一种胶原蛋白及其纯化方法、提取方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种胶原蛋白及其纯化方法、提取方法和应用，属于生物材料领域，制备方法包括：将提取的胶原蛋白粗品在0.1％～0.8％的磷酸溶液中重悬，高速离心，去上清，获得胶原蛋白沉淀，所述沉淀为凝胶状液体。本发明专利技术运用磷酸与其它蛋白和胶原蛋白的特殊溶解关系，有效的分离非胶原蛋白及不需要的肽键断裂的小分子胶原蛋白；处理过程简单，周期短，除离心机等通用设备外，不需要购置其它的大型设备，磷酸安全无毒，成本低，得率高，所提取的胶原蛋白纯度高，免疫原性低，能用于化妆品、食品、医疗器械等产品。械等产品。械等产品。

【技术实现步骤摘要】
一种胶原蛋白及其纯化方法、提取方法和应用


[0001]本专利技术涉及生物材料领域，具体涉及一种胶原蛋白及其纯化方法、提取方法和应用。

技术介绍

[0002]现有的动物组织胶原蛋白提取纯化方法，有的涉及盐析、透析，例如透析袋，通常需要数天时间，周期较长，要么采用类似于超滤等技术，涉及大型设备，投入较大，有的涉及亲和层析，采用多肽与胶原结合，多肽等生物基材料保存条件苛刻，制作成本高。
[0003]现有技术在从动物组织以牛跟腱为例，牛跟腱经清洗、脱脂、除杂蛋白、胃蛋白酶去端肽(免疫原)处理后，基本是盐析、透析、亲和层析、流动的超滤等，周期长、设备投入大，有的采用有一定毒性的试剂，需要去除而不能直接用于化妆品和医用领域。

技术实现思路

[0004]专利技术目的
[0005]为克服上述不足，本专利技术的目的在于提供一种胶原蛋白及其纯化方法、提取方法和应用，该胶原蛋白周期短，提取工艺过程简单，不使用有毒试剂，不添加大型设备，运用磷酸与其它蛋白和胶原蛋白的特殊溶解关系，有效的分离非胶原蛋白及不需要的肽键断裂的小分子胶原蛋白。
[0006]解决方案
[0007]为实现本专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0008]第一方面，本专利技术提供了一种胶原蛋白的纯化方法，将提取的胶原蛋白粗品在0.1％～0.8％的磷酸溶液中重悬，高速离心，去上清，获得胶原蛋白沉淀。
[0009]进一步地，所述沉淀可以为凝胶状液体。
[0010]进一步地，将所述胶原蛋白沉淀在0.1％～0.8％的磷酸溶液中重悬，高速离心，去上清，获得进一步纯化的胶原蛋白沉淀；可选地，采用0.1％～0.8％的磷酸溶液重复多次纯化的胶原蛋白沉淀。
[0011]进一步地，所述磷酸溶液的浓度为0.2％～0.6％，可选地为0.3％～0.5％。
[0012]进一步地，高速离心的转速为5000～15000rpm/min，离心3～15min；可选地高速离心的转速为8000～15000rpm/min，离心4～10min；可选地高速离心的转速为9000～12000rpm/min，离心4～8min。
[0013]进一步地，将胶原蛋白沉淀浓缩，去除磷酸，得到胶原蛋白。
[0014]进一步地，浓缩方法为调pH至5～8，使胶原蛋白析出浓缩；或者，浓缩方法为冷冻干燥浓缩。
[0015]进一步地，去除磷酸的方法为：缓冲液洗、水洗、透析或微滤；可选地，所述缓冲液为DPBS缓冲液。
[0016]进一步地，所述胶原蛋白粗品的来源为动物组织；可选地，所述动物组织选自牛跟
腱或鼠尾、猪皮、猪跟腱、牛皮、鱼皮等中的一种或几种。
[0017]进一步地，所述胶原蛋白粗品为从动物组织中提取的胶原蛋白粗品或含有胶原蛋白的溶液。
[0018]进一步地，所述胶原蛋白沉淀中胶原蛋白浓度为1mg/ml以上，可选地为1.8mg/ml以上。
[0019]再一方面，提供一种胶原蛋白的提取方法，包括胶原蛋白粗品的提取和所述的纯化方法。
[0020]进一步地，所述胶原蛋白粗品的提取方法为：将动物组织进行前处理，生理盐水清洗，氢氧化钠浸泡，脱脂，Tris
‑
HCl除杂蛋白，酸泡胀，胃蛋白酶处理去除端肽，调pH至中性，离心取沉淀得到含胃蛋白酶的胶原蛋白粗品；可选地，所述动物组织为牛跟腱或鼠尾。
[0021]进一步地，所述胶原蛋白粗品的提取方法为：将动物尾扒皮，截断，截断的动物尾用酒精和PBS浸泡，然后抽取胶原蛋白丝，将胶原纤维丝用乙酸溶液浸泡溶解得胶原蛋白粗品。
[0022]另一方面，提供一种胶原蛋白，采用所述的纯化方法或所述的提取方法获得的胶原蛋白。
[0023]又一方面，提供一种所述的胶原蛋白在制备化妆品、食品或药品中的应用。
[0024]有益效果
[0025]本专利技术运用磷酸与其它蛋白和胶原蛋白的特殊溶解关系，有效的分离非胶原蛋白及不需要的肽键断裂的小分子胶原蛋白；处理过程简单，周期短，除离心机等通用设备外，不需要购置其它的大型设备，磷酸安全无毒，成本低，得率高，所提取的胶原蛋白纯度高，免疫原性低，能用于化妆品、食品、医疗器械等产品。
附图说明
[0026]一个或多个实施例通过与之对应的附图中的图片进行示例性说明，这些示例性说明并不构成对实施例的限定。在这里专用的词“示例性”意为“用作例子、实施例或说明性”。这里作为“示例性”所说明的任何实施例不必解释为优于或好于其它实施例。
[0027]图1为本专利技术的实施例1、实施例2及市售牛胶原蛋白的SDS
‑
PAGE电泳图；其中，酶指的胶原蛋白酶，酶与胶原
①
为采用胶原蛋白酶处理实施例1的牛胶原蛋白4h后的样品；
①
为实施例1提取的牛胶原蛋白；酶与胶原
②
为采用胶原蛋白酶处理实施例2的牛胶原蛋白4h后的样品；
②
为实施例2提取的牛胶原蛋白；酶与胶原
③
为采用胶原蛋白酶处理市售某高纯牛胶原蛋白4h后的样品；
③
为市售某高纯牛胶原蛋白。
[0028]图2为不同样品的SDS
‑
PAGE电泳图；其中，1、为实施例1步骤
⑦
的胶原蛋白粗品，以非还原型上样缓冲液处理后上样；2、为实施例1步骤
⑦
的胶原蛋白粗品，以还原型上样缓冲液处理后上样；3、为实施例1步骤
⑦
的胶原蛋白粗品中加入0.1％乙酸重悬后，高速离心弃上清，将蛋白沉淀以非还原型上样缓冲液处理后上样；4、为实施例1步骤
⑦
的胶原蛋白粗品中加入0.1％乙酸重悬后，高速离心弃上清，将蛋白沉淀以还原型上样缓冲液处理后上样；5、为实施例1步骤
⑦
的胶原蛋白粗品中加入0.01mol/LHCL重悬后，高速离心弃上清，将蛋白沉淀以非还原型上样缓冲液处理后上样；6、为实施例1步骤
⑦
的胶原蛋白粗品中加入0.01mol/LHCL重悬后，高速离心弃上清，将蛋白沉淀以还原型上样缓冲液处理后上样；7、为
实施例1步骤
⑦
的胶原蛋白粗品中加入0.5％磷酸重悬后，高速离心弃上清，将蛋白沉淀以非还原型上样缓冲液处理后上样；8、为实施例1步骤
⑦
的胶原蛋白粗品中加入0.5％磷酸重悬后，高速离心弃上清，将蛋白沉淀以还原型上样缓冲液处理后上样；9、为实施例1步骤
⑦
的胶原蛋白粗品中加入0.5％磷酸重悬后高速离心弃上清，重复处理2次，即磷酸共洗3次，将蛋白沉淀以非还原型上样缓冲液处理后上样；10、为实施例1步骤
⑦
的胶原蛋白粗品中加入0.5％磷酸重悬后高速离心弃上清，重复处理2次，即磷酸共洗3次，将蛋白沉淀以还原型上样缓冲液处理后上样；高速离心是指1万转离心。
[0029]图3本专利技术的实施例3鼠尾胶原蛋白的SDS
‑
PAGE电泳图。
具体本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胶原蛋白的纯化方法，其特征在于，将提取的胶原蛋白粗品在0.1％～0.8％的磷酸溶液中重悬，高速离心，去上清，获得胶原蛋白沉淀。2.根据权利要求1所述的纯化方法，其特征在于，将所述胶原蛋白沉淀在0.1％～0.8％的磷酸溶液中重悬，高速离心，去上清，获得进一步纯化的胶原蛋白沉淀；可选地，采用0.1％～0.8％的磷酸溶液重复多次纯化的胶原蛋白沉淀。3.根据权利要求1或2所述的纯化方法，其特征在于，所述磷酸溶液的浓度为0.2％～0.6％，可选地为0.3％～0.5％；和/或，高速离心的转速为5000～15000rpm/min，离心3～15min；可选地高速离心的转速为8000～15000rpm/min，离心4～10min；可选地高速离心的转速为9000～12000rpm/min，离心4～8min。4.根据权利要求1至3任一所述的纯化方法，其特征在于，将胶原蛋白沉淀浓缩，去除磷酸，得到胶原蛋白；可选地，浓缩方法为调pH至5～8，使胶原蛋白析出浓缩；或者，浓缩方法为冷冻干燥浓缩；可选地，去除磷酸的方法为：缓冲液洗、水洗、透析或微滤，可选地，所述缓冲液为DPBS缓冲液。5.根据权利要求1至4任一所述的纯化方法，其特征在于，所述胶原蛋白粗品的来源为动物组织；可选地，所述动物组织选自牛跟腱、...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙雪莲，刘晓华，刘永强，王亚娟，马超，李娇婕，
申请(专利权)人：浙江纳吉生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：