一种NKp46L嵌合抗原受体的构建及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种NKp46L嵌合抗原受体的构建及其应用，本发明专利技术以NKp46配体作为靶点，针对该靶点设计NKp46L

【技术实现步骤摘要】
一种NKp46L嵌合抗原受体的构建及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医药
，尤其涉及一种NKp46L嵌合抗原受体的构建及其应用。

技术介绍

[0002]嵌合抗原受体（Chimeric antigen receptor，CAR）通过基因工程方式使得如T细胞在内的免疫细胞定向识别和杀伤靶细胞。嵌合抗原受体T细胞（Chimeric antigen receptor T
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cell，CAR
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T）疗法已经在复发/难治性淋巴瘤等血液肿瘤的治疗中显示积极疗效，美国FDA已经批准了6款CAR
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T细胞药物，但靶点较为单一，4款为CD19靶点，剩余2款为BCMA靶点。
[0003]尽管CAR
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T疗法取得了一定成功，但其仍然面临诸多挑战，限制了该创新疗法的临床可及性和疗效。首先，大多数CAR
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T治疗患者会出现诸如细胞因子释放综合征（Cytokine release syndrome，CRS）或免疫效应细胞相关神经毒性综合征（Immune effector cell
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associated neurotoxicity syndrome，ICANS）的严重毒副作用，还有一小部分患者则在临床上出现明显且长期的细胞减少症，致使患者更易发生感染、出血和贫血。其次，在复发/难治性弥漫大B细胞淋巴瘤和急性淋巴细胞白血病患者中，靶向CD19的CAR
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T细胞药物的客观缓解率分别高达83%，但有约25～50%的弥漫大B细胞淋巴瘤和30～60%的急性淋巴细胞白血病患者出现复发，这往往是由于抗原逃逸致使阴性细胞快速生长。再者，CAR
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T细胞对实体瘤的临床反应和安全性均未满足临床需求。当前使用的候选肿瘤抗原多为肿瘤相关抗原（Tumor
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associated antigens，TAAs），在肿瘤细胞高表达，但在正常组织细胞亦有少量或中等表达，致使CAR
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T疗法出现“靶向非肿瘤细胞的毒性”（On
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target off
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tumor toxicity），从而限制了其在实体瘤治疗的临床应用。一项靶向碳酸酐酶IX（CAIX）靶点的CAR
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T临床研究显示，靶向CAIX的CAR
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T治疗不仅难以控制肿瘤生长，反而引发患者肝功能异常和胆管炎不良反应。另外一项靶向酪氨酸激酶受体2（ERBB2）靶点的CAR
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T治疗更是引起致死性的CRS导致患者死亡。
[0004]鉴于现有CAR
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T细胞治疗存在的问题，有必要开发一种更为安全有效的CAR
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T细胞治疗技术，以解决细胞治疗毒性和肿瘤抗原特异性的关键难题。

技术实现思路

[0005]本专利技术的主要目的在于提供一种NKp46L嵌合抗原受体的构建及其应用，旨在提供一种肿瘤药物靶点NKp46配体（NKp46L），并针对该靶点设计NKp46L嵌合抗原受体（NKp46L
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CAR）；利用该NKp46L
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CAR修饰免疫细胞得到NKp46L
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CAR免疫细胞，可用于肿瘤治疗。
[0006]本专利技术的NKp46L嵌合抗原受体能够精准靶向肿瘤细胞特异表达的NKp46L抗原，该NKp46L
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CAR通过病毒/非病毒递送方式导入多种免疫细胞，如T淋巴细胞（T细胞）、自然杀伤细胞（NK细胞）或NKT细胞等免疫细胞，并高效、稳定地表达于免疫细胞的细胞膜上，从而使免疫细胞特异性靶向肿瘤细胞，达到定向杀伤肿瘤细胞的目的。本专利技术的NKp46L
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CAR免疫
细胞，可以广谱杀伤不同类型的肿瘤细胞，且不会脱靶杀伤正常组织细胞，安全性更高。本专利技术提供的NKp46L
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CAR具有提升治疗安全性、增强疗效、避免肿瘤抗原逃逸等诸多优点。
[0007]NKp46L为NKp46的配体，NKp46为自然细胞毒性受体（NCR）的一种。
[0008]为了实现上述目的，本专利技术首先提供了NKp46配体（NKp46L）在作为肿瘤药物靶点中的应用。优选地，所述NKp46配体为肿瘤细胞表面特异表达的抗原。
[0009]优选地，所述NKp46配体在作为嵌合抗原受体靶点中的应用。
[0010]为实现上述目的，本专利技术提供了一种NKp46L嵌合抗原受体，所述NKp46L嵌合抗原受体能够与所述NKp46配体（NKp46L）结合，精准靶向肿瘤细胞。
[0011]优选地，所述NKp46L嵌合抗原受体包含与NKp46配体（NKp46L）特异结合的抗体或其片段。
[0012]优选地，所述NKp46L嵌合抗原受体包含：NKp46L特异结合的胞外识别域、胞外间隔区、跨膜区和胞内信号传导结构域。
[0013]进一步优选地，所述NKp46L嵌合抗原受体还包含：共刺激信号传导结构域和/或细胞因子受体信号传导结构域。
[0014]进一步优选地，所述NKp46L特异结合的胞外识别域为NKp46胞外域、NKp46L的特异抗体或NKp46L的识别肽。
[0015]进一步优选地所述NKp46L特异结合的胞外识别域为NKp46胞外域，所述NKp46胞外域为NKp46分子的1
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257位氨基酸（NCBI登记号：AAH64806.1）。
[0016]进一步优选地，所述胞外间隔区选自以下的一种或多种：抗体IgG的铰链区及其突变体；免疫球蛋白Fc受体的铰链区：CD16、CD32或CD64；共刺激分子的铰链区：CD28铰链区、CD8铰链区或CD137铰链区；天然细胞毒性受体铰链区：NKp30铰链区、NKp44铰链区或NKp80铰链区；NK细胞活化受体铰链区：NKG2D铰链区、Nectin铰链区或DNAM
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1铰链区；或者以上的任意组合。
[0017]进一步优选地，所述胞外间隔区包含CD28铰链区、CD8铰链区的一种或两种。
[0018]进一步优选地，所述胞外间隔区为CD28铰链区。
[0019]进一步优选地，所述胞外间隔区为CD8铰链区。
[0020]进一步优选地，所述跨膜区为T细胞受体复合物的CD3ξ链的跨膜区、CD28跨膜区、CD8跨膜区、CD137跨膜区中的一种或多种。
[0021]进一步优选地，所述跨膜区为CD28跨膜区、CD8跨膜区中的一种或两种。
[0022]进一步优选地，所述跨膜区为CD28跨膜区。
[0023]进一步优选地，所述跨膜区为CD8跨膜区。
[0024]进一步优选地，所述胞内信号传导结构域为CD3ξ链、FcγRIII、FcεRI、CD16、CD32、CD64、携带免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM）的信号传导结构域或其一种或多种的组合。
[0025]进一步优选地，所述胞内信号传导结构域为CD3本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.NKp46配体在作为肿瘤药物靶点中的应用。2.如权利要求1所述应用，其特征在于，NKp46配体在作为嵌合抗原受体靶点中的应用。3.一种NKp46L嵌合抗原受体，其特征在于，所述NKp46L嵌合抗原受体能够与权利要求1或2中所述NKp46配体特异结合。4.如权利要求3所述的NKp46L嵌合抗原受体，其特征在于，所述NKp46L嵌合抗原受体包含与权利要求1或2中所述NKp46配体特异结合的抗体或其片段。5.如权利要求3或4所述的NKp46L嵌合抗原受体，其特征在于，包含：NKp46配体特异结合的胞外识别域、胞外间隔区、跨膜区和胞内信号传导结构域。6.一种核酸分子，其特征在于，其编码...

【专利技术属性】
技术研发人员：谭晓华，廖启彬，李宁，卢洪洲，范忠义，韦婉珊，
申请(专利权)人：深圳市第三人民医院深圳市肝病研究所，
类型：发明
国别省市：