一种重组腺相关病毒及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物医药领域，涉及一种载有c

【技术实现步骤摘要】
一种重组腺相关病毒及其应用


[0001]本专利技术属于生物医药领域，涉及一种载有c
‑
Rel特异性核糖核酸的重组腺相关病毒及其在抑制角膜移植排斥方面的应用。

技术介绍

[0002]角膜移植是治疗严重感染，化学伤等所致不可逆性角膜盲的唯一治疗手段，移植后排斥是角膜移植失败的主要原因。全球每年角膜移植数量数十万例，其排斥率高达50％以上，尤其是高危角膜移植。造成这一难题的关键在于角膜移植排斥免疫发生机制不明确。
[0003]临床应用免疫抑制剂是预防和治疗角膜移植免疫排斥最常见的方法，它的优点主要是易于操作和患者医从性较高。目前主要使用的免疫抑制剂是类固醇激素、糖皮质激素、环孢素A、他克莫司、霉酚酸酯、雷帕霉素和FTY720等。但临床上使用的各类抗排斥药物防治疗效不佳,并且由于缺乏特异性，药物毒副作用较大，只能短期使用来控制急性炎症。
[0004]近年来抗体和融合蛋白免疫抑制剂因靶点明确和作用效果明显而受到了广泛的关注，已成功用于角膜移植免疫排斥防治的抗体和融合蛋白免疫抑制剂靶点主要包括IL
‑
2、CD25、TNF
‑
α、CTLA4
‑
Ig、IL
‑
10，TLR2，CCR7等。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是减少角膜移植后的排斥反应，为临床预防和治疗角膜移植排斥提供新的手段和策略。
[0006]在第一方面，本专利技术提供了c
‑
Rel特异性核糖核酸在用于制备预防、抑制和/或治疗角膜移植排斥反应或并发症的药物的应用，其序列如SED ID NO.1、SED ID NO.2或SED ID NO.3、SED ID NO.4所示：
[0007]正义链5
’
CAACCGGACATACCCGTCT 3
’
(SED ID NO.1)
[0008]反义链5
’
AGACGGGTATGTCCGGTTG 3
’
(SED ID NO.2)；
[0009]或
[0010]正义链5
’
CAACCGAACATACCCTTCT 3
’
(SED ID NO.3)
[0011]反义链5
’
AGAAGGGTATGTTCGGTTG 3
’
(SED ID NO.4)。
[0012]在第二方面，本专利技术提供了一种用于抑制c
‑
Rel基因的表达和/或抑制c
‑
Rel调控的炎症因子的表达重组腺相关病毒，其包含以c
‑
Rel为靶点的c
‑
Rel特异性核糖核酸或其功能等价物，所述c
‑
Rel特异性核糖核酸序列如SED ID NO.1、SED ID NO.2或SED ID NO.3、SED ID NO.4所示：
[0013]正义链5
’
CAACCGGACATACCCGTCT 3
’
(SED ID NO.1)
[0014]反义链5
’
AGACGGGTATGTCCGGTTG 3
’
(SED ID NO.2)；
[0015]或
[0016]正义链5
’
CAACCGAACATACCCTTCT 3
’
(SED ID NO.3)
[0017]反义链5
’
AGAAGGGTATGTTCGGTTG 3
’
(SED ID NO.4)；
[0018]所述功能等价物与SEQ ID NO：1
‑
4所示的序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％的同一性；可选地为取代、缺失和/或插入一个或多个SEQ ID NO：1
‑
4所示的核苷酸序列。
[0019]所述重组腺相关病毒的血清型包括AAV2、AAV4、AAV 5、AAV6、AAV8及AAV9。
[0020]在一个实施方案中，所述重组腺相关病毒的血清型为AAV6，包装滴度为5
×
10E
12
～1
×
10E
13
vg/mL，可选地包装滴度为6
×
10E
12
～7
×
10E
12
vg/mL。
[0021]在第三方面，本专利技术还提供了用于预防、抑制和/或治疗角膜移植排斥的药用组合物，其特征在于，包含以c
‑
Rel为靶点的c
‑
Rel特异性核糖核酸或其功能等价物、药用可接受载体，还可以进一步包括药用可接受辅料；
[0022]所述以c
‑
Rel为靶点的c
‑
Rel特异性核糖核酸，其序列如SED ID NO.1、SED IDNO.2或SED ID NO.3、SED ID NO.4所示：
[0023]正义链5
’
CAACCGGACATACCCGTCT 3
’
(SED ID NO.1)
[0024]反义链5
’
AGACGGGTATGTCCGGTTG 3
’
(SED ID NO.2)；
[0025]或
[0026]正义链5
’
CAACCGAACATACCCTTCT 3
’
(SED ID NO.3)
[0027]反义链5
’
AGAAGGGTATGTTCGGTTG 3
’
(SED ID NO.4)；
[0028]所述功能等价物与SEQ ID NO：1
‑
4所示的序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％的同一性；
[0029]所述药用可接受载体包括质粒载体和/或病毒载体。
[0030]所述药用可接受辅料包括但不限于水、生理盐水、葡萄糖、免疫抑制剂(类固醇激素、糖皮质激素、环孢素A、他克莫司、霉酚酸酯、雷帕霉素和FTY720等)、靶向c
‑
Rel的小分子化合物(己酮可可碱等)、多肽或siRNA药物(IL
‑
2R单克隆抗体、抗CD25单克隆抗体、贝伐单抗、TNF
‑
α单克隆抗体、CD154单克隆抗体、CTLA4
‑
Ig等)。
[0031]作为本专利技术一个优选的实施方案，所述药用可接受载体为腺相关病毒。
[0032]在一个实施方案中，所述腺相关病毒的血清型为AAV6,病毒包装滴度为5
×
10E
12
‑1×
10E
13
vg/mL；所述药用组合物的剂型为注射液，所述药用组合物通过结膜注射施用于眼部。
[0033]在第四方面，本专利技术提供了上述重本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.c
‑
Rel特异性核糖核酸在用于制备预防、抑制和/或治疗角膜移植排斥的药物的应用，其序列如SED ID NO.1、SED ID NO.2或SED ID NO.3、SED ID NO.4所示：正义链5
’
CAACCGGACATACCCGTCT 3
’
(SED ID NO.1)反义链5
’
AGACGGGTATGTCCGGTTG 3
’
(SED ID NO.2)；或正义链5
’
CAACCGAACATACCCTTCT 3
’
(SED ID NO.3)反义链5
’
AGAAGGGTATGTTCGGTTG 3
’
(SED ID NO.4)。2.一种重组腺相关病毒，其特征在于，用于在角膜移植排斥个体的细胞内抑制c
‑
Rel基因的表达和/或抑制c
‑
Rel调控的炎症因子的表达，所述重组腺相关病毒包含以c
‑
Rel为靶点的c
‑
Rel特异性核糖核酸或其功能等价物，所述c
‑
Rel特异性核糖核酸序列如SED ID NO.1、SED ID NO.2或SED ID NO.3、SED ID NO.4所示：正义链5
’
CAACCGGACATACCCGTCT 3
’
(SED ID NO.1)反义链5
’
AGACGGGTATGTCCGGTTG 3
’
(SED ID NO.2)；或正义链5
’
CAACCGAACATACCCTTCT 3
’
(SED ID NO.3)反义链5
’
AGAAGGGTATGTTCGGTTG 3
’
(SED ID NO.4)；所述功能等价物与SEQ ID NO：1
‑
4所示的序列具有至少95％、96％、97％、98％或99％的同一性；所述重组腺相关病毒的血清型包括AAV2、AAV4、AAV 5、AAV6、AAV8及AAV9。3.如权利要求2所述的重组腺相关病毒，其特征在于，所述重组腺相关病毒的血清型为AAV6，包装滴度为5
×
10E
12
～1
×
10E
13
vg/mL。4.如权利要求2所述的重组腺相关病毒，其特征在于，所述c
‑
Rel调控的炎症因子包括TNF
‑
α、IL
‑
1β、IL
‑
17a、IFN
‑
γ、IL
‑
2、IL
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：阮庆国，王婷，郑谦，刘芮伶，边江，
申请(专利权)人：山东第一医科大学附属眼科研究所山东省眼科研究所，山东第一医科大学附属青岛眼科医院，
类型：发明
国别省市：