用于抑制脂蛋白(a)的RNA组合物和方法技术

本公开涉及靶向LPA mRNA并调节Lp(a)血浆水平的dsRNA，以及用于治疗与LPA基因表达相关一种或多种病症疾病的方法。一种或多种病症疾病的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于抑制脂蛋白(a)的RNA组合物和方法
序列表
[0001]本公开说明书中公开了作为参考品的核酸序列。根据出于专利事项目的的标准要求进行格式化的序列表中也示出了相同序列。如任一序列与标准序列表不一致，则本公开说明书中描述的序列应作为参考。
专利

[0002]本专利技术涉及靶向LPA mRNA和调节Lp(a)血浆水平的dsRNA，以及治疗与LPA基因表达相关的一种或多种病症的方法。

技术介绍

[0003]脂蛋白是在输送血浆中的脂质起关键作用的脂蛋白颗粒。这些颗粒具有包括apoA、apoB、apoC和apoE等嵌入载脂蛋白(结合脂质的蛋白)的单层磷脂和胆固醇膜。膜包裹正在输送的脂质。由于脂质不溶于水，因此脂蛋白可有效地充当乳化剂。
[0004]脂蛋白(a)或Lp(a)，仅在人类和旧大陆猴中发现并且包括低密度脂蛋白(LDL)颗粒。Lp(a)与其它脂蛋白的不同之处在于存在独特的脂蛋白，即载脂蛋白(a)/[apo(a)]，所述载脂蛋白通过双硫键与LDL颗粒外表面的apoB
100
相连(参见，例如Kronenberg和Utermann，《内科医学》(2013年)273(1)：6
‑
30)；Guerra等人，《循环》(2005年)111：1471
‑
9)。Apo(a)主要在肝脏中表达，并且包含非活性肽酶结构域。Apo(a)由高度多态性LPA基因进行编码。基因中不同数量的环状结构(K)IV 2型重复序列导致apo(a)的异构体大小范围广泛。LPA基因由纤溶酶原基因(PLG)进化而来，并且这两个基因序列是高度同源的(Kronenberg，supra)。
[0005]血浆Lp(a)水平在个体之间存在近1000倍的差异，约20
‑
30％的人的血浆Lp(a)水平高度升高(约≥50mg/dL)。参见，例如Hopewell等人，《内科医学》(2013年)273(1)：260
‑
8；Wilson等人，《临床脂质学杂志》(2019年)13(3)：374
‑
92。高血浆Lp(a)水平和小apo(a)异构体大小与心血管疾病风险(包括冠心病、心肌梗塞、中风、外周动脉病、钙化性主动脉瓣疾病和动脉粥样硬化)的增加有关。
[0006]WO 2019/092283与WO 2020/099476均公开了用于抑制细胞中LPA表达的核酸。另外，WO 2014/179625公开了用于调节载脂蛋白(a)表达的组合物和方法。
[0007]双链RNA分子(dsRNA)已被证明可在被称为RNA干扰(RNAi)的一种高度保守的调控机制中阻断基因表达。这似乎是一种不同于反义寡核苷酸、抗miRNA分子和同型替代抗体等单链寡核苷酸的作用机制。在RNA干扰技术中，小干扰RNA(siRNA)等双链RNA与RNA诱导沉默复合体(”RISC”)结合，其中一条链(“随从链”或“正义链”)被替代，剩下的一条链(“导向链”或“反义链”)与RISC合作，以结合互补RNA(靶向RNA)。一旦结合，靶向RNA被RISC中的RNA内切酶AGO蛋白质(AGO)裂解，随后被RNA外切酶进一步降解。RNAi现在已用于开发一类新的治疗剂，用于治疗由基因的异常表达或不必要表达引发的紊乱。
[0008]由于Lp(a)在输送胆固醇和氧化磷脂以及提供溶血磷脂酸方面的重要性，以及与
Lp(a)升高和动脉粥样硬化促进脂质有关的疾病患病率，迫切需要确定LPA表达的抑制剂，并且测试这种抑制剂的疗效和细胞毒性等不需要的副作用。

技术实现思路

[0009]本公开提供了一种双链核糖核酸(dsRNA)，通过靶向LPA基因的RNA转录物上的靶序列来抑制人LPA基因表达，其中dsRNA包括包含正义序列的正义链和包含反义序列的反义链，其中靶序列是SEQ ID NO：1632的核苷酸220
‑
238、223
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241、302
‑
320、1236
‑
1254、2946
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2964、2953
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2971、2954
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2972、2958
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2976、2959
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2977、4635
‑
4653、4636
‑
4654、4639
‑
4657、4842
‑
4860、4980
‑
4998、4982
‑
5000、6385
‑
6403、或6470
‑
6488，并且其中正义序列与靶序列至少是90％相同的。在一些实施例中，正义链与反义链在15至25个连续核苷酸的区域中相互互补。在一些实施例中，正义链与反义链的长度不超过30个核苷酸。在特定实施例中，靶序列是SEQ ID NO：1632的核苷酸2958
‑
2976、4639
‑
4657或4982
‑
5000。
[0010]最优选的靶序列是核苷酸2958
‑
2976、4639
‑
4657和4982
‑
5000。
[0011]在一些实施例中，dsRNA的一条或两条链包括具有以下结构的一种或多种化合物：其中：
‑
B是杂环核碱基，
‑
L1和L2中的一个是连接式(I)化合物与链的核苷间连接基，L1和L2中的另一个是H、保护基、磷部分或连接式(I)化合物与链的核苷间连接基，
‑
Y是O、NH、NR1或N
‑
C(＝O)
‑
R1，其中R1是：
·
(C1
‑
C20)烷基，所述(C1
‑
C20)烷基可选地由选自卤原子、(C1
‑
C6)烷基，(C3
‑
C8)环烷基、(C3
‑
C14)杂环、(C6
‑
C14)芳基、(C5
‑
C14)杂芳基、
‑
O
‑
Z1、
‑
N(Z1)(Z2)、
‑
S
‑
Z1，
‑
CN、
‑
C(＝J)
‑
O
‑
Z1、
‑
O
‑
C(＝J)
‑
Z1、
‑
C(＝J)
‑
N(Z1)(Z2)、和
‑
N(Z1)
‑
C(＝J)
‑
Z2中的一个或多个基团取代，其中J是O或S，Z1和Z2中的每一个独立地是H、(C1
‑
C6)烷基，所述Z1和所述Z2中的每一个可选地由选自卤原子和(C1
‑
C6)烷基的一个或多个基团取代本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双链核糖核酸(dsRNA)，所述dsRNA通过靶向LPA基因的RNA转录本上的靶序列来抑制人LPA基因的表达，其中所述dsRNA包括包含正义序列的正义链和包含反义序列的反义链，并且其中所述靶序列是SEQ ID NO：1632的核苷酸2958
‑
2976、4639
‑
4657、4892
‑
5000、220
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238、223
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241、302
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320、1236
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1254、2946
‑
2964、2953
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2971、2954
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2972、2959
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2977、4635
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4653、4636
‑
4654、4842
‑
4860、4980
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4998、6385
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6403或6470
‑
6488，并且其中所述正义序列与所述靶序列至少是90％相同的。2.根据权利要求1所述的dsRNA，其中所述正义链与所述反义链在15至25个连续核苷酸区域中相互互补。3.根据权利要求1或2中任一项所述的dsRNA，其中所述正义链与所述反义链的长度不超过30个核苷酸。4.根据权利要求1至3中任一项所述的dsRNA，其中所述靶序列是SEQ ID NO：1632的核苷酸2958
‑
2976、4639
‑
4657或4982
‑
5000。5.根据权利要求1至4中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包括反义序列，所述反义序列与选自SEQ ID NO：303、SEQ ID NO：306、SEQ ID NO：318、SEQ ID NO：389、SEQ ID NO：403、SEQ ID NO：406、SEQ ID NO：407、SEQ ID NO：409、SEQ ID NO：410、SEQ ID NO：467、SEQ ID NO：468、SEQ ID NO：471、SEQ ID NO：499、SEQ ID NO：520、SEQ ID NO∶522、SEQ ID NO：578和SEQ ID NO：597组成的组中的核苷酸序列至少是90％相同的。6.根据权利要求1所述的dsRNA，其中所述正义序列与所述反义序列是互补的，其中：a)所述正义序列包括选自SEQ ID NO：SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：200、SEQ ID NO：221、SEQ ID NO：223、SEQ ID NO：279和SEQ ID NO：298组成的组中的核苷酸序列；或b)所述反义序列包括选自由SEQ ID NO：SEQ ID NO：303、SEQ ID NO：306、SEQ ID NO：318、SEQ ID NO：389、SEQ ID NO：403、SEQ ID NO：406、SEQ ID NO：407、SEQ ID NO：409、SEQ ID NO：410、SEQ ID NO：467、SEQ ID NO：468、SEQ ID NO：471、SEQ ID NO：499、SEQ ID NO：520、SEQ ID NO：522、SEQ ID NO：578和SEQ ID NO：597组成的组中的核苷酸序列。7.根据权利要求6所述的dsRNA，其中所述dsRNA的所述正义链和所述反义链分别包括以下核苷酸序列：a)SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：303；b)SEQ ID NO：7和SEQ ID NO：306；c)SEQ ID NO：19和SEQ ID NO：318；d)SEQ ID NO：90和SEQ ID NO：389；e)SEQ ID NO：104和SEQ ID NO：403；f)SEQ ID NO：107和SEQ ID NO：406；g)SEQ ID NO：108和SEQ ID NO：407；h)SEQ ID NO：110和SEQ ID NO：409；i)SEQ ID NO：111和SEQ ID NO：410；j)SEQ ID NO：168和SEQ ID NO：467；k)SEQ ID NO：169和SEQ ID NO：468；
l)SEQ ID NO：172和SEQ ID NO：471；m)SEQ ID NO：200和SEQ ID NO：499；n)SEQ ID NO：221和SEQ ID NO：520；o)SEQ ID NO：223和SEQ ID NO：522；p)SEQ ID NO：279和SEQ ID NO：578；或q)SEQ ID NO：298和SEQ ID NO：597。8.根据权利要求7所述的dsRNA，其中所述dsRNA的所述正义链和所述反义链分别包括以下核苷酸序列：a)SEQ ID NO：110和SEQ ID NO：409；b)SEQ ID NO：172和SEQ ID NO：471；或c)SEQ ID NO：223和SEQ ID NO：522。9.根据权利要求1至8中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA包括一个或多个修饰核苷酸，其中所述一个或多个修饰核苷酸中的至少一个修饰核苷酸是2
′‑
脱氧
‑2′‑
氟
‑
核糖核苷酸、2
′‑
脱氧核糖核苷酸或2
′‑
O
‑
甲基
‑
核糖核苷酸。10.根据权利要求1至9中任一项所述的dsRNA，其中所述dsRNA在其正义链或反义链的3
′
端上包括倒置2
′‑
脱氧核糖核苷酸。11.根据权利要求1至10中任一项所述的dsRNA，其中所述正义链和所述反义链中的一条或两条还包括：a)包括一个或多个核苷酸的5
′
突出端；并且/或者b)包括一个或多个核苷酸的3
′
突出端。12.根据权利要求11所述的dsRNA，其中所述dsRNA中的突出端包括2或3个核苷酸。13.根据权利要求11或12所述的dsRNA，其中所述dsRNA中的突出端包括一个或多个胸腺嘧啶。14.权利要求1至13中任一项所述的dsRNA，其中所述正义序列和所述反义序列包括交替的2
′‑
O
‑
甲基
‑
核糖核苷酸和2
′‑
脱氧
‑2′‑
氟
‑
核糖核苷酸。15.根据权利要求1所述的dsRNA，其中：a)所述正义链包括选自SEQ ID NO：602、SEQ ID NO：605、SEQ ID NO：617、SEQ ID NO：688、SEQ ID NO：702、SEQ ID NO：705、SEQ ID NO：706、SEQ ID NO：708、SEQ ID NO：709、SEQ ID NO：766、SEQ ID NO：767、SEQ ID NO：770、SEQ ID NO：798、SEQ ID NO：819、SEQ ID NO：821、SEQ ID NO：877和SEQ ID NO：896组成的组的核苷酸序列；或b)所述反义链包括选自SEQ ID NO：901、SEQ ID NO：904、SEQ ID NO：916、SEQ ID NO：987、SEQ ID NO：1001、SEQ ID NO：1004、SEQ ID NO：1005、SEQ ID NO：1007、SEQ ID NO：1008、SEQ ID NO：1065、SEQ ID NO：1066、SEQ ID NO：1069、SEQ ID NO：1097、SEQ ID NO：1118、SEQ ID NO：1120、SEQ ID NO：1176和SEQ ID NO：1195组成的组的核苷酸序列。16.根据权利要求15所述的dsRNA，其中：a)所述正义链包括选自SEQ ID NO∶708、SEQ ID NO：770和SEQ ID NO∶821组成的组的核苷酸序列；或b)所述反义链包括选自SEQ ID NO：1007、SEQ ID NO：1069和SEQ ID NO：1120组成的组的核苷酸序列。
17.根据权利要求16所述的dsRNA，其中所述dsRNA的正义链和所述反义链分别包括以下核苷酸序列：a)SEQ ID NO：602和SEQ ID NO：901；b)SEQ ID NO：605和SEQ ID NO：904；c)SEQ ID NO：617和SEQ ID NO：916；d)SEQ ID NO：688和SEQ ID NO：987；e)SEQ ID NO：702和SEQ ID NO：1001；f)SEQ ID NO：705和SEQ ID NO：1004；g)SEQ ID NO：706和SEQ ID NO：1005；h)SEQ ID NO：708和SEQ ID NO：1007；i)SEQ ID NO：709和SEQ ID NO：1008；j)SEQ ID NO：766和SEQ ID NO：1065；k)SEQ ID NO：767和SEQ ID NO：1066；l)SEQ ID NO：770和SEQ ID NO：1069；m) SEQ ID NO：798和SEQ ID NO：1097；n)SEQ ID NO：819和SEQ ID NO：111 8；o)SEQ ID NO：821和SEQ ID NO：1 120；p)SEQ ID NO：877和SEQ...

【专利技术属性】
技术研发人员：B，
申请(专利权)人：赛诺菲，
类型：发明
国别省市：