一种薛氏海龙抗氧化和提高肌肉耐力肽的制备方法及应用技术

本发明专利技术属于生物肽制备的技术领域，公开了一种薛氏海龙抗氧化和提高肌肉耐力肽的制备方法和应用，所述薛氏海龙肽包含以下氨基酸序列LRESKDCVLGDA，DAELRMEKH和DTWLIVSDADK中的一种或多种。该薛氏海龙肽体外显示出显著的抗氧化活性，显著延长运动疲劳小鼠的力竭游泳时间，增强前肢握力，减少血清乳酸和尿素氮水平，提高肌糖原和肝糖原，同时抑制过氧化应激反应，表现出GSH

【技术实现步骤摘要】
一种薛氏海龙抗氧化和提高肌肉耐力肽的制备方法及应用


[0001]本专利技术属于生物肽制备的
，具体涉及一种薛氏海龙抗氧化和提高肌肉耐力肽的制备方法及应用。

技术介绍

[0002]疲劳是一种从疲劳到疲惫的主观和不愉快的状态，影响身心健康，随着现代生活节奏加快，疲劳以及由疲劳引发的慢性疲劳综合征非常普遍，对日常任务，休闲活动，认知和行为产生负面影响，此外，慢性疲劳患者患其他疾病的风险也会增加。运动性疲劳机制耗竭理论认为，运动过程中各种能量来源的耗竭，如葡萄糖和肝糖原，会导致身体疲劳。研究表明补充蛋白质，肽或氨基酸可以减少运动后的疲劳，而肽被快速吸收，可以促进氨基酸/蛋白质和葡萄糖作为能源的吸收利用。
[0003]薛氏海龙是一种重要的药用尖嘴鱼，有500多年的药用历史，含有多种有效成分，主要有甾体类，氨基酸，脂肪酸，多糖和蛋白质类物质，薛氏海龙蛋白含量超过50％，氨基酸含量高，具有很好的营养价值和多种功效，可用于延缓衰老、抗癌、抗疲劳，提高机体免疫力，降低胆固醇等多种作用。薛氏海龙的乙醇提取物主要为甾体类等小分子化合物已被广泛利用开发。如何更有效地开发利用薛氏海龙，提高薛氏海龙产品的功能价值，成为人们研究的热点。

技术实现思路

[0004]为克服现有技术中存在的上述问题，本专利技术提供一种薛氏海龙抗氧化和提高肌肉耐力肽的制备方法及应用，所述薛氏海龙肽能补充快速机体能量，并提高肌肉耐力，从而延缓疲劳的发生以及促进疲劳状态的及时恢复。
[0005]本专利技术的第一个目的在于提供一种薛氏海龙抗氧化和提高肌肉耐力肽，所述薛氏海龙肽氨基酸长度为7
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18，分子量580
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2155Da，其中亲水性肽比例大于60％，富含疏水性氨基酸Ala，Leu，Val，Ile，Pro和Phe，芳香氨基酸Trp，His，含硫氨基酸Met，碱性氨基酸Arg和Lys，酸性氨基酸Arg，并包含以下3个活性肽中的一种或二种以上，其中，活性肽1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：LRESKDCVLGDA；活性肽2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：DAELRMEKH；活性肽3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示：DTWLIVSDADK。
[0006]本专利技术的第二个目的在于提供上述薛氏海龙肽的制备方法。
[0007]本专利技术通过以下技术方案实现上述目的：
[0008]一种薛氏海龙抗氧化和提高肌肉耐力肽的制备方法，包括以下步骤：
[0009]S1、将海龙样品干燥，粉碎过筛，得到海龙粉末；
[0010]S2、将海龙粉末脱脂后风干；
[0011]S3、取步骤S2所得风干后的海龙粉经蛋白酶酶解后灭酶，离心取上清液，超滤，收集分子量<3kDa的滤过液，并进行浓缩，冻干。
[0012]优选地，步骤S1所述干燥温度为80℃
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90℃，干燥时间为3h
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4h，过筛目数为80目。
[0013]优选地，步骤S2所述脱脂是指将海龙粉与乙醚混匀过滤，海龙粉与乙醚的料液比(m/v)为1：2
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1：3。
[0014]优选地，步骤S3所述蛋白酶酶解的过程：将步骤S2得到的风干后的海龙粉加水后调pH，其中风干后的海龙粉与水的料液比(m/v)为1：10
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1：15。
[0015]优选地，步骤S3所述蛋白酶选自碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶中的一种或多种。
[0016]优选地，步骤S3所述蛋白酶加酶量为2000U/g
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3000U/g。
[0017]优选地，步骤S3所述酶解温度为40℃
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55℃，酶解时间为3h
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6h，灭酶在
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100℃沸水浴进行10min。
[0018]优选地，步骤S3所述离心条件为8000r/min
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10000r/min，离心15min
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30min。
[0019]优选地，步骤S3所述超滤为依次用2μm、10kDa和3kDa超滤膜超滤。
[0020]本专利技术还提供了上述的一种薛氏海龙抗氧化和提高肌肉耐力肽在制备功能性产品中的应用，其特征在于，所述功能性产品具有以下一种或多种作用：
[0021](1)抗氧化；
[0022](2)缓解运动型疲劳；
[0023](3)提高肌肉耐力。
[0024]所述功能性产品为保健品或功能性营养食品。
[0025]这里对(1)抗氧化；(2)缓解运动型疲劳；(3)提高肌肉耐力；这三个层面展开说明。
[0026]抗氧化：抑制脂质过氧化活性、提升ORAC氧自由基吸收能力、提高ATBS总抗氧化能力；
[0027]缓解运动型疲劳：延长力竭游泳时间，增强前肢握力；
[0028]提高肌肉耐力：减少血清乳酸和尿素氮水平，提高肌糖原和肝糖原，同时能抑制过氧化应激反应，GSH
‑
PX酶活提高，LDH和MDA水平下降，提高线粒体三羧酸循环限速酶活性和线粒体呼吸链复合体酶活性，增强腓肠肌线粒体功能。
[0029]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0030]本专利技术公开了一种薛氏海龙抗氧化和提高肌肉耐力肽的制备方法和应用，本专利技术所述的抗薛氏海龙肽的制备分离纯化包括粉碎，脱脂，酶解，超滤鉴定，分子对接，结合体外抑制脂质过氧化以及ABTS自由基和活性氧自由基清除能力评价追踪获得，并经体内动物实验功效评价。该薛氏海龙肽能有效抑制脂质过氧化，清除ABTS自由基并具有强的活性氧自由基清除能力，并能有效显著延长运动疲劳小鼠的力竭游泳时间，增强前肢握力，减少血清乳酸和尿素氮水平，提高肌糖原和肝糖原，同时能抑制过氧化应激反应，表现出GSH
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PX酶活提高，LDH和MDA水平下降，增强线粒体功能，提高肌肉耐力，显示出潜在的提高运动疲劳老鼠肌耐力活性。可应用于食品，功能营养制品和保健食品领域的研制与开发。
附图说明
[0031]图1为薛氏海龙肽的抗氧化活性比较，其中，(A)抑制脂质过氧化活性；(B)ORAC氧自由基吸收能力；(C)ABTS总抗氧化能力；SAP是碱性蛋白酶解酶解获得的海龙肽，SYP是胰蛋白酶解获得的海龙肽，SPP是胃蛋白酶酶解获得海龙肽，SNP是中性蛋白酶酶解获得的海龙肽，不同字母标注表示组间有显著性差异，p<0.05。
[0032]图2为薛氏海龙肽干预后小鼠前肢握力(A)和游泳时间(B)比较，WP是乳清肽组，LSAP是低剂量海龙肽组，MSAP是中剂量海龙肽组，HSAP是高剂量海龙肽组，不同字母标注表示组间有显著性差异，p<0.05。
[0033]图3为薛氏海龙肽干预后小鼠血清乳酸(A)，尿素氮(B)，肌糖原(C)，肝糖原(D)，谷胱甘肽过氧化酶(E)，过氧化氢酶(F)，乳酸脱氢酶(G)和丙二醛(H)的水平变化，WP是乳清肽组，LSAP是低剂量海龙肽组本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种薛氏海龙抗氧化和提高肌肉耐力肽，其特征在于，包含以下3个活性肽中的一种或两种以上，其中，活性肽1的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示：LRESKDCVLGDA；活性肽2的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示：DAELRMEKH；活性肽3的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示：DTWLIVSDADK。2.根据权利要求1所述的一种薛氏海龙抗氧化和提高肌肉耐力肽，其特征在于，所述抗氧化和提高肌肉耐力肽的分子量在580
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2155Da的范围内。3.权利要求1所述的一种薛氏海龙抗氧化和提高肌肉耐力肽的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、将海龙样品干燥，粉碎过筛，得到海龙粉末；S2、将海龙粉末脱脂后风干；S3、取步骤S2所得风干后的海龙粉经蛋白酶酶解后灭酶，离心取上清液，超滤，收集分子量<3kDa的滤过液，并进行浓缩，冻干。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤S1所述干燥温度为80℃
‑
90℃，干燥时间为3h
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4h，过筛目数为80目。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤S2所述脱脂是指将海...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡冰娜，潘剑宇，林强，秦耿，孙恢礼，陈华，万鹏，陈得科，
申请(专利权)人：中国科学院南海海洋研究所，
类型：发明
国别省市：