一种抗人CD209和CD209L的单克隆抗体、试剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种抗人CD209和CD209L的单克隆抗体、试剂及其应用，涉及生物医学技术领域。本发明专利技术为通过受体CD209和CD209L感染细胞的病原体感染提供了新的预防和治疗方案，抗人CD209和CD209L的单克隆抗体能够特异性识别CD209和CD209L，并与CD209和CD209L结合，从而封闭了人细胞表面受体CD209和CD209L，使得病原体的蛋白无法结合人细胞表面受体CD209和CD209L，阻断了这一类通过CD209和CD209L受体感染宿主的病原体感染宿主细胞。此外，本发明专利技术提供的单克隆抗体可用于人CD209和CD209L蛋白的检测。的检测。的检测。

【技术实现步骤摘要】
一种抗人CD209和CD209L的单克隆抗体、试剂及其应用


[0001]本专利技术涉及生物医学
，具体而言，涉及一种抗人CD209和CD209L的单克隆抗体、试剂及其应用。

技术介绍

[0002]新冠病毒(SARS
‑
CoV
‑
2)持续性大流行对全球公共卫生构成严重威胁，对全球社会经济造成严重破坏。病毒通常是通过与宿主细胞表面的受体结合进入细胞，进而导致病毒感染的发生，SARS
‑
CoV
‑
2也不例外。血管紧张素转换酶2(ACE2)是首先被鉴定的SARS
‑
CoV
‑
2侵染宿主细胞的主要受体，SARS
‑
CoV
‑
2通过其表面糖蛋白Spike的受体结合域(RBD)与ACE2结合介导病毒进入宿主细胞[1]。但有研究发现在缺乏ACE2表达的免疫和非免疫细胞中也存在新冠病毒的易感性，说明spike蛋白可能利用其他受体进行感染。
[0003]随着研究的不断深入，越来越多的新冠病毒受体被鉴定出来，其中包括C型凝集素受体家族的两个分子CD209/DC
‑
SIGN和CD209L/L
‑
SIGN[2,3]。CD209与CD209L具有77％的氨基酸序列同一性，其中CD209主要表达在树突状细胞，CD209L则主要在人肝窦内皮细胞(LSEC)、淋巴内皮细胞和肺内皮细胞中表达。CD209与CD209L均是II型跨膜糖蛋白受体，它们的胞外域是由颈部区域和碳水化合物识别域(CRD)组成，其中颈部区域是23个氨基酸的重复序列，主要参与蛋白质二聚化或寡聚化，CRD则对于CD209和CD209L识别病原体上特定糖蛋白上存在的甘露糖结构至关重要。SARS
‑
CoV
‑
2刺突蛋白的N
‑
糖基化主要是寡甘露糖型聚糖，这可能是SARS
‑
CoV
‑
2刺突蛋白与CD209和CD209L存在强结合的原因[4]。作为人类基因组中最常见的病原体识别受体成员，除SARS
‑
CoV
‑
2外，CD209和CD209L还可以作为SARS
‑
CoV、埃博拉病毒、登革热病毒、HIV、流感病毒、丙型肝炎病毒等的受体介导病毒顺式或反式感染细胞[5]。因此，CD209和CD209L是抗病毒药物研究中很有前景的治疗靶点。
[0004]自从1986年第一个鼠源性单克隆抗体药物Muromonab OKT3问世以来，越来越多的单抗药物相继被批准用于治疗肿瘤、自身免疫性疾病、感染性疾病和移植排斥反应等多种疾病，同时还有众多单克隆抗体正处于临床研究的不同阶段。因此，单抗药物已经成为生物医药的重要组成部分。目前市面上还没有针对SARS
‑
CoV
‑
2的特效药物，而已有的针对SARS
‑
CoV
‑
2的疫苗和靶向spike蛋白的封闭抗体随着病毒变体的不断出现其有效性也逐渐受到限制。由于新冠病毒感染细胞需要通过Spike蛋白与宿主细胞表面受体(例如，ACE2、CD209、CD209L等)结合，故利用受体的阻断性单克隆抗体同样可以阻断新冠病毒的感染，并且相对病毒疫苗和Spike蛋白的封闭抗体,针对病毒受体的阻断抗体对不断出现的病毒变体产生耐药性的可能性也会大大降低。另外，针对受体的阻断抗体不仅能够阻断新冠病毒感染宿主细胞，还能够阻断其它通过该受体感染宿主细胞的病毒。
[0005]我们和另外一个研究组发现针对受体ACE2的阻断性抗体对SARS
‑
COV和SARS
‑
COV
‑
2以及SARS
‑
COV
‑
2的多种变体均有阻断效果就证实了这两点[6
‑
8]。
[0006]鉴于此，特提出本专利技术。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一种抗人CD209和CD209L的单克隆抗体、试剂及其应用，本专利技术为通过受体CD209和CD209L感染细胞的病原体感染提供了新的预防和治疗方案，抗人CD209和CD209L的单克隆抗体能够特异性识别CD209和CD209L，并与CD209和CD209L结合，从而封闭了人细胞表面受体CD209和CD209L，使得病原体的蛋白(例如包膜蛋白)无法结合人细胞表面受体CD209和CD209L，从而阻断了这一类通过CD209和CD209L受体感染宿主的病原体感染宿主细胞。本专利技术的提出具有重要的应用价值。
[0008]本专利技术是这样实现的：
[0009]第一方面，本专利技术提供了一种抗人CD209和CD209L的单克隆抗体，其包括重链可变区和轻链可变区，重链可变区包括如下三个重链互补决定区：CDR
‑
VH1，CDR
‑
VH2和CDR
‑
VH3，轻链可变区包括如下三个轻链互补决定区：CDR
‑
VL1，CDR
‑
VL2和CDR
‑
VL3，CDR
‑
VH1，CDR
‑
VH2和CDR
‑
VH3的氨基酸序列如SEQ ID NO：1
‑
3所示，CDR
‑
VL1，CDR
‑
VL2和CDR
‑
VL3的氨基酸序列如SEQ IDNO：4
‑
6所示。
[0010]CDR
‑
VH1，SEQ ID NO：1的序列为：
[0011]GFTFRDYA；
[0012]CDR
‑
VH2，SEQ ID NO：2的序列为：
[0013]ISGGGSFT；
[0014]CDR
‑
VH3，SEQ ID NO：3的序列为：
[0015]ARFATSTAMDY；
[0016]CDR
‑
VL1，SEQ ID NO：4的序列为：
[0017]ESVDKFGFSF；
[0018]CDR
‑
VL2，SEQ ID NO：5的序列为：GAS；
[0019]CDR
‑
VL3，SEQ ID NO：6的序列为：
[0020]QQSKEVPRT。
[0021]本专利技术通过基因合成、载体构建，表达纯化人CD209L重组蛋白，以该重组蛋白为抗原免疫小鼠，制备单克隆抗体杂交瘤细胞株，获得小鼠抗人CD209和CD209L单克隆抗体，筛选获得能够中和、阻断人CD209和CD209L的抗人CD209和CD209L单克隆抗体。经过测序，发现该抗体具有上述重链互补决定区和轻链互补决定区。该单克隆抗体可用于CD209和CD209L蛋白的检测以及以CD209和CD209L作为标志物的相关疾病的诊断或本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗人CD209和CD209L的单克隆抗体，其包括重链可变区和轻链可变区，其特征在于，所述重链可变区包括如下三个重链互补决定区：CDR
‑
VH1，CDR
‑
VH2和CDR
‑
VH3，所述轻链可变区包括如下三个轻链互补决定区：CDR
‑
VL1，CDR
‑
VL2和CDR
‑
VL3，CDR
‑
VH1，CDR
‑
VH2和CDR
‑
VH3的氨基酸序列如SEQ ID NO：1
‑
3所示，CDR
‑
VL1，CDR
‑
VL2和CDR
‑
VL3的氨基酸序列如SEQ IDNO：4
‑
6所示。2.根据权利要求1所述的抗人CD209和CD209L的抗体，其特征在于，所述抗体选自嵌合抗体、F(ab
’
)2、Fab
’
、Fab、Fv、scFv和双特异抗体中的任意一种；优选地，所述抗人CD209和CD209L的抗体为抗人CD209和CD209L人鼠嵌合单克隆抗体或scFv；优选地，所述抗体包括轻链骨架区FR
‑
L1、FR
‑
L2、FR
‑
L3及FR
‑
L4，和/或，重链骨架区FR
‑
H1、FR
‑
H2、FR
‑
H3及FR
‑
H4；优选地，所述抗体还包含抗体恒定区；优选地，所述抗体恒定区选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE和IgD中的任意一者的恒定区；优选地，所述抗体恒定区的种属来源为牛、马、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晨辉，杜艳芸，赵紫艳，
申请(专利权)人：四川省医学科学院，
类型：发明
国别省市：