小分子化合物诱导成纤维细胞重编程为睾丸支持细胞的方法及其应用技术

本发明专利技术提供一种将哺乳动物成纤维细胞重编程为类睾丸支持细胞(CiSCs)的方法，通过该方法获得的类睾丸支持细胞(CiSCs)及其应用。本发明专利技术的方法易于操作，且未引入外源性基因，有望开发为一种广泛应用的获取非睾丸来源支持细胞的方法，不仅为生殖系统疾病的基础研究和药物开发提供细胞模型和理论基础，还为睾丸支持细胞在再生医学领域的应用带来广泛前景。支持细胞在再生医学领域的应用带来广泛前景。

【技术实现步骤摘要】
小分子化合物诱导成纤维细胞重编程为睾丸支持细胞的方法及其应用


[0001]本专利技术涉及细胞生物学与组织工程
，具体涉及利用小分子化合物将成纤维细胞重编程为睾丸支持细胞的方法及其应用。

技术介绍

[0002]睾丸支持细胞(Sertoli细胞)是睾丸内重要的体细胞之一，是曲细精管的重要组成，可为精子发生提供物理支撑和稳定的微环境，为精子的发生提供营养支持，并具有独特的免疫豁免特性，以保护生殖细胞免受机体免疫攻击和外源物质干扰。Sertoli细胞在基础研究和临床治疗领域用途十分广泛，它可以作为模式细胞应用于体外生殖系统相关机制研究和生殖毒理评价，并且可以作为种子细胞通过参与组织重建治疗睾丸发育障碍。此外，Sertoli细胞在再生医学领域也发挥了重要的作用，它可以为移植后的非睾丸细胞提供营养和免疫保护，有利于移植细胞的存活并降低机体排异反应。然而，成熟的Sertoli细胞有丝分裂不活跃，体外长期培养会导致其功能特征丢失，并且人源Sertoli细胞取材十分有限，难以在体外形成大规模培养。因此，有必要找到一种有效的策略来获得不依赖于供体睾丸细胞的S本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种将哺乳动物成纤维细胞重编程/诱导为类睾丸支持细胞(CiSCs)的方法，所述方法包括以下步骤：(1)将分离的哺乳动物成纤维细胞用BET溴结构域抑制剂处理；和(2)接着用糖原合成酶激酶(GSK
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3)抑制剂和视黄酸(RA)进一步处理来自步骤(1)的细胞，由此获得所述类睾丸支持细胞(CiSCs)。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述BET溴结构域抑制剂为I
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BET151，和/或所述糖原合成酶激酶(GSK
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3)抑制剂为利鲁唑(Riluzole)。3.根据权利要求1所述的方法，其中在所述步骤(1)中所述BET溴结构域抑制剂是在所述成纤维细胞的对数生长期时加入，处理时间为大约0.5小时至10天，优选约4天；和/或其中所述步骤(2)进行大约10至40天，优选大约25天。4.根据权利要求1所述的方法，其中所述成纤维细胞为原代成纤维细胞，优选为胚胎成纤维细胞、内脏成纤维细胞或皮肤成纤维细胞；和/或所述哺乳动物为人、小鼠、大鼠、猴、狗、猫、牛、兔、马或猪。5.根据权利要求1所述的方法，其中所述步骤(1)在含有FBS的DMEM培养基中进行；和/或所述步骤(2)在睾丸支持细胞诱导培养基中进行，其中所述睾丸支持细胞诱导培养基是包含FBS、胰岛素样生长因子、表皮生长因子、成纤维细胞生长因子9、促卵泡激素和前列腺素D2的DMEM培养基。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的方法，所述方法还包括：1)鉴定所述类睾丸支持细胞(CiSCs)中睾丸支持细胞相关基因的表达，其中所述睾丸支持细胞相关基因选自Wt1、Krt18、Fshr、Ar、Gdnf和Amh；2)鉴定所述类睾丸支持细胞(CiSCs)中...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨艳，黄亚东，李佺，项琪，
申请(专利权)人：广州暨南大学医药生物技术研究开发中心有限公司，
类型：发明
国别省市：