一种快速检测乳品中脂肪酸衍生物的方法技术

本发明专利技术涉及一种快速检测乳品中脂肪酸衍生物的方法，属于脂肪酸衍生物检测技术领域。本发明专利技术的基于在线固相催化衍生化与液相色谱

【技术实现步骤摘要】
一种快速检测乳品中脂肪酸衍生物的方法


[0001]本专利技术涉及一种快速检测乳品中脂肪酸衍生物的方法，属于脂肪酸衍生物检测


技术介绍

[0002]脂质是食物的主要成分之一，也是生物系统的重要组成部分，在细胞和生物体的结构、信号传导中起着基础性作用。脂质可以用于能量储存和代谢，调节膜的流动性和信号分子之间的相互作用，以及为脂质信号分子的产生提供多种前体物质，有助于调节多种代谢和免疫过程。
[0003]乳脂一般是指乳中分离提取到的脂肪，是重要的膳食脂肪来源，也是自然界中最复杂的脂肪之一。乳脂含有较多对人体健康有益的生理活性物质，不仅能够增强免疫力，还能调节心血管以及胃肠道方面的疾病。目前已经在乳品中发现了众多有生物学活性的功能性脂质，包括n
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3二十二碳五烯酸(n
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3DPA)、共轭脂肪酸(CLA)和羟基脂肪酸支链脂肪酸酯(FAHFA)等脂肪酸衍生物。这些不常见的脂肪酸拥有多种生理功能，如n
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3DPA能预防心血管相关疾病，CLA同样具有一些有益的健康作用，如减少体脂、改善胰岛素抵抗、降低动脉粥样硬化、调节免疫系统和刺激骨矿化等，而FAHFA是一个具有多种组合和同分异构体的的大家族，在多种代谢疾病和慢性炎症中起到作用，包括抑制慢性和急性炎症，缓解动脉粥样硬化，作为肿瘤疾病的生物标志物等。
[0004]了解乳品中这些有益的功能脂质的组成和分布是有必要的，但由于乳品组成复杂，且脂肪酸衍生物含量较低，因此在检测之前通常需要对样本进行前处理，对脂肪酸衍生物进行分离纯化。
[0005]传统的脂肪酸衍生物检测方法主要通过样品处理，脂质提取，固相萃取小柱富集，再通过超高效液相色谱(Ultra
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high performance liquid chromatography,UHPLC)串联质谱(Mass Spectrometry,MS)法进行检测；但由于脂肪酸衍生物结构中含有羧酸基团，一般在负离子模式下检测，电离效率较低，这在很大程度上限制了液质联用技术对该类物质的灵敏分析，不利于低丰度的脂肪酸衍生物的检测。
[0006]衍生化技术(Derivatization)是指待测样品与具有特定基团的衍生化试剂在催化剂的作用下反应生成符合要求的衍生物，然后通过检测衍生物的量来间接测定待测样品的量。衍生化后能够改变待测物的检测特性，增加其对检测器的响应，并且能够生成稳定衍生化物改善待测物的不稳定性。同时，衍生化反应能提高待测样品的选择性，衍生化产物的质谱碎裂会高效生成能准确鉴定结构的碎片离子。衍生化技术还可以提高电离效率，减少复杂样品分析时的电离抑制，进而提高电喷雾质谱分析的灵敏度。衍生化技术适用于生物样品中带有目标官能团的代谢物的准确定性和定量分析。
[0007]但目前通常采取离线固相萃取后进行衍生化操作耗时，步骤繁琐，检出脂肪酸衍生物种类少且重现性差，不能满足对样本实现简便快速分析的要求。

技术实现思路

[0008]为解决上述技术问题，本专利技术采用了一种在线固相催化衍生化与液相色谱
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串联质谱联用的方法对乳品中的脂肪酸衍生物进行检测；具体是采用在线固相催化衍生化对乳品样品进行处理，并基于阀切换将其与液相色谱串联质谱连通，从而实现快速、准确测定乳品中不同种类的脂肪酸衍生物的含量目的。
[0009]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0010]本专利技术的目的是提供一种基于在线固相催化衍生化与液相色谱
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串联质谱联用测定乳品中脂肪酸衍生物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0011](1)乳品前处理
[0012]将乳品样品溶于水中，并加入甲醇和三氯甲烷混合溶液涡旋振荡，离心取有机相，重复2～3次，合并有机相，浓缩、复溶，即为乳品待测液；
[0013](2)乳品中脂肪酸衍生物的测定
[0014]将步骤(1)制备的乳品待测液和标准品通过在线固相催化衍生化装置，使乳品中的脂肪酸衍生物充分的衍生化；通过调节在线固相催化衍生化装置上的六通阀，使得到衍生化后的脂肪酸衍生化样品流向高效液相色谱串联质谱进行测定，并根据标准品中脂肪酸衍生物的碎裂规律以及峰面积对待测液测定数据进行分析处理，即得到乳品中脂肪酸衍生物的种类和含量；所述衍生化使用的衍生化试剂包括2
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甲基吡啶胺、N,N
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二甲基乙二胺、4
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喹啉甲胺盐酸盐、O
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苄基羟胺盐酸盐、2
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溴苯乙酮中的任一种。
[0015]在一种实施方式中，所述乳品包括生鲜牛/羊乳、全脂/脱脂乳粉、乳脂肪或干酪中的一种或多种。
[0016]在一种实施方式中，步骤(1)所述甲醇和三氯甲烷混合溶液中甲醇和三氯甲烷的体积比为1:2。
[0017]在一种实施方式中，步骤(1)所述离心条件为：8000～12000rpm，时间为10～20min。
[0018]在一种实施方式中，步骤(1)所述复溶使用的溶剂为乙腈。
[0019]在一种实施方式中，步骤(1)水与甲醇和三氯甲烷混合溶液的体积比为1:2～3。
[0020]在一种实施方式中，步骤(2)所述在线固相催化衍生化装置主要由样品进样器、泵、定量环、进样六通阀(V1)、催化反应小柱、在线控温系统、切换六通阀(V2)、流通管路和液相色谱仪、高分辨质谱仪组成；定量环位于进样六通阀(V1)中，催化反应小柱位于切换六通阀(V2)中，在线控温系统与催化反应小柱相连，输送泵和进样泵与进样六通阀(V1)相连，切换六通阀(V2)与衍生化试剂和分析泵相连，同时与液相色谱仪相连，能够将样品输送到高分辨质谱仪中；样品依次经过进样器、进样六通阀(V1)、定量环、催化反应小柱、切换六通阀(V2)、液相色谱仪和高分辨质谱仪，在线固相催化衍生化与高效液相色谱
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质谱联用装置通过单片机控制系统进行自动化控制。
[0021]在一种实施方式中，所述乳品中的脂肪酸衍生物充分的衍生化的具体过程包括：
[0022]0‑
1min，在上样状态下，定量环与样品溶液和进样泵连接，通过进样泵将样品溶液加载于定量环中，催化反应小柱的进样端通过切换阀与衍生化试剂进样器以及分析泵连通，出样端通过切换阀与排废口连通，衍生化试剂经所述分析泵进入催化反应小柱内；其中，所述分析泵系统以0.5 1mL/min的流速泵送衍生化试剂；
[0023]1‑
10min，调整切换阀，将催化反应小柱的进样端通过进样阀与输送泵和定量环连通，出样端通过切换阀与排废口连通；调整进样阀，将定量环的两端与输送泵和切换阀连接，使定量环中的样品自动加载到催化反应小柱上，继而自动控温系统启动，实时调控反应温度，使样品溶液和衍生化试剂在催化反应小柱内发生反应；其中，所述输送泵系统以0.1 1mL/min的流速泵送100％乙腈溶剂；
[0024]10
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13min，调整切换阀，将催化本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于在线固相催化衍生化与液相色谱
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串联质谱联用测定乳品中脂肪酸衍生物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：(1)乳品前处理将乳品样品溶于水中，并加入甲醇和三氯甲烷混合溶液涡旋振荡，离心取有机相，重复2～3次，合并有机相，浓缩、复溶，即为乳品待测液；(2)乳品中脂肪酸衍生物的测定将步骤(1)制备的乳品待测液和标准品通过在线固相催化衍生化装置，使乳品中的脂肪酸衍生物充分的衍生化；通过调节在线固相催化衍生化装置上的六通阀，使得到衍生化后的脂肪酸衍生化样品流向高效液相色谱串联质谱进行测定，并根据标准品中脂肪酸衍生物的碎裂规律以及峰面积对待测液测定数据进行分析处理，即得到乳品中脂肪酸衍生物的种类和含量；所述衍生化使用的衍生化试剂包括2
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甲基吡啶胺、N,N
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二甲基乙二胺、4
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喹啉甲胺盐酸盐、O
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苄基羟胺盐酸盐、2
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溴苯乙酮中的任一种。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述甲醇和三氯甲烷混合溶液中甲醇和三氯甲烷的体积比为1:2。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)所述离心条件为：8000～12000rpm，时间为10～20min。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)所述在线固相催化衍生化装置主要由样品进样器、泵、定量环、进样六通阀V1、催化反应小柱、在线控温系统、切换六通阀V2、流通管路和液相色谱仪、高分辨质谱仪组成；定量环位于进样六通阀V1中，催化反应小柱位于切换六通阀V2中，在线控温系统与催化反应小柱相连，输送泵和进样泵与进样六通阀V1相连，切换六通阀V2与衍生化试剂和分析泵相连，同时与液相色谱仪相连，能够将样品输送到高分辨质谱仪中；样品依次经过进样器、进样六通阀V1、定量环、催化反应小柱、切换六通阀V2、液相色谱仪和高分辨质谱仪，在线固相催化衍生化与高效液相色谱
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质谱联用装置通过单片机控制系统进行自动化控制。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乳品中的脂肪酸衍生物充分的衍生化的具体过程包括：0
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1min，在上样状态下，定量环与样品溶液和进样泵连接，通过进样泵将样品溶液加载于定量环中，催化反应小柱的进样端通过切换阀与衍生化试剂进样器以及分析泵连通，出样端通过切换阀与排废口连通，衍生化试剂经所述分析泵进入催化反应小柱内；其中，所述分析泵系统以0.5 1mL/min的流速泵送衍生化试...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐勇将，朱爽，刘元法，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：