针对豚鼠IFN-γ的单克隆抗体及其用途制造技术

本发明专利技术涉及药及动物病检测技术领域，具体而言，本发明专利技术涉及一种针对豚鼠IFN

【技术实现步骤摘要】
针对豚鼠IFN
‑
γ
的单克隆抗体及其用途


[0001]本专利技术涉及医药及动物病检测
，尤其涉及一种针对豚鼠IFN
‑
γ的单克隆抗体及其用途。

技术介绍

[0002]牛结核病(Bovine Tuberculosis)主要由结核分枝杆菌复合群(Mycobacterium tuberculosis comples，MTBC)成员——牛分枝杆菌(M.bovis)感染引起的一种人兽共患慢性传染病。禽结核病(Avian Tuberculosis)主要由血清1、2、3、6型禽分枝杆菌(Mycobacterium avium)和日内瓦分枝杆菌(Mycobacterium genavens)感染引起。禽分枝杆菌主要感染家禽、观赏鸟，猫头鹰、秃鹫等野禽，猪、宠物犬等动物，还可以感染人，特别是免疫力低下的儿童、老人、HIV感染者，引起多组织器官的结核结节。牛结核病和禽结核病不仅危害养殖业的健康发展，更引起严重的公共卫生安全问题，威胁人民的健康和生命安全，其有效防控直接关系着人类健康。
[0003]牛结核菌素皮试试验(Tuberculin Skin Test，TST)是最早被用来诊断牛结核病的方法，γ
‑
干扰素释放试验(Interferon gamma release assay,IGRA)可以作为结核菌素皮试试验TST的替代方法，被WOAH推荐用于牛结核病的辅助诊断。禽结核病主要依赖禽结核菌素皮试试验进行检测。无论是TST还是IFN
‑
γ释放试验，都需要使用到牛型结核菌素(PPD
‑
B)和禽型结核菌素(PPD
‑
A)作为检测/刺激抗原，因此经准确定量的结核菌素制品是牛结核病和禽结核病准确诊断的前提。
[0004]PPD
‑
B和PPD
‑
A作为牛结核病和禽结核病的诊断抗原，其诊断准确性与效价定值密切相关。提纯菌素在制备过程中受多种因素的影响，传统的结核菌素效价测定方法是利用经菌素致敏的豚鼠进行皮试试验，并根据肿胀面积计算菌素效价。效价标定结果与豚鼠品系、个体差异、致敏状况、肿胀测量误差等因素相关，导致菌素蛋白含量与效价测定之间存在较大波动，重复性差。实践中为了克服这些困难，需要进行多次蛋白和效价的测定，计算平均值。该过程费时费力、周期长、费用高。基于上述背景，迫切需要创建结核菌素效价测定新方法，实现PPD
‑
B和PPD
‑
A效价测定的准确快捷。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的技术问题在于，提供一种针对豚鼠IFN
‑
γ的单克隆抗体及其用途。
[0006]为了解决上述问题，作为本专利技术的第一方面，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株GIFN
‑
1A2，豚鼠 IFN
‑
y 单抗杂交瘤细胞株，其于2023年1月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCC No.45344。具体的，本专利技术的专利技术人经过深入的研究，利用豚鼠IFN
‑
γ作为免疫源，构建了一种杂交瘤细胞株，该细胞株所分泌的单克隆抗体与IFN
‑
γ的结合特异性强，为采用其进行IFN
‑
γ的测定提供了良好的基础。进而也为结核菌素效价标定提
供了良好的基础。
[0007]作为本专利技术的第二个方面，本专利技术提供了一种针对豚鼠IFN
‑
γ的单克隆抗体，其由上述的杂交瘤细胞株GIFN
‑
1A2分泌而得。
[0008]作为本专利技术的第三个方面，本专利技术提供了上述的单克隆抗体在制备药物组合物中的用途。
[0009]作为本专利技术的第四个方面，本专利技术提供了一种药物组合物，其包括上述的单克隆抗体。
[0010]作为本专利技术的第五个方面，本专利技术提供了上述的单克隆抗体在制备用于检测豚鼠IFN
‑
γ的试剂盒中的用途。
[0011]作为本专利技术的第六个方面，本专利技术提供了上述的单克隆抗体在制备用于结核菌素效价标定的试剂盒中的用途。
[0012]作为上述技术方案的改进，所述结核菌素为牛型结核菌素和/或禽型结核菌素。
[0013]作为上述技术方案的改进，采用ELISA法检测。
[0014]作为本专利技术的第六个方面，本专利技术提供了一种用于检测豚鼠IFN
‑
γ的试剂盒，其包括上述的单克隆抗体。
[0015]作为本专利技术的第七个方面，本专利技术提供了一种用于结核菌素效价标定的试剂盒，其包括上述的单克隆抗体。
[0016]实施本专利技术，具有如下有益效果：
[0017]本专利技术利用豚鼠IFN
‑
γ作为免疫源，构建了一种杂交瘤细胞株GIFN
‑
1A2，该细胞株所分泌的单克隆抗体与IFN
‑
γ的结合特异性强，可用于豚鼠IFN
‑
γ的高精度定量检测。进一步的，经研究，结核菌素作为刺激抗原刺激致敏后的豚鼠后，其血液中IFN
‑
γ浓度与结核菌素之间的效价存在正相关关系。这也表明了本专利技术中的单克隆抗体可用于标定结核菌素效价。
附图说明
[0018]图1为SDS
‑
PAGE检测纯化的重组豚鼠IFN
‑
γ蛋白图。泳道M：蛋白分子量标准；泳道1：纯化后的豚鼠IFN
‑
γ。
[0019]图2为SDS
‑
PAGE检测纯化的鼠抗豚鼠IFN
‑
γ单克隆抗体蛋白图。泳道M：蛋白分子量标准；泳道1：纯化后的1A2；泳道2：纯化后的3B5；泳道3：纯化后的3B7；泳道4：纯化后的5G2；泳道5：纯化后的4F7。
[0020]图3为以1A2单抗作为捕获单抗对重组豚鼠IFN
‑
γ的检测灵敏度图。横坐标为重组豚鼠IFN
‑
γ(ng/mL)，纵坐标为OD450值。
[0021]图4为豚鼠IFN
‑
γ标准品曲线图。纵坐标为重组豚鼠IFN
‑
γ(ng/mL)，横坐标为OD450值。
[0022]图5为BSA、PBS、ConA分别刺激豚鼠外周血淋巴细胞后，用1A2作为包被抗体，5G2
‑
HRP作为检测抗体，检测外周血中IFN
‑
γ浓度。
[0023]图6为BSA、PBS、ConA、PPD
‑
B分别刺激分枝杆菌致敏及非致敏豚鼠后，用1A2作为包被抗体，5G2
‑
HRP作为检测抗体，检测外周血中IFN
‑
γ浓度。
[0024]图7为不同浓度PPD
‑
B刺激分枝杆菌致敏豚鼠及非致敏豚鼠后，用1A2作为包被抗
体，5G2
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株GIFN
‑
1A2，其于2023年1月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.45344。2.一种针对豚鼠IFN
‑
γ的单克隆抗体，其特征在于，由如权利要求1所述的杂交瘤细胞株GIFN
‑
1A2分泌而得。3.如权利要求2所述的单克隆抗体在制备药物组合物中的用途。4.一种药物组合物，其特征在于，包括如权利要求2所述的单克隆抗体。5.如权利要求2所述的单克隆抗体在制备用...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈瑞爱，鑫婷，丁家波，张广智，范学政，熊挺，刘郁夫，梁琳，杨洁，
申请(专利权)人：中国农业科学院北京畜牧兽医研究所，
类型：发明
国别省市：