一种降钙素原均相化学发光检测试剂盒、检测方法与装置制造方法及图纸

本发明专利技术涉及均相化学发光检测技术领域的一种降钙素原均相化学发光检测试剂盒、检测方法与装置。所述试剂盒包括：供体试剂，其包括供体微球以及与之结合的第一标记物，所述供体微球能够在激发状态产生活性氧；和，受体试剂，其包括受体微球以及与之结合的第一结合单元，所述受体微球能够与活性氧反应生成可检测的化学发光信号，所述第一结合单元能够与降钙素原的第一表位特异性结合；其中，所述供体微球的粒径不小于受体微球的粒径。试剂盒中的供体微球的粒径不小于受体微球的粒径，提高了该试剂盒的精密性和灵敏度。盒的精密性和灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种降钙素原均相化学发光检测试剂盒、检测方法与装置
[0001]本申请是申请日为2018年7月18日，申请号为“201810790609.1”，专利技术名称为“一种降钙素原均相化学发光检测试剂盒、检测方法与装置”的中国专利申请的分案申请。


[0002]本专利技术属于均相化学发光检测
，具体涉及一种降钙素原均相化学发光检测试剂盒、检测方法与装置。

技术介绍

[0003]降钙素原即procalcitonin(PCT)，于1990年发现。现已证明其在血清中的浓度增高与感染的发生有密切的关系。在正常的个体内，其血清浓度极低，仅为10
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50pg/ml，一般方法检测不到。在全身性细菌、真菌和寄生虫感染，系统炎症反应综合症、败血症、急慢性肺炎、急性胰腺炎、活动性肝炎、创伤等情况发生时，血清PCT水平异常增高，其浓度可大至正常水平的几倍至上万倍。在病毒感染、自身免疫性疾病、器官移植排异反应等情况发生时，其血清浓度不增高或者轻微增高。
[0004]目前，生物大分子降钙素原检测常用ELISA法、胶体金法以及均相化学发光分析等。化学发光分析法是一种利用化学发光物质发射的光波进行检测的方法。化学发光物质作为标记应用于核酸检测与免疫检测中。例如，可通过多种途径将特异结合对中的某一分子与发光物质结合形成发光复合物。该复合物可与样品中被检测物(特异结合对中的另一分子)反应，分配于固相与液相中，且分配比例与检测物的量相关。通过测定固相或液相中发光量，即可得出样品中检测物的相应浓度。
[0005]化学发光分析中供体微球和受体微球的发光效率决定了化学发光分析法的检测灵敏度。为了提高供体微球和/或受体微球的发光效率，本领域一般采用提高供体微球中染料的感光效率和/或受体微球中发光化合物的接受光的效率和发光效率的方法。
[0006]虽然采用本领域所述方法可极大地提高化学发光检测法的检测灵敏度，但是仍需要开发一种能在现有技术基础上进一步提高发光效率以检测降钙素原的方法。

技术实现思路

[0007]本专利技术针对现有技术的不足提供一种降钙素原均相化学发光检测试剂盒，采用该试剂盒检测降钙素原的方法具有很高的检测灵敏度。
[0008]为此本专利技术第一方面提供了一种降钙素原均相化学发光检测试剂盒，其包括：
[0009]供体试剂，其包括供体微球以及与之结合的第一标记物，所述供体微球能够在激发状态产生活性氧；和，
[0010]受体试剂，其包括受体微球以及与之结合的第一结合单元，所述受体微球能够与活性氧反应生成可检测的化学发光信号，所述第一结合单元能够与降钙素原的第一表位特异性结合；
[0011]其中，所述供体微球的粒径不小于受体微球的粒径。
[0012]在本专利技术的一些实施方式中，所述供体微球与受体微球的粒径选自20nm
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400nm，优选选自50nm
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350nm，更优选选自100nm
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300nm，最优选为150nm
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250nm。
[0013]在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述供体微球的粒径等于受体微球的粒径。
[0014]在本专利技术的一些优选的具体实施方式中，所述供体微球与受体微球的粒径均为200nm。
[0015]在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述供体微球的粒径大于受体微球的粒径。
[0016]在本专利技术的一些优选的具体实施方式中，所述供体微球与受体微球的粒径比为1.06
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8.60，优选为1.2
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4.0，更优选为1.5
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2.01。
[0017]在本专利技术的一些实施方式中，所述供体微球表面包裹有亲水性的醛基葡聚糖。
[0018]在本专利技术的另一些实施方式中，所述受体微球表面包裹有亲水性的羧基葡萄糖。
[0019]在本专利技术的一些实施方式中，所述供体微球中填充有光敏剂，所述光敏剂选自亚甲基蓝、玫瑰红、卟碄和酞菁中的一种。
[0020]在本专利技术的另一些实施方式中，所述发光微球中填充有发光化合物；优选地，所述发光化合物为铕配合物；进一步优选地，所述铕配合物为MTTA
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。
[0021]在本专利技术的一些实施方式中，所述供体微球和受体微球均为聚苯乙烯材质微球。
[0022]在本专利技术的另一些实施方式中，所述活性氧为单线态氧。
[0023]在本专利技术的一些实施方式中，所述试剂盒还包括第一试剂，其包含第二结合单元以及与之结合的第一标记物的特异结合物，所述第二结合单元能够与降钙素原的第二表位特异性结合，所述第二表位与所述第一表位是降钙素原的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位。
[0024]在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述第一结合单元和所述第二结合单元分别独立选自与降钙素原具有结合特异性的多克隆抗体、单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体、修饰的抗体，优选选自多克隆抗体和/或单克隆抗体。
[0025]在本专利技术的一些优选的具体实施方式中，所述第一结合单元和/或所述第二结合单元独立包含至少两种能够与降钙素原的不同结合特性的表位或者不同位置的相同结合特性的表位具有结合特异性的不同的单克隆抗体、抗体结合片段、人工抗体或修饰的抗体。
[0026]在本专利技术的一些实施方式中，所述第一标记物选自亲和素和/或链霉亲和素。
[0027]在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述受体试剂中的所述受体微球的浓度选自50～300μg/mL；优选为80～250μg/mL；更优选为100～200μg/mL。
[0028]在本专利技术的另一些优选的实施方式中，所述供体试剂中的所述供体微球的浓度选自1～15μg/mL；优选为2～10μg/mL；更优选为4～8μg/mL。
[0029]本专利技术第二方面提供了一种降钙素原均相化学发光检测方法，其使用如本专利技术第一方面所述的试剂盒进行化学发光检测。
[0030]在本专利技术的一些实施方式中，所述方法包括如下步骤：
[0031]S1，将待测样本与受体试剂及供体试剂混合形成待测混合物；
[0032]S2，利用能量或者活性化合物激发所述待测混合物化学发光，测量所述化学发光的信号强度；
[0033]其中，所述供体试剂包括供体微球，所述供体微球能够在激发状态产生活性氧；所述受体试剂包括受体微球，所述受体微球能够与活性氧反应生成可检测的化学发光信号；
所述供体微球的粒径不小于所述受体微球的粒径。
[0034]本专利技术第三方面提供了一种化学发光检测装置，其利用如本专利技术第一方面所述的试剂盒或本专利技术第二专利技术所述的方法检测待测样本中的降钙素原。
[0035]在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述装置为POCT即时检测装置。
[0036]本专利技术的有益效果为：本专利技术所述试剂盒通过控制受体微球和供体微球的基质和粒径，使得将所述试剂盒用于化学发光检测降钙素原时，提高了检测的发光效率本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种降钙素原均相化学发光检测试剂盒，其包括：供体试剂，其包括供体微球以及与之结合的第一标记物，所述供体微球能够在激发状态产生活性氧；和，受体试剂，其包括受体微球以及与之结合的第一结合单元，所述受体微球能够与活性氧反应生成可检测的化学发光信号，所述第一结合单元能够与降钙素原的第一表位特异性结合；其中，所述供体微球的粒径不小于受体微球的粒径。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球与受体微球的粒径选自20nm
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400nm，优选选自50nm
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350nm，更优选选自100nm
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300nm，最优选为150nm
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250nm。3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球的粒径等于受体微球的粒径；优选地，所述供体微球与受体微球的粒径均为200nm。4.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球的粒径大于受体微球的粒径；优选地，所述供体微球与受体微球的粒径比为1.06
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8.60，优选为1.2
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4.0，更优选为1.5
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2.01。5.根据权利要求1
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4中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球表面包裹有亲水性的醛基葡聚糖；和/或，所述受体微球表面包裹有亲水性的羧基葡萄糖。6.根据权利要求1
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5中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球中填充有光敏剂，所述光敏剂选自亚甲基蓝、玫瑰红、卟碄和酞菁中的一种。7.根据权利要求1
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6中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述发光微球中填充有发光化合物；优选地，所述发光化合物为铕配合物；进一步优选地，所述铕配合物为MTTA
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。8.根据权利要求1
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7中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述供体微球和受体微球均为聚苯乙烯材质微球；和/或，所述活性氧为单线态氧。9.根据权利要求1
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8中任意一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨阳，刘宇卉，李临，
申请(专利权)人：科美博阳诊断技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：