木麻黄醇E及其制备方法和在抗炎药物中的应用技术

本发明专利技术公开了木麻黄醇E及其制备方法和在抗炎药物中的应用。所述的木麻黄醇E其结构如式(1)所示。本发明专利技术发现了一种新的、具有良好抗炎活性的大环二苯庚烷木麻黄醇E，它在抗炎药物开发方面具有广泛的应用前景。物开发方面具有广泛的应用前景。物开发方面具有广泛的应用前景。物开发方面具有广泛的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
木麻黄醇E及其制备方法和在抗炎药物中的应用


[0001]本专利技术属于天然药物领域，具体涉及一种新的大环二苯庚烷
‑
木麻黄醇E及其制备方法和在制备抗炎药物中的应用。

技术介绍

[0002]炎症介质是指参与和介导炎症反应的化学因子，如可溶性气体NO，细胞因子IL
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1、IL
‑
6、和TNF
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α，前列腺素等，可导致发热疼痛和组织损伤，这些炎症介质可维持和发展炎症反应。因此，一些能够下调这些炎症介质的药物可用于临床抗炎止痛，如塞来昔布。然而现有的抗炎药物对有些病人无效，长期使用这些抗炎药物会产生不良反应。因此，有必要寻找和开发新型的抗炎药物。
[0003]木麻黄(Casuarina equisetifolia L.)系木麻黄科木麻黄属常绿乔木，原产于澳大利亚及太平洋岛屿，现在我国广东、广西、福建、台湾和浙江广泛种植，常用于沿海防风林，目前面积逾30万hm2。根据《中国中药资源大典》和《中华本草》记载，木麻黄树皮、枝叶、种子可入药，主要功效为止泻止痢。其中，关于木麻黄嫩枝、叶、树皮、凋落物的化学成分及现代药理活性研究较多，但对木麻黄果实中活性化学成分的研究基本没有报道。
[0004]迄今，未见木麻黄中具抗炎活性的大环二苯庚烷成分的研究报道。

技术实现思路

[0005]本专利技术的第一个目的是提供一种来源于木麻黄(Casuarina equisetifolia L.)果实的大环二苯庚烷
‑
木麻黄醇E、或其药学上可接受的酯化衍生物。
[0006]本专利技术的木麻黄醇E，其结构如式(1)所示：
[0007][0008]本专利技术的第二个目的在于提供式(1)所示的木麻黄醇E的制备方法，其特征在于，木麻黄醇E是从木麻黄(Casuarina equisetifolia L.)果实中制备分离得到的。
[0009]具体材料可以是干品或鲜品。
[0010]具体步骤优选为：
[0011]a、制备总浸膏：将木麻黄的果实粉碎后用有机溶剂
‑
水的混合溶液浸提，提取液浓缩除去有机溶剂后得到混悬液，混悬液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，乙酸乙酯萃取液经减压浓缩后得到总浸膏；
[0012]b、分离纯化：总浸膏经正相硅胶柱层析，以二氯甲烷
‑
甲醇从体积比100:0
→
0:100
Bioscien ces公司生产。NMR谱用Bruker AVIII 500M型超导核磁共振仪测定，以氘代二甲基亚砜残留溶剂峰作标定，氘代二甲基亚砜为美国剑桥公司(CIL)生产。旋光用Perkin Elmer 341plus旋光仪测定。CD谱用Jasco J
‑
810圆二色谱仪测定。质谱采用API 2000LC/MS/MS质谱仪测定。
[0033]1.2木麻黄醇E的制备和结构鉴定
[0034]成熟晒干的木麻黄果实，经过粉碎，95％乙醇浸泡提取，提取液浓缩得到浸膏(641g)。浸膏用水溶，依次经过石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取。萃取液浓缩，所得乙酸乙酯部位(60.3g)经正相硅胶柱层析，以二氯甲烷
‑
甲醇(体积比从100:0
→
0:100)洗脱，收集二氯甲烷
‑
甲醇体积比95:5洗脱的馏分为E13。馏分E13进一步经正相硅胶柱层析，以二氯甲烷
‑
甲醇体积比从200:1
→
0:100洗脱，收集二氯甲烷
‑
甲醇体积比50:1洗脱的馏分为E13
‑
44；馏分E13
‑
44经凝胶柱层析，以二氯甲烷
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甲醇体积比1:1洗脱，所得馏分经岛津LC
‑
6AD半制备高效液相色谱，色谱柱为Cosmosil 5C18
‑
MS
‑
II column(5μm,10mm
×
250mm)、流动相为乙腈
‑
水体积比30:70、流速为2mL/min，收集保留时间为22min的馏分，获得木麻黄醇E。经结构鉴定为式(1)所示的新化合物。
[0035][0036]式(1)所示的木麻黄醇E结构鉴定数据如下：[α]D20
＝+15.5(c 0.2,CH3OH)；ESI
‑
MS:m/z 341[M
‑
H]‑
；高分辨质谱m/z:343.1180[M+H]+
，计算值：343.1176，分子式为C
19
H
18
O6。
[0037]图1是化合物木麻黄醇E的1H NMR谱；图2是化合物木麻黄醇E的
13
C NMR谱；图3是化合物木麻黄醇E的HSQC谱；图4是化合物木麻黄醇E的1H
‑1H COSY谱；图5是化合物木麻黄醇E的HMBC谱；图6是化合物木麻黄醇E的NOESY谱；图7是化合物木麻黄醇E的HR
‑
ESIMS谱；图8是化合物木麻黄醇E的CD谱；图9是化合物木麻黄醇E的UV谱；
[0038]通过NOESY谱图确定结构中的相对构型为2R*,6S*。通过实验CD谱图与量子化学计算的CD谱图比较(图8)，确定绝对构型为2R,6S。
[0039]表1.木麻黄醇E的NMR数据(测试溶剂为氘代二甲基亚砜)
[0040][0041][0042]实施例2：式(1)所示的木麻黄醇E的体外抗炎活性2.1实验材料
[0043]小鼠巨噬细胞RAW264.7，DMEM培养基，NO测定试剂盒。
[0044]2.2木麻黄醇E对小鼠巨噬细胞毒性评价
[0045]将细胞以1.7
×
105个/mL的细胞浓度，每孔100μL铺于96孔板中(四周的孔加入100μL的PBS，避免边际效应)，培养箱中孵育24h后，将96孔板中的培养基吸出。加入溶解了不同浓度木麻黄醇E的DMEM培养基，以未加样品的细胞孔作为对照组，每组设置3个平行孔。将96孔板重新放置于培养箱中继续培养24h后，采用cck
‑
8测定细胞活力。按下列公式求出细胞存活率，结果为木麻黄醇E在10μM和50μM浓度时细胞存活率分别为99
±
6％和95
±
5％，表明
木麻黄醇E在50μM浓度及以下时对小鼠巨噬细胞没有毒性。
[0046]计算公式：细胞存活率(％)＝样品组吸光度
×
100/对照组吸光度
[0047]2.3体外抗炎活性评价
[0048]将细胞按1.7
×
104个/孔接种到96孔板中，孵育12h后，吸去培养基，加不含血清的培养基饥饿处理12h。弃去培养基后，分别加入LPS(200ng/mL)以及6.25、12.5、25和50μM四个梯度浓度的木麻黄醇E共孵育20h后，收集上清液，测定其NO浓度，其中不加LP本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.木麻黄醇E、或其药学上可接受的酯化衍生物，所述的木麻黄醇E其结构如式(1)所示：2.一种权利要求1所述的木麻黄醇E的制备方法，其特征在于，木麻黄醇E是从木麻黄(Casuarina equisetifolia L.)果实中制备分离得到的。3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，具体步骤为：a、制备总浸膏：将木麻黄的果实粉碎后用有机溶剂
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水的混合溶液浸提，提取液浓缩除去有机溶剂后得到混悬液，混悬液依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，乙酸乙酯萃取液经减压浓缩后得到总浸膏；b、分离纯化：总浸膏经正相硅胶柱层析，以二氯甲烷
‑
甲醇从体积比100:0
→
0:100洗脱，收集二氯甲烷
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甲醇体积比95:5洗脱的馏分为E13，馏分E13进一步经正相硅胶柱层析，以二氯甲烷
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甲醇体积比从200:1
→
0:100洗脱，收集二氯甲烷
‑
甲醇体积比50:1洗脱的馏分为E13
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：周忠玉，高阮玲，温玲蓉，罗喻才，马咏仪，伍阳徐，魏孝义，
申请(专利权)人：中国科学院华南植物园，
类型：发明
国别省市：