症的启动、引导和维持中起着非常重要的作用，并逐渐引起关注。
[0003]在过去几年中，人们越来越认识到巨噬细胞与2型固有淋巴细胞(ILC2s)的相互作用在各种疾病中发挥着关键作用。通过对环境信号或2型诱导细胞因子(如IL
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33)迅速反应，活化的ILC2s能够产生大量的2型细胞因子IL
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5和IL
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13，这些细胞因子促进嗜酸性粒细胞增多、气道重塑和粘液分泌过多。就巨噬细胞而言，它们可通过一些可溶性细胞因子、细胞与细胞接触和细胞外囊泡(EVs)发挥其免疫调节作用，EVs中蛋白质和酶用于靶向受体细胞并重新编程细胞行为，使EVs的临床潜力显著。最近，M2巨噬细胞衍生的细胞外囊泡(M2
‑
EVs)被鉴定为与肿瘤细胞的侵袭和转移相关，成为炎症和治疗相关的细胞间通讯中的关键信使。然而，目前尚不清楚失调的M2巨噬细胞介导的免疫应答是否通过EVs途径调节ILC2s活化在过敏性气道炎症中发挥致病作用。因此，我们假设ILC2s在过敏性哮喘气道炎症中的激活可由长非编码RNA(lncRNA)调节，因为，lncRNA是EVs最重要的成分之一。
[0004]lncRNA是长链非编码RNA，通常被定义为长度超过200个核苷酸的RNA分子，在哺乳动物组织中广泛表达。越来越多的证据表明，lncRNA在一系列生理和病理条件下表现出动态表达模式，并参与调节蛋白质表达与DNA甲基化修饰等。当然，lncRNA在哮喘发病机制中的参与引起了相当大的关注，因为转录组分析显示lncRNA在患有哮喘患者和动物模型外周血中异常表达。因此，M2
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EVs中lncRNA可能是改善动物哮喘症状的新治疗靶点。本研究利用微阵列芯片分析发现M2
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EVs中同源的lncRNA DACT1
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AS(ENSMUST00000132822)高表达，同时在过敏性哮喘小鼠肺组织中也呈高表达。然而，其是否调控ILC2s活化促进过敏性哮喘气道炎症仍不清楚。

技术实现思路

[0005]下面将结合本专利技术实施例中的附图，对本专利技术实施例中的技术方案进行述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0006]在本专利技术中，我们发现过敏性哮喘肺组织中存在M2
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EVs，M2
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EVs可在体内体外促进ILC2s活化。进一步研究发现lncRNA DACT1
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AS在M2
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EVs中表达增高，敲低M2
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EVs中lncRNA DACT1
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AS表达后可在体内体外抑制ILC2s活化，同时减少了炎性细胞对过敏性哮喘
小鼠气道的浸润程度。因此，本专利技术有效的验证M2
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EVs通过lncRNA DACT1
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AS参与了ILC2s活化的调控，为ILC2s的功能研究提供理论数据，为过敏性哮喘的发病机制和治疗靶点提供理论基础和临床依据。
[0007]参照图1
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11，M2巨噬细胞外囊泡lncRNA DACT1
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AS调控ILC2s活化在过敏性哮喘中的应用，其涉及序列号如表1所示。
[0008]附图说明
[0009]图1：M2巨噬细胞在哮喘气道微环境中分泌EVs。(A)用荧光显微镜检测哮喘小鼠肺组织中的EVs。(B)哮喘肺组织中分离出EVs的TEM图。(B)来自肺组织的EVs的纳米颗粒追踪分析(NTA)的代表性结果。(C)来自肺组织的EVs的CD63、CD81、HSP70和Calnexin的蛋白质印迹分析。(D)通过RT
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qPCR测定哮喘肺组织EVs的性质(每组n＝10个)。***P<0.001。
[0010]图2：M0
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EVs和M2
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EVs的制备和表征。(A)从巨噬细胞培养基中分离的M0
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EVs和M2
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EVs的TEM。(B)EVs纳米颗粒追踪分析(NTA)的代表性结果。(C)流式细胞术也证实了EVs的直径。(D)来自M0/M2巨噬细胞和M0/M2 EVs的CD9、CD81、HSP70和Calnexin的蛋白质印迹分析。(E)通过流式细胞术测定EVs中CD63的表达。
[0011]图3：M2
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EVs在体外显著促进ILC2s的功能。(A)流式细胞仪分析显示，M2
‑
EVs可同时增加IL
‑5+
ILC2s和IL
‑
13
+
ILC2s的水平，而M0
‑
EVs则不增加(n＝4～6)。(B)通过ELISA分析M0
‑
EVs和M2
‑
EVs对刺激的ILC2s中炎性细胞因子水平的影响(n＝4～6)。(C)用Ki
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67染色分析ILC2s对M0
‑
EVs和M2
‑
EVs的反应。对照组用PBS刺激，数据表示为两个独立实验的平均值
±
SEM。NS，无显著性，*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。
[0012]图4：M2
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EVs显著促进小鼠过敏性气道炎症。(A)小鼠过敏性气道炎症发展示意图。(B)H&E染色测定气管周围区域炎性细胞的浸润，PAS染色测定小鼠肺组织上皮杯状细胞的数量(每组n＝4～6只小鼠)。(C)对肺组织中ILC2s的流式细胞术分析表明M2
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EVs对ILC2s产生的影响比M0
‑
EVs更明显(每组4～6只小鼠)。(D)收集BALF样品，其用于测量所选细胞因子的水平，如ELISA所示(每组4只小鼠)。(E)通过流式细胞术分析肺中IL
‑
5或IL
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13阳性ILC2s
细胞的百分比(每组n＝4～6只小鼠)。数据表示为两个独立实验的平均值
±
SEM。NS，无显著性，*P<0.05，*本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种靶向M2巨噬细胞外囊泡的反义lncRNA
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β连环蛋白拮抗因子同源物1 （lncRNA DACT1
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AS）的试剂，其特征在于，其为有效量的减少M2巨噬细胞外囊泡中lncRNA DACT1
‑
AS表达的核酸靶向试剂，选自SEQ ID NO:1
‑
6。2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，其包括SEQ ID NO:1
‑
6。3.一种M2巨噬细胞外囊泡，其特征在于，含有权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：裴纬亚，吕坤，张莺莺，李雪琴，朱小龙，
申请(专利权)人：皖南医学院第一附属医院皖南医学院弋矶山医院，
类型：发明
国别省市：