重组人源化I型胶原蛋白及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种重组人源化I型胶原蛋白及其制备方法。重组人源化I型胶原蛋白由(aa)n所示的氨基酸序列组成或包含其序列，其中aa为SEQ ID NO.1所示序列或与其同源性达80％的优化序列；n为大于或等于1的整数，每个aa相同或不同并以aa为基序，进行串联拼接。该蛋白具有温敏特性：在温度低于4℃时水溶性降低自组装析出纤维，温度回归到室温时重新溶解。基于此特性，制备方法采用大肠杆菌表达系统和温控诱导型重组表达载体，具有串联的强启动子和强终止子元件，保证重组人源化I型胶原蛋白的高水平表达；重组人源化I型胶原蛋白具有较好的促皮肤创面修复活性，以及促细胞黏附和迁移活性，可开发为活性原料应用于生物医药和化妆品等领域。等领域。等领域。

【技术实现步骤摘要】
重组人源化I型胶原蛋白及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物工程领域，具体地说，涉及一种重组人源化I型胶原蛋白及其制备方法。

技术介绍

[0002]胶原蛋白(Collagen)是分布在人和动物体内的结缔组织中，约占体内蛋白质总量的25～33％，其对维护细胞、组织、器官的正常生理功能和损伤修复有重要作用，被广泛的应用于医学材料及药物、化工、保健品、化妆品等行业。而目前市售胶原蛋白多为酸、碱、酶解法从动物源等提取所得，此类人胶原蛋白存在病毒隐患、异源排斥和吸收利用率低等弊端。
[0003]重组人源化I型胶原蛋白(Human
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like Collagen)是利用生物工程和发酵工程，经过高密度发酵、纯化工艺生产的一种活性生物蛋白。重组人源化I型胶原蛋白结构和功能与自然人胶原蛋白高度相似，与人体皮肤细胞同根同源，具有基因亲和性。较于传统动物源胶原蛋白，类人胶原蛋白具有无毒性隐患、优异的生物学相容性和功效性、低免疫原性的特点，有效避免了动物源胶原蛋白存在的病毒隐患和免疫排斥。另一方面，类人胶原蛋白克服了动物源胶原蛋白因动物年本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组人源化I型胶原蛋白，其特征在于由(aa)n所示的氨基酸序列组成或包含由(aa)n序列，其中aa为人胶原蛋白至少85％氨基酸序列同源性；aa为SEQ ID NO.1所示序列或与其同源性达80％的优化序列，所述优化序列是指基于SEQ ID NO.1序列的氨基酸替换、插入或敲除；其中n为大于或等于1的整数；其中每个aa相同或不同并以aa为基序进行n次串联拼接。2.根据权利要求1所述的重组人源化I型胶原蛋白，其特征在于，所述aa为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；当n＝8时，所述重组人源化I型胶原蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。3.根据权利要求1或2所述的重组人源化I型胶原蛋白，其特征在于，所述重组人源化I型胶原蛋白在其氨基端和羧基端连有用于目的蛋白鉴定和纯化的组氨酸标签，连入位点是氨基端和/或羧基端，所述组氨酸标签含有至少6个组氨酸残基。4.编码权利要求1
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3任何一项所述的重组人源化I型胶原蛋白的核苷酸序列。5.根据权利要求4所述的重组人源化I型胶原蛋白的核苷酸序列，其特征在于，当n＝8时，所述核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示。6.含有权利要求5所述重组人源化I型胶原蛋白的核苷酸序列的重组表达载体，所述表达载体为温控诱导型或诱导剂型。7.根据权利要求6所述的重组表达载体，其特征在于，所述温控诱导型载体为pBV220
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rhC。8.权利要求1所述重组人源化I型胶原蛋白的表达方法，其特征在于采用诱导剂型pET3c
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rhC大肠杆菌表达系统，包括以下步骤：(1)人源化I型胶原蛋白氨基酸序列参照SEQ ID NO.1所示氨基酸序列进行n等于1或大于1的串联；(2)根据大肠杆菌密码子偏好对编码该人源化I型胶原蛋白的DNA序列进行优化并基因合成；(3)将步骤(2)合成的基因序列连入限制性内切酶酶切后的pET3c线性化载体，构建重...

【专利技术属性】
技术研发人员：项琪，黄亚东，张卉，
申请(专利权)人：广州暨南大学医药生物技术研究开发中心有限公司，
类型：发明
国别省市：