一种乳酸乳球菌乳酸亚种及其在腐乳制备中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种乳酸乳球菌乳酸亚种及其在腐乳制备中的应用。该乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcuslactissubsp.lactis)的保藏号为GDMCCNo.62711。该菌株对氨苄西林、万古霉素和氯霉素等9种抗生素敏感，安全性符合EFSA的要求，不产尸胺、腐胺等毒性代谢物。该菌株生长速度快，活力高，最大活菌数高达12.64LogCFU/mL，且具有较好的耐酸性、耐盐性。该菌株上清液对腐乳工厂中产生物膜能力不同的代表性蜡样芽孢杆菌均有较好的抑制效果，经模拟工厂发酵条件，接种该菌株发酵腐乳毛坯，测定表明蜡样芽孢杆菌菌数下降1.48LogCFU/g。孢杆菌菌数下降1.48LogCFU/g。孢杆菌菌数下降1.48LogCFU/g。

【技术实现步骤摘要】
No.62711。保藏于广东省微生物菌种保藏中心，保藏地点为广州市先烈中路100号大院59号楼5楼广东省微生物菌种保藏中心，保藏日期为2022年8月23日。
[0008]所述的乳酸乳球菌乳酸亚种在腐乳制备中的应用。
[0009]为进一步实现本专利技术目的，优选地，在灭菌后的培养基中接种乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lacti)，培育后离心，稀释到5
‑
6Log CFU/g，然后与毛霉菌液一起接种到豆腐白坯，25
‑
30℃温度下发酵25
‑
30h，加盐腌制，得腐乳。
[0010]优选地，所述乳酸乳球菌乳酸亚种的培养基为M17、MRS和豆腐黄浆水，初始p H值为6
‑
9。
[0011]优选地，所述培养基的灭菌方法为120
‑
125℃灭菌10
‑
30min。
[0012]优选地，所述培养基中乳酸乳球菌乳酸亚种的接种量为3
‑
10wt％。
[0013]优选地，所述的乳酸乳球菌乳酸亚种在培养基中接种的方法是25
‑
35℃的温度下培养18
‑
30h后，在3000
‑
8000g的转速下离心10
‑
30min，倾去上清液，加入0.85
‑
2wt％的无菌食盐水，制成乳酸乳球菌乳酸亚种菌悬液。
[0014]优选地，稀释后的乳酸乳球菌乳酸亚种菌悬液的浓度为5
‑r/>6Log CFU/g；毛霉菌悬液的浓度为5
‑
6Log CFU/g；乳酸乳球菌乳酸亚种菌悬液与毛霉菌悬液按1:1
‑
2体积比接种到豆腐白坯。
[0015]优选地，所述的乳酸乳球菌乳酸亚种在豆腐白坯中的接种量为1
‑
3mL/100g。
[0016]优选地，所述的腐乳毛坯加入8
‑
12％的食盐腌制3
‑
12h后装瓶，在15
‑
32℃温度下后熟45
‑
60天。
[0017]本专利技术相对于已有的商业菌株，具有以下的优点：
[0018]1)本专利技术乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)菌株生长速度快，活力高，培养条件简单，易于工业化生产和管理，开发应用前景广阔。
[0019]2)本专利技术乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)菌株具备耐酸、耐盐特性，能很好的适应腐乳等高盐产品的生产环境。
[0020]3)本专利技术乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)菌株产羊毛硫Ia型细菌素Nisin，对腐乳工厂中产生物膜的代表性蜡样芽孢杆菌具有显著的抑制效果，能提高腐乳等产品生产的安全性。
[0021]4)本专利技术乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)菌株对抗生素氨苄西林、万古霉素、庆大霉素、卡那霉素、链霉素、克林霉素、四环素、红霉素和氯霉素敏感，安全性符合EFSA的要求，无相关耐药基因。
[0022]5)本专利技术乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)菌株不产尸胺、组胺、腐胺、酪胺四种生物胺，不产明胶酶及溶血素，不能利用色氨酸产生吲哚，无相关氨基酸脱羧酶编码基因及毒力基因。
[0023]6)本专利技术乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)菌株生长温域宽，生命力旺盛，活力高，最大活菌数高达12.64Log CFU/mL。
[0024]7)本专利技术乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)菌株在pH3
‑
10的培养液中能生长，在6
‑
8％质量浓度NaCl的培养液中能生长，基因组存在3种应对高渗胁迫的编码基因及8种不同的双组分系统，具有较好的耐酸、耐盐特性。
[0025]8)本专利技术乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)菌株具有
lactis subsp.lactis LJL7m20菌液使用MH培养基30℃培养2天，调菌液至0.5麦氏浊度(8Log CFU/mL左右)。分别在96孔板中加入100μL抗生素稀释液和100μL菌液，设置空白培养基对照和菌液对照，30℃培养2天。使用酶标仪测定孔板中菌液在600nm下的OD值，实验设置3个平行。乳酸乳球菌药敏结果的判定参照EFSA标准，如表1：
[0043]表1菌株耐药性拐点
[0044][0045](5)菌株生物胺测定
[0046]采用显色法测定乳酸乳球菌产生物胺(尸胺，组胺，腐胺，酪胺)的情况。先制备生物胺诱导培养基，在M17液体培养基中分别添加0.1％的前体氨基酸(酪氨酸盐酸盐、鸟氨酸盐酸盐、组氨酸、赖氨酸)以及0.005％VB6，121℃灭菌15min。将活化好的Lactococcus lactis subsp.lactis LJL7m20按3％的比例接种至生物胺诱导培养基，连续诱导5代。分别取100μL诱导后的菌液加入到显色培养基中，培养24h。根据培养基颜色判断菌株产生物胺情况，紫色为阳性，淡紫色或黄色为阴性。
[0047](6)菌株明胶酶活性测定
[0048]将活化好的Lactococcus lactis subsp.lactis LJL7m20按3％接种于明胶培养基中，30℃培养24h。然后放入4℃冰箱5h，观察培养基是否液化。
[0049](7)菌株溶血活性测定
[0050]将活化好的Lactococcus lactis subsp.lactis LJL7m20划线于血琼脂平板上，30℃培养48h，观察是否出现α
‑
溶血(绿色光泽)现象，然后在4℃下静置24h观察是否出现β
‑
溶血(溶血圈)现象，无现象则为γ
‑
溶血。
[0051](8)产靛基质情况
[0052]将活化好的Lactococcus lactis subsp.lactis LJL7m20按3％接种于胰蛋白胨水培养基，30℃培养72h。然后向培养液中加入少量乙醚，震荡均匀，提取和浓缩靛基质，待乙醚浮于培养基表面时缓慢滴加8
‑
10滴Kovacs氏试剂，出现红色圆环则为靛基质阳性。以大肠杆菌ATCC25922作为质控菌株。
[0053](9)菌株温度适应性及生长特性测定
[0054]将Lactococcus lactis subsp.lactis LJL7m20接种于M17液体培养基中，于30℃
培养24h，获得种子液。按2％(v/v)接种于M17液体培养基中，分别在25℃，30℃，35℃本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactis subsp.lactis)，其特征在于，保藏号为GDMCC No.62711。2.权利要求1所述的乳酸乳球菌乳酸亚种在腐乳制备中的应用。3.根据权利要求2所述的乳酸乳球菌乳酸亚种在腐乳制备中的应用，其特征在于，在灭菌后的培养基中接种乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lacti)，培育后离心，稀释到5
‑
6Log CFU/g，然后与毛霉菌液一起接种到豆腐白坯，25
‑
30℃温度下发酵25
‑
30h，加盐腌制，得腐乳。4.根据权利要求3所述的乳酸乳球菌乳酸亚种在腐乳制备中的应用，其特征在于，所述乳酸乳球菌乳酸亚种的培养基为M17、MRS和豆腐黄浆水，初始p H值为6
‑
9。5.根据权利要求3所述的乳酸乳球菌乳酸亚种在腐乳制备中的应用，其特征在于，所述培养基的灭菌方法为120
‑
125℃灭菌10
‑
30min。6.根据权利要求3所述的乳酸乳球菌乳酸亚种在腐乳制备中的应用，其特征在于，所述培养基中乳酸乳球菌乳酸亚种的接种量为3
‑
10wt％。7.根据权利要求3所述的乳酸乳球菌乳酸亚种在腐乳制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：李理，冼佳露，金泽坤，周朝晖，刘传运，李铁桥，卢丽玲，
申请(专利权)人：广东珠江桥生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：