一种杂交瘤细胞株及其产生的抗6-苄基腺嘌呤单克隆抗体和抗体的应用制造技术

本发明专利技术提供了一种杂交瘤细胞株及其产生的抗6

【技术实现步骤摘要】
一种杂交瘤细胞株及其产生的抗6
‑
苄基腺嘌呤单克隆抗体和抗体的应用


[0001]本专利技术属于免疫学和农药残留检测
，尤其涉及一种杂交瘤细胞株及其产生的抗6
‑
苄基腺嘌呤单克隆抗体和抗体的应用。

技术介绍

[0002]6‑
苄基腺嘌呤(6
‑
Benzylaminopurine，6
‑
BA)，分子式C
12
H
11
N5，是一种目前国内外都在广泛使用的外源性植物生长调节剂。6
‑
BA属于人工合成的细胞分裂素的一种，与植物内源性激素具有相似的结构和性质。由于在促进植物细胞生长，抑制蛋白质和叶绿素的分解方面有明显作用，且会诱导芽的分化，因此被用作植物促长剂和果蔬保鲜剂的主要成分，并广泛应用于农业、果树栽培和园艺等领域。然而，6
‑
BA的过量摄入会导致人体的皮肤黏膜、消化系统、生殖系统和神经系统受到刺激和损伤，出现恶心呕吐等现象，更严重的是还有可能导致性早熟和诱发癌症。近几年的毒豆芽事件就是由于在豆芽生产过程中添加了无根剂等过量的添加剂致使人体受到损害，而无根剂的主要成分正是6
‑
BA，研究发现能缩短豆芽的生长周期使其粗壮且无根。2021年欧盟委员会发布(EU)2021/1841号条例，修订6
‑
BA在某些产品中的最大残留量为0.01mg/kg。但商家在利益的驱使下，仍在豆芽的生产过程中违法添加6
‑
BA，毒豆芽事件频发，对食品安全造成严重威胁。
[0003]目前，对于6
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BA已报道的一系列残留量的检测方法，包括高效液相色谱法(HPLC)，电化学检测法，重叠的二阶散射和频率双散射光谱法和共振瑞利散射法，液相色谱－质谱联用法(LC
‑
MS)，热分解质谱法等。上述方法具有一定的灵敏度和准确度，但同时存在着仪器昂贵、速度不快、操作繁琐、高通量不够、不能现场检测等技术瓶颈，严重影响了在现场快速检测和实际批量分析中的应用。对于快速筛查6
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BA的分析方法，目前还都不成熟，探究原因，高特异性、高灵敏的优良功能性生物材料的获得是限制其发展的主要瓶颈。因此，制备高特异性、高敏感性抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体，获得性能优良的生物功能材料，对于解决小分子快检技术瓶颈背后的核心问题，建立6
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苄基腺嘌呤现场即时并行检测技术，具有重大的理论和现实意义。

技术实现思路

[0004]有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种杂交瘤细胞株及其产生的抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体和抗体的应用。
[0005]本专利技术提供了一种产生抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体的杂交瘤细胞株6
‑
BA
‑
3F9，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO:C2022236。
[0006]本专利技术提供了一种抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体，由所述的杂交瘤细胞株6
‑
BA
‑
3F9产生。
[0007]本专利技术提供了述的抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体在检测6
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苄基腺嘌呤中的应用。
[0008]本专利技术提供了所述的抗6
‑
苄基腺嘌呤单克隆抗体在制备6
‑
苄基腺嘌呤检测产品
中的应用。
[0009]优选的，所述检测产品为免疫检测产品。
[0010]优选的，所述免疫检测产品包括酶联免疫试剂盒、胶体金层析试纸条、倏逝波荧光免疫传感器。
[0011]本专利技术提供了一种检测6
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苄基腺嘌呤的酶联免疫试剂盒，所述酶联免疫试剂盒包括所述的抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体。
[0012]本专利技术提供了检测6
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苄基腺嘌呤的胶体金层析试纸条，所述胶体金层析试纸条包括所述的抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体。
[0013]优选的，所述抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体包被在胶体金层析试纸条的结合垫上。
[0014]本专利技术提供了一种检测6
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苄基腺嘌呤的倏逝波荧光免疫传感器配套使用的试剂，所述试剂包括所述的抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体。
[0015]与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果：本专利技术提供的杂交瘤细胞株6
‑
BA
‑
3F9分泌产生的抗6
‑
苄基腺嘌呤单克隆抗体效价为1:1638400，亚型为IgG1，亲和常数Ka＝3.5
×
109L/mol，对6
‑
苄基腺嘌呤半抑制率IC
50
为0.81μg/L，与6
‑
苄基腺嘌呤的交叉反应率为100.00％，与4
‑
氯苯氧乙酸、赤霉素等植物生长调节剂的交叉反应率均小于0.01％。本专利技术提供的抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体能够用于6
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苄基腺嘌呤的检测，将其应用于制备检测6
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苄基腺嘌呤的酶联免疫试剂盒、胶体金层析试纸条和倏逝波荧光免疫传感器，能够达到快速且灵敏地检测食品和环境中的6
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苄基腺嘌呤的目的。本专利技术提供的抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体的质量具有很强的可控性和可重复性，并对所得抗体特性进行了初步分析及鉴定，为特异、灵敏的6
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苄基腺嘌呤免疫测定方法的进一步建立和应用提供了实验依据和基础原料。
附图说明
[0016]图1为本专利技术实施例1制备的6
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苄基腺嘌呤人工抗原凝胶电泳鉴定图；
[0017]图2为本专利技术实施例1制备的6
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苄基腺嘌呤免疫原紫外扫描鉴定图；
[0018]图3为本专利技术实施例2制备的抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体亚型测定图；
[0019]图4为本专利技术实施例2制备的抗6
‑
苄基腺嘌呤单克隆抗体亲和力测定图；
[0020]图5为本专利技术实施例2制备的抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体抑制率曲线图；
[0021]图6为竞争ELISA法检测抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体与4
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氯苯氧乙酸、赤霉素等物质的交叉反应性的流程图；
[0022]图7为以百分吸光度值为纵坐标，6
‑
苄基腺嘌呤标准品的浓度的对数为横坐标，绘制获得的标准曲线。
[0023]生物保藏说明
[0024]杂交瘤细胞株6
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BA
‑
3F9，保藏于中国典型培养物保藏中心，地址：中国武汉，武汉大学，保藏日期为2022年7月27日，保藏编号C本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种产生抗6
‑
苄基腺嘌呤单克隆抗体的杂交瘤细胞株6
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BA
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3F9，其特征在于，保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCCNO:C2022236。2.一种抗6
‑
苄基腺嘌呤单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述的杂交瘤细胞株6
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BA
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3F9产生。3.权利要求2所述的抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体在检测6
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苄基腺嘌呤中的应用。4.权利要求2所述的抗6
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苄基腺嘌呤单克隆抗体在制备6
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苄基腺嘌呤检测产品中的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述检测产品为免疫检测产品。6.根据权利要求5所述的应用，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉静，李春生，李雪冬，李紫然，张妍，李贺杰，刘静静，张静，
申请(专利权)人：河北省科学院生物研究所，
类型：发明
国别省市：