一种用于皮肤伤口修复的生物活性组合物及其制备方法技术

本申请提供了一种用于皮肤伤口修复的生物活性组合物，所述组合物的活性成分包括抗炎成分和源自动物奶的外泌体。该组合物通过外泌体和抗炎成分的共同作用提升整体疗效，通过工程化手法利用外泌体独特的囊泡结构对PDA产生黏附和包裹，延缓有效活性成分释放，提高组合物的持效性和整体疗效。物的持效性和整体疗效。物的持效性和整体疗效。

【技术实现步骤摘要】
一种用于皮肤伤口修复的生物活性组合物及其制备方法


[0001]本专利技术涉及源自奶中的外泌体
，A61K35/20，尤其涉及一种用于皮肤伤口修复的生物活性组合物及其制备方法。

技术介绍

[0002]外泌体是一类由细胞分泌到胞外的囊泡，其组成包括脂质、蛋白质、RNA、DNA等物质，还包括广泛的信号传导因子，可作为胞间信号传导介质调控细胞行为如：靶细胞的激活、生长、迁移、分化、凋亡、坏死等。研究发现外泌体可存在于血液、尿液、唾液、母乳、胸腔积液等体液中，不同细胞生产的外泌体表现出各自的特异性；受婴儿可以用牛奶缓解皮肤炎症的经验启发，对奶或初乳中的外泌体进行了研究，并进行了抗氧化工程化改造，并发现其对皮肤伤口表现出了一定的愈合和修复能力。
[0003]但是，目前外泌体的提取中还存在很多问题，如：(1)损坏外泌体的完整性，导致外泌体中生物活性物质的损失或破坏；(2)和外泌体存在相似参数的其他囊泡影响外泌体的提取纯度等。另外，当外泌体用作伤口治疗时，其活性物质在体内的半衰期短，在皮肤伤口处容易被清除或降解而失效，由此降低了其效能的发挥。
[0004]中国专利CN114790439A公开了牛奶外泌体及其制备方法，技术中通过使用不同质量浓度的柠檬酸钠控制外泌体提取环境的酸碱度，提高外泌体和蛋白的分离度，但是这种酸碱环境的增加可能会破坏外泌体的结构完整性，导致活性成分的流失。中国专利CN115361879A公开了一种牛奶外泌体产品和方法、营养组合物和治疗方法，通过梯度离心分离出外泌体和与其尺寸具有重叠的酪蛋白，但是该外泌体是以粉末状施用于受试者，使用灵活性低，并且作用过程中其活性物质可能会在人体胃部或肠道内被降解而失活，导致药效降低。
[0005]基于以上因素，如何提高外泌体对皮肤伤口处的治疗效果，促进伤口的快速愈合，并提高外泌体的使用灵活性，是本申请所研究的主要方面。

技术实现思路

[0006]为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供了一种用于皮肤伤口修复的生物活性组合物，所述组合物的活性成分包括抗炎成分和源自动物奶的外泌体；所述外泌体有助于伤口修复和血管新生。
[0007]进一步地，所述动物奶为商业奶、初乳、原料奶中的至少一种。
[0008]进一步地，所述动物奶包括但不限于山羊奶、绵羊奶、牛奶、骆驼奶、驴奶、鹿奶中的任意一种或几种的组合。
[0009]优选地，所述动物奶为山羊奶、牛奶或骆驼奶中的任意一种或几种的组合。
[0010]优选地，所述动物奶为牛奶。
[0011]在一种实施方式中，组合物的活性成分来源于非变性或巴氏杀菌牛奶。
[0012]进一步地，本申请不对所述牛奶的来源做严格限定，可选择的有水牛奶、牦牛奶、
普通牛奶、野牛奶、黄牛奶等。
[0013]进一步地，本申请提供了所述外泌体的制备方法，包括以下步骤：
[0014](1)将乳源在10000
‑
30000g转速下离心15
‑
40分钟，收集上清液A；
[0015](2)将上清液A以80000
‑
130000g转速离心40
‑
80分钟，收集上清液B；
[0016](3)将上清液B以140000
‑
160000g转速离心80
‑
150分钟，收集沉淀；
[0017](4)使用0.1
‑
0.37μm的微滤膜对沉淀过滤除菌，即可得外泌体。
[0018]优选地，所述步骤(1)转速为11000
‑
15000g，更优选为12000
‑
14000g；离心时间为25
‑
35分钟；除去脂肪、细胞和细胞碎片。
[0019]外泌体体积小、密度低、粒径分布范围窄，一般的分离过程控制离心转速和时间就可使样品中的脂肪、细胞等杂质和外泌体分离，但是样品中总是存在一些与外泌体具有相似参数的其他囊泡，影响外泌体的有效提取和纯度，因此，需要严格控制提取工艺参数，实现外泌体的快速高效提取，并使提取的外泌体具有纯度高、粒径均一、特异性治疗效果好的特点。
[0020]优选地，所述步骤(2)转速为90000
‑
110000g，离心时间为50
‑
70分钟；除去大颗粒和参数相近的部分微囊泡。
[0021]优选地，所述步骤(3)的转速为140000
‑
150000g，离心时间为100
‑
130分钟，将外泌体沉淀并进一步都其与其他微囊泡分离。
[0022]优选地，所述步骤(4)的微滤膜孔径为0.2
‑
0.25μm。
[0023]优选地，所述步骤(1)
‑
(3)的操作环境为2
‑
8℃，优选为4
‑
6℃。
[0024]进一步地，所述抗炎成分可选择的有维生素C、维生素E、聚多巴胺、抗炎药物、对羟基苯甲酸、丹参素等中的至少一种。在一种实施方式中，抗炎成分为聚多巴胺(PDA)。
[0025]进一步地，所述聚多巴胺的合成方法为：将3
‑
羟酪胺盐酸盐与氢氧化钠溶液在室温下混合搅拌反应3
‑
10小时，之后对液体离心，收集沉淀，即为PDA。使用时将PDA溶于超纯水制成PDA的溶液。
[0026]进一步地，所述3
‑
羟酪胺盐酸盐与氢氧化钠的摩尔比为(0.005
‑
0.5)：1，优选为(0.008
‑
0.05)：1。
[0027]进一步地，组合物活性成分的组合方式为物理混合、化学交联、分层包覆中的至少一种。
[0028]优选地，组合物活性成分的组合方式为分层包覆。
[0029]在一种实施方案中，组合物的活性成分为动物奶外泌体包覆的聚多巴胺(缩写为：PDA@MEs)。
[0030]进一步地，所述组合物活性成分的制备方法为：将源自动物奶的外泌体溶液和聚多巴胺溶液按照一定的体积比分别装入脂质体挤出器的两端气密注射器内，中间设置0.1
‑
0.3μm的聚碳酸酯膜，通过脂质体挤出器反复共挤出进行分层包覆结合，得到动物奶外泌体包覆的聚多巴胺。
[0031]进一步地，所述动物奶外泌体溶液的质量浓度为0.5
‑
3mg/mL，聚多巴胺溶液的质量浓度为0.5
‑
5mg/mL，动物奶外泌体溶液和聚多巴胺溶液的体积比为(1
‑
4)：1。
[0032]配制动物奶外泌体溶液或聚多巴胺溶液所用的溶剂可以为超纯水或PBS缓冲液。
[0033]本申请中PDA具有一定的抗炎能力可与外泌体共同作用促进皮肤新生和伤口愈
合，在此基础上，利用外泌体独特的囊泡结构对PDA产生包裹，通过延缓PDA的释放，提高组合物的持效性。值得注意的是，本申请中需要控制两者的相对含量保持在特定的范围本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于皮肤伤口修复的生物活性组合物，其特征在于，所述组合物的活性成分包括抗炎成分和源自动物奶的外泌体。2.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，所述动物奶为牛奶、山羊奶、骆驼奶中的至少一种，优选为牛奶；所述抗炎成分包括维生素C、维生素E、聚多巴胺、抗炎药物、对羟基苯甲酸、丹参素中的至少一种，优选为聚多巴胺。3.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，所述外泌体的制备方法，包括以下步骤：(1)将乳源在10000
‑
30000g转速下离心15
‑
40分钟，收集上清液A；(2)将上清液A以80000
‑
130000g转速离心40
‑
80分钟，收集上清液B；(3)将上清液B以140000
‑
160000g转速离心80
‑
150分钟，收集沉淀；(4)使用0.1
‑
0.37μm的微滤膜对沉淀过滤除菌，即可得外泌体。4.根据权利要求3所述的生物活性组合物，其特征在于，所述步骤(2)转速为90000
‑
110000g，离心时间为50
‑
70分钟；步骤(3)的转速为140000
‑
150000g，离心时间为100
‑
130分钟。5.根据权利要求1所述的生物活性组合物，其特征在于，所述组合物的活性成分为动物奶外泌体包覆的聚多巴胺，制备方法为：将源自动物奶的外泌体溶液和聚多巴胺溶液按照一定的体积比分别装入脂...

【专利技术属性】
技术研发人员：马骁一，范丽敏，李永勇，任天斌，吴德群，张成功，
申请(专利权)人：江苏集萃功能材料研究所有限公司，
类型：发明
国别省市：