一株分泌噁唑菌酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一株分泌噁唑菌酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用，属于免疫检测领域。本发明专利技术分泌噁唑菌酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株，已于2023年02月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.45462。本发明专利技术获得的噁唑菌酮单克隆抗体细胞株可以用于免疫分析检测，其对噁唑菌酮有较好的检测灵敏度和特异性，IC

【技术实现步骤摘要】
一株分泌噁唑菌酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用


[0001]本专利技术属于免疫检测
，尤其涉及一株分泌噁唑菌酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用。

技术介绍

[0002]噁唑菌酮是一种新型保护性杀菌剂，主要通过阻断泛醌醇酶，抑制病原菌的孢子释放，起到杀菌的作用，用于防治各种霜霉病，黑斑病和晚疫病。目前，我国已引进使用噁唑菌酮，用于防治农作物尤其是马铃薯、葡萄和谷物的病虫害，但是不恰当的使用会导致其在农作物的残留过量进而损害消费者的身体健康。因此，针对噁唑菌酮的残留检测，有必要去建立一个高效快速的检测方法。
[0003]对于噁唑菌酮农药残留的检测，常采用高效液相色谱法、气相色谱法、气相或液相色谱质谱联用法。但这些方法存在样品前处理复杂和检测时间长等不足，不适用于大量样品的快速检测，为了维护广大消费者的利益，有必要建立一种针对噁唑菌酮的简单、快速且灵敏的检测方法。
[0004]酶联免疫法(ELISA)是一种极为高效、敏感、快速的检测方法，检测时对样本的前处理简单、纯化步骤少、分析容量大、检测成本低而且操作简便，适用于大量样本的现场快速检测，因此在农药残留分析中得到了广泛应用。而使用酶联免疫法检测噁唑菌酮的前提是得到对噁唑菌酮具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体，因此，找到一种制备对噁唑菌酮具有高特异性和高灵敏度的单克隆抗体的方法十分关键。

技术实现思路

[0005]为解决上述技术问题，本专利技术提供了一株分泌噁唑菌酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株，该杂交瘤细胞株分泌的噁唑菌酮单克隆抗体对噁唑菌酮具有较好的特异性和检测灵敏度(IC
50
值为1.31ng/mL)，可以用于建立噁唑菌酮的免疫学检测方法，检测食品中噁唑菌酮的残留。
[0006]本专利技术的第一个目的是提供一株分泌噁唑菌酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株，所述杂交瘤细胞株于2023年02月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.45462。
[0007]进一步地，杂交瘤细胞株通过如下结构所示的噁唑菌酮半抗原制备的完全抗原免疫动物得到：
[0008][0009]进一步地，所述完全抗原由噁唑菌酮半抗原与载体蛋白偶联得到。
[0010]进一步地，所述载体蛋白包括但不限于牛血清蛋白BSA、卵清蛋白OVA、钥孔血蓝蛋白KLH等。
[0011]本专利技术的第二个目的是提供上述分泌噁唑菌酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株在噁唑菌酮检测中的应用。
[0012]本专利技术的第三个目的是提供一种噁唑菌酮单克隆抗体，所述噁唑菌酮单克隆抗体由上述杂交瘤细胞株分泌得到。
[0013]本专利技术的第四个目的是提供上述噁唑菌酮单克隆抗体在噁唑菌酮检测中的应用。
[0014]本专利技术的第五个目的是提供一种噁唑菌酮检测产品，所述噁唑菌酮检测产品中包括上述噁唑菌酮单克隆抗体。当然，检测产品可制备成试剂盒、试剂、试纸条等任何形式。
[0015]进一步地，上述噁唑菌酮检测产品可用于食品安全检测中噁唑菌酮的残留分析检测。
[0016]进一步地，所述噁唑菌酮检测产品中还包括噁唑菌酮包被原。
[0017]进一步地，所述噁唑菌酮包被原由噁唑菌酮半抗原活化后与鸡卵白蛋白偶联得到。
[0018]本专利技术的上述技术方案相比现有技术具有以下优点：
[0019]本专利技术提供了一种对噁唑菌酮具有较高亲和力、较好的特异性以及检测灵敏度的单克隆抗体杂交瘤细胞株，噁唑菌酮单克隆抗体对噁唑菌酮的IC
50
为1.31ng/mL，对噁唑菌酮类似物交叉率小于1％，可以用来建立噁唑菌酮的酶联免疫检测方法，为间接竞争ELISA试剂盒以及胶体金试纸条的研发推广奠定了基础，有助于实现对噁唑菌酮残留量的检测，为食品中噁唑菌酮残留的免疫检测提供了免疫检测方法和原料，具有实际应用价值。
[0020]生物材料保藏
[0021]单克隆细胞株SFA，所述单克隆细胞株SFA已于2023年02月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.45462，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。
附图说明
[0022]为了使本专利技术的内容更容易被清楚的理解，下面根据本专利技术的具体实施例并结合附图，对本专利技术作进一步详细的说明，其中
[0023]图1为本专利技术噁唑菌酮单克隆抗体对噁唑菌酮的标准抑制曲线。
具体实施方式
[0024]下面结合附图和具体实施例对本专利技术作进一步说明，以使本领域的技术人员可以更好地理解本专利技术并能予以实施，但所举实施例不作为对本专利技术的限定。
[0025]下述实施例中涉及的培养基如下：
[0026]RPMI
‑
1640培养基(mg/L)：L
‑
精氨酸290、L
‑
门冬酰胺50、L
‑
门冬氨酸20、L
‑
胱氨酸二盐酸盐65.15、L
‑
谷氨酸20、甘氨酸10、L
‑
组氨酸15、L
‑
羟脯氨酸20、L
‑
异亮氨酸50、L
‑
亮氨酸50、L
‑
赖氨酸盐酸盐40、L
‑
甲硫氨酸15、L
‑
苯丙氨酸15、L
‑
脯氨酸20、L
‑
丝氨酸30、L
‑
苏氨酸20、L
‑
色氨酸5、L
‑
酪氨酸23.19、L
‑
缬氨酸20、对氨基苯甲酸1、硝酸钙100、无水硫酸镁48.84、无水磷酸二氢钠676.13、氯化钾400、氯化钠6000、葡萄糖2000、还原谷胱甘肽1、酚红5、L
‑
谷氨酰胺300、生物素0.2、D
‑
泛酸钙0.25、叶酸1、i
‑
肌醇35、烟酰胺1、氯化胆碱3、盐酸吡哆醇1、核黄素0.2、盐酸硫胺素1、维生素B12 0.005、碳酸氢钠2000。
[0027]下述实施例中涉及的试剂如下：
[0028]碳酸盐缓冲液(CBS)：称取Na2CO
3 1.59g，NaHCO
3 2.93g，分别溶于少量双蒸水后混合，加双蒸水至约800mL混匀，调pH值至9.6，加双蒸水定容至1000mL，4℃贮存备用；
[0029]磷酸盐缓冲液(PBS)：8.00g NaCl，0.2g KCl，0.2g KH2PO4，2.9gNa2HPO4·
12H2O，溶于800mL纯水中，用NaOH或HCl调pH到7.2～7.4，定容至1000mL；
[0030]PBST：含0.05％吐温20的PBS；
[0031]抗体稀释液：PBS加入0.1％明胶。
[0032]TMB显色液：A液：Na2HPO
4.
12H2O 18.43g，柠檬酸9.33g，纯水定容至1000mL；B液：60m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一株分泌噁唑菌酮单克隆抗体的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述杂交瘤细胞株于2023年02月08日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号CGMCC No.45462。2.根据权利要求1所述的杂交瘤细胞株，其特征在于，所述杂交瘤细胞株通过如下结构所示的噁唑菌酮半抗原制备的完全抗原免疫动物得到：3.根据权利要求2所述的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述完全抗原由噁唑菌酮半抗原与载体蛋白偶联得到。4.根据权利要求3所述的杂交瘤细胞株，其特征在于：所述载体蛋白为牛血清蛋白或卵清蛋白。5.权利要求1
‑

【专利技术属性】
技术研发人员：刘丽强，程媛，胥传来，匡华，徐丽广，孙茂忠，吴晓玲，郝昌龙，宋珊珊，胡拥明，吴爱红，郭玲玲，胥欣欣，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：