一种前导核酸制剂及应用制造技术

本发明专利技术属于核酸生物领域，涉及一种前导核酸制剂及应用。所述前导核酸制剂包括序列S1和序列S2，所述序列S1的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示，所述序列S2的核苷酸序列为SEQ ID NO：2所示。本发明专利技术的前导核酸制剂能够抑制结直肠癌细胞生长，RNAseq检测证实该前导核酸制剂影响结直肠癌细胞基因表达，进一步研究表明，该前导核酸制剂抑制了细胞周期和DNA复制基因的表达。本发明专利技术的前导核酸制剂为新型COAD治疗药物的开发提供了选择。的开发提供了选择。的开发提供了选择。

【技术实现步骤摘要】
一种前导核酸制剂及应用


[0001]本专利技术属于核酸生物领域，具体地，涉及一种前导核酸制剂，以及该前导核酸制剂在制备结直肠癌细胞抑制剂中的应用。

技术介绍

[0002]结肠腺癌(COAD)是一种常见的消化道肿瘤，严重威胁人民的生命健康。化学治疗在结肠腺癌的治疗中占有重要地位，一般可于术后进行。手术后的病人化疗一般1
‑
1.5年内可使用2
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3个疗程，常用药物主要是5
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氟脲嘧啶(5
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FU)，也可联合应用丝裂霉素、环磷酰胺等。
[0003]化疗和免疫治疗的进步改善了患者的生存期，但是肿瘤异质性依然影响COAD的诊疗效果。开发新的治疗COAD的前导核酸制剂将为临床前实验提供新的途径。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种新型的前导核酸制剂，该前导核酸制剂具有抑制结直肠癌细胞的作用。
[0005]为了实现上述目的，本专利技术提供一种前导核酸制剂，包括序列S1和序列S2，所述序列S1的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示，所述序列S2的核苷酸序列为SEQ ID NO：2所示。
[0006]S1：CCCUCCUUCAGCAACUCAUTT(SEQ ID NO：1)。
[0007]S2：AUGAGUUGCUGAAGGAGGGTT(SEQ ID NO：2)。
[0008]进一步地，序列S1和序列S2的摩尔比为1:1。
[0009]本专利技术的前导核酸制剂可应用于制备结直肠癌细胞抑制剂。
[0010]所述结直肠癌细胞优选为RKO细胞或HCT116细胞。
[0011]本专利技术的前导核酸制剂能够抑制结直肠癌细胞生长，RNAseq检测证实该前导核酸制剂影响结直肠癌细胞基因表达，进一步研究表明，该前导核酸制剂抑制了细胞周期和DNA复制基因的表达。本专利技术的前导核酸制剂为新型COAD治疗药物的开发提供了选择。
[0012]本专利技术的其它特征和优点将在随后具体实施方式部分予以详细说明。
附图说明
[0013]通过结合附图对本专利技术示例性实施方式进行更详细的描述，本专利技术的上述以及其它目的、特征和优势将变得更加明显。
[0014]图1示出了前导核酸制剂抑制结直肠癌细胞的生长。
[0015]图2示出了前导核酸制剂影响结直肠细胞的基因表达。
[0016]图3示出了前导核酸制剂抑制结直肠癌细胞生长的潜在分子机制。
具体实施方式
[0017]下面将更详细地描述本专利技术的优选实施方式。虽然以下描述了本专利技术的优选实施
方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本专利技术而不应被这里阐述的实施方式所限制。
[0018]实施例1
[0019]本实施例用于说明前导核酸制剂抑制结直肠癌细胞的生长。
[0020]1、细胞培养
[0021]RKO细胞培养基为MEM(含NEAA)+10％胎牛血清+1％青/链霉素溶液(10μL/mL)(碧云天)；HCT116细胞培养基为DMEM培养基+10％胎牛血清+1％青/链霉素溶液(10μL/mL)。培养条件为：5％ CO2、37℃，2～3天传代一次。
[0022]2、给药方法
[0023]前导核酸制剂由苏州吉玛生物公司合成(表1)。
[0024]表1.前导核酸制剂的序列
[0025][0026]准备125μL无血清和抗生素的培养基，分别加入4μL Lipo2000和100pmol前导核酸制剂(S1:S2＝1:1)，轻轻混匀后，逐滴加入六孔板，每孔细胞数约为5.0
×
105个，6h后更换新鲜培养液。48～72h后开始后续实验。
[0027]3、细胞生长显微拍照
[0028]分别将用药组细胞和未用药的对照组细胞以每孔10000个接种到6孔板中，3复孔/组，72h拍照，观察细胞生长情况。
[0029]4、CCK8实验
[0030]分别将用药组和对照组细胞以每孔2000个接种到96孔板中，5复孔/组。分别于12h、24h、48h和72h开展实验：每孔中加入10微升CCK8溶液，无细胞组作为空白对照；细胞培养箱内孵育1h，用酶标仪在450nm测定吸光值，根据记录、绘制细胞生长曲线。
[0031]结果如图1所示。(A)显微拍照结果显示前导核酸制剂抑制RKO细胞的生长；(B)CCK8实验显示前导核酸制剂抑制RKO的生长；(C)显微拍照结果显示前导核酸制剂抑制HCT116细胞的生长；(D)CCK8实验显示前导核酸制剂抑制HCT116的生长。
[0032]实施例2
[0033]本实施例用于说明RNAseq检测前导核酸制剂对结直肠癌细胞基因表达的影响。
[0034]1、RNA测序(RNAseq)
[0035]每组样本5
×
107个细胞，PBS重悬，干冰低温快递至杭州联川生物技术股份有限公司进行基因表达谱RNA测序，每组三个重复。
[0036]2、筛选差异表达基因
[0037]获取杭州联川生物技术股份有限公司测序的表达谱数据集，首先对数据进行log2变换，使用R软件包limma(version 3.40.6)进行差异分析，以获得用药后的差异表达基因(表2)；使用ggplot2包对数据进行可视化，使用ComplexHeatmap包进行热图的可视化。
[0038]结果如图2所示。(A)RNAseq火山图：图中绿色为用药后下调基因；红色为上调基因；(B)部分差异基因热图。
[0039]由图2和表2可以看出，前导核酸制剂用药后，直肠腺癌细胞中2454个基因表达差异倍数超过1.5倍。其中，1210个基因表达上调(所有p<0.01)，1244个基因表达下调(所有p<0.01)。
[0040][0041][0042][0043][0044][0045][0046][0047][0048][0049][0050][0051][0052][0053]实施例3
[0054]本实施例用于说明前导核酸制剂抑制结直肠癌细胞生长的潜在分子机制。
[0055]1、GSEA富集分析
[0056]使用R包clusterProfiler进行GSEA(Gene set enrichment analysis)分析。设定最小基因集为5，最大基因集为5000，一千次重抽样，P<0.05和FDR<0.25视为统计学具有差异。
[0057]2、KEGG富集分析
[0058]使用R包clusterProfiler进行富集分析，以获得基因集富集的结果。设定最小基因集为5，最大基因集为5000，P<0.05和FDR<0.25视为统计学具有差异。
[0059]3、细胞周期等信号通路基因表达热图。
[0060]使用R包ComplexHeatmap进行热图的可视化。
[0061]结果如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种前导核酸制剂，包括序列S1和序列S2，所述序列S1的核苷酸序列为SEQ ID NO：1所示，所述序列S2的核苷酸序列为SEQ ID NO：2所示。2.根据权利要求1所述的前导核酸制剂，其中，序...

【专利技术属性】
技术研发人员：张虎，胡明，
申请(专利权)人：南京卡文迪许生物工程技术有限公司，
类型：发明
国别省市：