【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于化学发光，具体涉及一种均相化学发光分析方法及其应用。
技术介绍
1、化学发光分析法根据分离与否分为均相化学发光分析法和非均相化学发光分析法。非均相化学发光分析法需要包埋、洗脱、分离等多步操作，分析过程繁琐，分析时间长，不能满足快速检测和诊断的要求。而均相化学发光分析法则有效避免了洗脱、分离等繁琐步骤，极大提高了分析效率和性价比，得到日益广泛的应用。生物素－亲和素系统(biotin-avidin—system，bas)是70年代末发展起来的一种新型生物反应放大系统。bas系统具有高亲和力，灵敏度高，稳定性高等优点的信号放大标记技术。结合二者即可偶联抗原抗体等大分子生物活性物质。它们的结合迅速、专一、稳定，并具有多级放大效应。目前bas系统主要应用于免疫学，分子生物学等领域。在体外诊断的实际应用中更是具有巨大的优越性，该法最大的缺点是有生物素的干扰，造成检测的误差。
2、生物素干扰可能产生假阳性，也可能产生假阴性。一般来说，夹心法产生假阴性，竞争法产生假阳性。目前常见解决方法：1.更换非使用亲和素-生物素系统的平台；2.停用相关药物/食物后隔日或一周后重测；3.样本预处理：链霉抗生物素蛋白包被的微粒去除样品中的生物素。
3、但是，目前还没有一种方法在亲和素-生物素系统中能够很好地解决生物素干扰的问题。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术的不足提供一种均相化学发光分析方法，该方法能够很好地解决生物素干扰的问题。
2、为此本专利技术第
3、其中，所述抗干扰剂包括载体和活性分子；所述载体为多孔介质；所述活性分子填充于所述载体之中，并能够与生物素分子特异性结合。
4、在本专利技术的一些实施方式中，所述抗干扰剂能够识别游离生物素分子和生物素标记物。
5、在本专利技术的一些具体实施方式中，所述抗干扰剂能够选择性吸附游离生物素分子。
6、在本专利技术的另一些具体实施方式中，所述游离生物素分子能够扩散到所述载体中，并与其中的所述活性分子特异性结合。
7、在本专利技术的一些实施方式中，所述抗干扰剂能够限制比所述活性分子尺寸更大的生物大分子进入其载体之中。
8、在本专利技术的另一些实施方式中，所述抗干扰剂能够在液相反应体系中均匀分布。
9、在本专利技术的一些实施方式中，所述多孔介质选自多孔金属材料、多孔非金属材料和多孔高分子材料中的一种或多种。
10、在本专利技术的另一些实施方式中，所述载体为介孔微球，优选为有序介孔微球。
11、在本专利技术的一些实施方式中，所述介孔微球的孔径为2-50nm，优选为4-30nm，更优选为5-15nm。
12、在本专利技术的另一些实施方式中，所述介孔微球为笼状中空介孔微球。
13、在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述介孔微球选自al2o3介孔材料、wo3介孔材料、tio2介孔材料、zro2介孔材料、硅基介孔材料和/或介孔碳材料中的至少一种，优选选自硅基介孔材料。
14、在本专利技术的一些实施方式中，所述活性分子选自亲和素和/或链霉亲和素。
15、在本专利技术的另一些实施方式中，所述活性分子通过物理吸附方式填充于所述载体中。
16、在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述活性分子通过在含有缓冲液的体系中与载体接触而填充于所述载体之中。
17、在本专利技术的另一些优选的实施方式中，所述含有缓冲液的体系的ph值为7至9，优选7.1至8.0，更优选7.2至7.8，进一步优选7.3-7.6。
18、在本专利技术的一些实施方式中，所述活性分子通过直接或间接化学交联的方式填充于所述载体之中。
19、在本专利技术一些优选的实施方式中，所述载体内表面修饰有化学基团，所述活性分子通过与所述化学基团的共价偶联而填充于所述载体之中；其中，所述化学基团选自羧基、醛基、氨基、巯基和羟基中的一种或多种。
20、在本专利技术的另一些优选的实施方式中，所述载体内表面连接有生物素分子，所述活性分子通过与生物素分子的特异结合作用而填充于所述载体之中。
21、在本专利技术的一些实施方式中，所述抗干扰剂还包括缓冲溶液，优选pbs缓冲溶液。
22、在本专利技术的一些实施方式中，所述抗干扰剂的制备方法包括：步骤s1，使载体与活性分子进行接触；优选地，所述接触在第一缓冲液体系中进行。
23、在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述抗干扰剂的制备方法还包括步骤s0：用第二缓冲液体系将载体进行清洗，步骤s0在步骤s1之前进行。
24、在本专利技术的另一些优选的实施方式中，所述抗干扰剂的制备方法还包括步骤s2：除去未填充到载体中的活性分子，步骤s2在步骤s1之后进行；优选地，通过向步骤s1处理后的载体中加入第三缓冲液体系，然后进行固液分离，以除去未填充到载体中的活性分子。
25、在本专利技术的一些实施方式中，所述受体表面直接地或间接地与生物大分子连接，所述生物大分子能够与待测目标分子特异性结合。
26、在本专利技术的另一些实施方式中，所述待测样品中的物质包含生物素标记物，其包括与生物素结合的能够与待测目标分子直接或间接结合的生物大分子。
27、在本专利技术的一些优选的实施方式中，所述生物大分子选自蛋白质分子、核酸分子、多糖分子和脂类分子；优选为蛋白质分子；进一步优选地，所述蛋白质分子选自抗原和/或抗体；其中，所述抗原是指具有免疫原性的物质；所述抗体是指机体产生的能识别特定外来物的免疫球蛋白。
28、在本专利技术的一些实施方式中，所述待测样品还包括供体；所述供体表面直接或间接地与生物素特异性结合物结合，能够在激发状态下生成活性氧。
29、在本专利技术的一些具体实施方式中，所述方法包括以下步骤：
30、s1，将待测样本与包含受体的试剂a、包含生物素标记物的试剂b、包含抗干扰剂的试剂c、包含供体的试剂d混合，得到待测样品；
31、s2，利用能量或活性化合物与步骤s1中得到的待测样品进行接触，激发供体产生活性氧；
32、s3，通过检测待测样品中的受体与活性氧反应产生的发光信号强度来分析判断待测样品中是否包含待测目标分子和/或待测目标分子的浓度。
33、在本专利技术的一些优选的实施方式中，步骤s1中，将待测样本与包含受体的试剂a、包含生物素标记物的试剂b、包含抗干扰剂的试剂c混合后，再与包含供体的试剂d混合，从而得到待测样品。
34、在本专利技术的一些实施方式中，步骤s2中，以600～700nm的红色激发光照射步骤s1中得到的待测样品激发其发生化学发光。
35、在本专利技术的一些实施方式中，步骤s3中，记录所述发光信号值的检测波长为520～620n本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种均相化学发光分析方法，其包括如下步骤：在抗干扰剂存在的情况下，通过检测待测样品中的受体与活性氧反应产生的发光信号强度来分析判断待测样品中是否包含待测目标分子和/或待测目标分子的浓度；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述载体为介孔微球，优选为有序介孔微球；和/或，所述介孔微球为笼状中空介孔微球。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述介孔微球的孔径为2-50nm，优选为4-30nm，更优选为5-15nm。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有缓冲液的体系的pH值为7至9，优选7.1至8.0，更优选7.2至7.8，进一步优选7.3-7.6；和/或，所述抗干扰剂还包括缓冲溶液，优选PBS缓冲溶液。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述抗干扰剂的制备方法包括：步骤S1，使载体与活性分子进行接触；优选地，所述接触在第一缓冲液体系中进行。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述抗干扰剂的制备方法还包括步骤S0：用第二缓冲液体系将载体进行清洗，步骤S0在步骤S1
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤S1中，将待测样本与包含受体的试剂a、包含生物素标记物的试剂b、包含抗干扰剂的试剂c混合后，再与包含供体的试剂d混合，从而得到待测样品。
8.一种均相化学发光检测装置，其利用权利要求1-7中任意一项所述的方法进行均相化学发光检测。
9.一种如权利要求8所述的均相化学发光检测装置的控制方法。
10.一种如权利要求1-7中任意一项所述的方法或如权利要求8所述的检测装置或如权利要求9所述的控制方法在生物素-链霉亲和素系统检测中的应用；优选地在甲状腺功能检测中的应用；进一步优选地在三碘甲状腺原氨酸和/或四碘甲状腺原氨酸检测中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种均相化学发光分析方法，其包括如下步骤：在抗干扰剂存在的情况下，通过检测待测样品中的受体与活性氧反应产生的发光信号强度来分析判断待测样品中是否包含待测目标分子和/或待测目标分子的浓度；
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述载体为介孔微球，优选为有序介孔微球；和/或，所述介孔微球为笼状中空介孔微球。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述介孔微球的孔径为2-50nm，优选为4-30nm，更优选为5-15nm。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述含有缓冲液的体系的ph值为7至9，优选7.1至8.0，更优选7.2至7.8，进一步优选7.3-7.6；和/或，所述抗干扰剂还包括缓冲溶液，优选pbs缓冲溶液。
5.根据权利要求1-4中任意一项所述的方法，其特征在于，所述抗干扰剂的制备方法包括：步骤s1，使载体与活性分子进行接触；优选地，所述接触在第一缓冲液体系中进行。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述抗干扰剂的...
【专利技术属性】
技术研发人员：金鑫，王程荣，刘宇卉，李临，
申请(专利权)人：科美博阳诊断技术上海有限公司，
类型：发明
国别省市：
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