一种肉苁蓉茎腐病拮抗菌、生物菌剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种肉苁蓉茎腐病拮抗菌、生物菌剂及其应用，该菌株为拮抗菌WLKYLW

【技术实现步骤摘要】
一种肉苁蓉茎腐病拮抗菌、生物菌剂及其应用


[0001]本专利技术属于微生物学、生物技术和生物防治
，具体涉及一种肉苁蓉茎腐病拮抗菌、生物菌剂及其应用。

技术介绍

[0002]肉苁蓉是我国名贵中药材，始载于《神农本草经》，古典《本草经疏》《本草江言》《本草逢原》《本草求真》等多有记载。《中国药典》记载其功效为“肾阳、益精血、润肠通便。用于肾阳不足、精血亏虚、阳痿不孕、腰膝酸痛、筋骨无力、肠燥便秘”。
[0003]然而，在肉苁蓉人工种植产业发展过程中，肉苁蓉茎腐病成为制约该产业发展的一个主要病害。学者将主要造成肉苁蓉地下茎(其药用部位)腐烂的病称为肉苁蓉茎腐病，通过对其病原菌分离鉴定得知该病害是由真菌侵染所引起的病害，在宁夏地区分离到的主要病原为接骨木镰刀菌Fusarium sambucinum。在甘肃民勤主要分离到尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、层出镰刀菌(Fusarium prolifertum)和锐顶镰刀菌(Fusarium acuminatum)，因为，肉苁蓉是直接用食用或药用，所以其生产过程多数都是有机生产为主，不能使用任何化肥农药，使得该病害发生时生产者几乎不能采取任何化学药剂防治措施，造成该产业健康发展严重受阻。而且，若长期使用化学药剂，则容易促使肉苁蓉茎腐病病菌产生抗药性。虽然市面有部分生物农药，但是其对该病害的防治效果还未可知。所以，筛选对该病害具有显著抑制效果的拮抗菌是防治该病害的一个主要方面。而拮抗芽孢杆菌作为一类有着广泛实际用途的微生物资源，它们具有生长快，营养需求简单，产芽孢，抗逆性强等优点，在植物病害生物防治中很有开发应用前景。目前还未见拮抗芽孢杆菌在肉苁蓉茎腐病防治中的研究报道。

技术实现思路

[0004]为解决上述问题，本专利技术提供了一株肉苁蓉茎腐病拮抗菌，该肉苁蓉茎腐病拮抗菌对肉苁蓉茎腐病具有较好的防治效果，对环境、人畜安全，为肉苁蓉茎腐病防治提供了一个途径，以肉苁蓉茎腐病拮抗菌为活性成分，可制备抗肉苁蓉茎腐病的生物农药。
[0005]为实现上述目的，本专利技术是通过以下技术方案来实现的：
[0006]一种肉苁蓉茎腐病拮抗菌，该菌株为拮抗菌WLKYLW
‑
9，属于耐盐芽孢杆菌Bacillus halotolerans，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.26809。保藏地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号。保藏日期为2023年3月14日
[0007]优选的，所述拮抗菌WLKYLW
‑
9在LB固体培养基上菌落呈白色，表面滋润，边缘不整齐，随着培养时间延长，菌落中间有褶皱，为革兰氏阳性菌，呈杆状，有芽孢，能够分泌蛋白酶、淀粉酶及羧甲基纤维素酶。
[0008]优选的，所述拮抗菌WLKYLW
‑
9的16S rDNA序列如SEQ ID NO:1所示。
[0009]一种生物菌剂，其含有如上所述的肉苁蓉茎腐病拮抗菌WLKYLW
‑
9。
[0010]优选的，其由所述肉苁蓉茎腐病拮抗菌WLKYLW
‑
9经发酵而成。
[0011]如上所述的生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：将所述肉苁蓉茎腐病拮抗菌WLKYLW
‑
9接种于NB液体培养基中发酵培养，得到的发酵培养液即生物菌剂。
[0012]优选的，所述培养温度为26～30℃；所述发酵培养时间为2～4d，培养在振荡条件下进行，振荡速率为100～200r/min。
[0013]如上所述的肉苁蓉茎腐病拮抗菌或如上所述的生物菌剂在抗病原菌、或由病原菌所导致的相关疾病和植物病害中的应用。
[0014]优选的，所述病原菌为肉苁蓉茎腐病菌；所述肉苁蓉茎腐病菌为尖孢镰刀菌、层出镰刀菌和锐顶镰刀菌中的至少一种；所述植物病害为肉苁蓉茎腐病。
[0015]优选的，将包含所述肉苁蓉茎腐病拮抗菌的生物菌剂，对植物进行灌根；所述灌根的生物菌剂的肉苁蓉茎腐病拮抗菌WLKYLW
‑
9的有效活菌数为0.5～1.5
×
108cfu/mL，灌根量为200mL每个接种部位。
[0016]本专利技术与现有技术相比具有如下优点：本专利技术提供了一株对肉苁蓉茎腐病病菌具有抑制作用的WLKYLW
‑
9菌株，解决了肉苁蓉茎腐病防治中长期使用化学药剂促使肉苁蓉茎腐病病菌产生抗药性的问题；同时可以将本申请的WLKYLW
‑
9菌株作为活性成分制成生物农药，防治肉苁蓉茎腐病，并且增加肉苁蓉的产量，使农民增收，具有重大的经济效益。
附图说明
[0017]图1为本专利技术耐盐芽孢杆菌WLKYLW
‑
9在LB固体培养基上的菌落形态。
[0018]图2为本专利技术耐盐芽孢杆菌WLKYLW
‑
9的格兰氏染色下的形态特征(40
×
)。
[0019]图3本专利技术耐盐芽孢杆菌WLKYLW
‑
9菌株的系统进化树。
[0020]图4为耐盐芽孢杆菌WLKYLW
‑
9对肉苁蓉茎腐病病原菌的抑制效果；图中4A左边为受耐盐芽孢杆菌影响的尖孢镰刀菌的菌落图片，右边为正常生长的尖孢镰刀菌的图片；图中4B左边为受耐盐芽孢杆菌影响的层出镰刀菌的菌落图片，右边为正常生长的层出镰刀菌的图片；图中4C左边为受耐盐芽孢杆菌影响的锐顶镰刀菌的菌落图片，右边为正常生长的锐顶镰刀菌的图片。
[0021]图5为本专利技术耐盐芽孢杆菌WLKYLW
‑
9在淀粉培养基上产生的透明圈。
[0022]图6为本专利技术耐盐芽孢杆菌WLKYLW
‑
9在酪蛋白培养基上产生的透明圈。
[0023]图7为本专利技术耐盐芽孢杆菌WLKYLW
‑
9在羧甲基纤维素培养基上产生的透明圈。
具体实施方式
[0024]下面结合具体实施例对本专利技术进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本专利技术，但不以任何形式限制本专利技术。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本专利技术构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本专利技术的保护范围。
[0025]实施例1
[0026]本实施例主要筛选并鉴定拮抗菌，具体筛选和鉴定过程如下所示：
[0027]1.试验方法
[0028](1)菌株分离
[0029]采用稀释涂布法分离土壤中的拮抗细菌。土样采自武威市民勤县青土湖肉苁蓉种植区土壤，风干过筛(2mm筛目)的土样取10g，放入250mL锥形瓶中加入90mL无菌水于80℃水浴30min，再充分振荡30min，10倍比稀释，趁悬浮液沉降静止前再吸10mL加入另一90mL灭菌水的三角瓶中振荡摇匀，并依次稀释成浓度为10
‑1g/mL、10
‑2g/mL、10
‑3g/mL、10
‑4g/mL、10
‑5g/本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种肉苁蓉茎腐病拮抗菌，其特征在于，该菌株为拮抗菌WLKYLW
‑
9，属于耐盐芽孢杆菌，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.26809。2.如权利要求1所述的肉苁蓉茎腐病拮抗菌，其特征在于，所述拮抗菌WLKYLW
‑
9在LB固体培养基上菌落呈白色，表面滋润，边缘不整齐，随着培养时间延长，菌落中间有褶皱，为革兰氏阳性菌，呈杆状，有芽孢，能够分泌蛋白酶、淀粉酶及羧甲基纤维素酶。3.如权利要求1所述的肉苁蓉茎腐病拮抗菌，其特征在于，所述拮抗菌WLKYLW
‑
9的16S rDNA序列如SEQ ID NO:1所示。4.一种生物菌剂，其特征在于，其含有如权利要求1～3任一项所述的肉苁蓉茎腐病拮抗菌WLKYLW
‑
9。5.如权利要求4所述的生物菌剂，其特征在于，其由所述肉苁蓉茎腐病拮抗菌WLKYLW
‑
9经发酵而成。6.如权利要求4～5任一项所述的生物菌剂的制...

【专利技术属性】
技术研发人员：何彩，刘伟，李强，金娜，晋敏，张军，张涛，王鑫，赵连鑫，张勤德，张斌，段爱莉，陈岩辉，胡芳，叶芳，张秉铭，史星雲，任德全，高生春，李栋，董存元，王曼，杨作奎，韩登山，
申请(专利权)人：武威市林业科学研究院，
类型：发明
国别省市：