用于保护猪免于各种疾病的组合疫苗制造技术

本发明专利技术涉及一种用于保护猪免于猪圆环病毒2型感染、猪肺炎支原体感染和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)诱导的霉菌中毒的疫苗，其包含组合的猪圆环病毒2型(PCV2)的非复制免疫原、猪肺炎支原体的非复制免疫原和缀合的DON。肺炎支原体的非复制免疫原和缀合的DON。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于保护猪免于各种疾病的组合疫苗


[0001]本专利技术总体上属于猪健康领域。猪容易感染许多致病微生物和遭遇不良事件，如动物饲料中存在的真菌毒素中毒。这些方面的控制通常通过农场和饲料管理、抗病毒药物和抗生素等药物治疗、使用疫苗进行预防性治疗、使用毒素粘合剂处理饲料等方式进行。例如，几乎所有的猪都容易感染猪圆环病毒2型(PCV2或PCV
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2)和猪肺炎支原体(Mhyo)，以及由动物饲料中存在的霉菌毒素脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)诱导的真菌中毒。

技术介绍

[0002]PCV
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2与在仔猪中观察到的断奶仔猪多系统衰竭综合征(PMWS)有关。这种疾病于1991年在加拿大首次出现。临床体征和病理首次发表于1996年，包括进行性消瘦、呼吸困难、呼吸急促，偶尔出现黄疸和黄疸。
[0003]Nayar等，Can.Vet.J.Volume 38,June 1997在有PMWS临床症状的猪上检测到了PCV，并得出结论，除了已知的PK
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15细胞自然宿主PCV外，PCV可能与PMWS有关。后来出版的(Hamel等，J.Virol.,72(6),5262
‑
5267,1998；Meehan等，J.Gen.Virol.,79,2171
‑
2179,1998)证实了这些发现，并且有人建议(Meehan等，同上)将新的致病性PCV称为PCV
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2，而最初的PK
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15细胞培养分离物(Tischer等，Nature295,64
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66,1982)则应称为PCV
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1。
[0004]PCV
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2是一种小的(17
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22nm)二十面体非包膜病毒，含有一个环状单链DNA基因组。PCV
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2基因组的长度约1768bp。来自世界不同地区的PCV
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2分离株之间关系密切，显示出约95至99％核苷酸序列同一性(Fenaux等，J.Clin.Micorbiol.,38(7),2494
‑
2503,2000)。PCV的ORF2编码病毒的衣壳蛋白。PCV
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2的ORF2基因编码约233个氨基酸的蛋白质。所有PCV
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2分离株的ORF2基因具有91
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100％核苷酸序列同一性和90
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100％的推导氨基酸序列同一性。
[0005]猪肺炎支原体是一种已知可引起猪地方性肺炎的细菌，这是一种影响猪的高度传染性和慢性疾病。Mhyo体积小(400
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1200nm)，有一个小的基因组(893
‑
920千碱基对(kb))并缺乏细胞壁。Mhyo附着在猪的肺部上皮细胞的纤毛上。它们导致纤毛停止跳动、结块和纤毛丢失，最终导致上皮细胞死亡。这是猪地方性肺炎猪肺部病变的来源。这种损伤阻碍了正常的纤毛清除，并且经常会发生继发性感染。这导致动物体重的显著下降。此前据估计，美国的损失每年高达10亿美元。猪流行性肺炎在全世界流行，Mhyo几乎存在于所有猪群中。猪体内存在Mhyo所诱发的免疫反应缓慢且无效。因此这种疾病的治疗是最重要的，但仅限于抗生素，因为抗生素目前仅部分有效，不能完全消除感染。已经发现疫苗可以降低疾病的严重程度，但不能完全防止该病在受感染猪群中发生。
[0006]另一种在世界范围内广泛分布于猪中的病原体是胞内劳森氏菌。这种细菌可能导致增殖性肠病，也称为回肠炎，这是世界各地断奶后猪常见的肠道疾病。特征性病变是回肠肠隐窝中未成熟肠细胞的增殖；这些细胞通常在顶端细胞质中含有致病细菌。尸检时，通过可见1.5
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2.5μm长的弧菌状细菌，尤其是肠上皮细胞中的细菌，但通常也存在于隐窝之间固有层和肠系膜淋巴结中的巨噬细胞内，可以确认组织学病变为劳森氏菌阳性。从肠上皮细胞中清除细菌可导致相关增殖性病变的消退，表明细菌对隐窝的直接局部作用。已使用聚
合酶链式反应证明在这些病变中存在胞内劳森氏菌，无论是在表现出疾病的动物中还是在仅表现出亚临床感染的动物中。临床病例通常出现在生长发育期；在一些年龄较大的肥育猪中，已经记录到急性出血形式。
[0007]真菌通常会在猪身上引起广泛的疾病，包括器官和组织的寄生以及过敏性表现。然而，除了通过摄入非食用蘑菇中毒外，真菌还可以产生真菌毒素和有机化学物质，这些毒素和化学物质导致各种毒性作用，称为真菌毒素中毒。这种疾病是由接触真菌毒素引起的，真菌毒素是由污染食品或动物饲料的丝状真菌产生的具有药理活性的化合物。真菌毒素是对真菌生理学不重要的次级代谢产物，在摄入、吸入或皮肤接触时，最低浓度对脊椎动物就具有剧毒。目前已识别出约400种真菌毒素，细分为具有类似生物和结构性质的化学相关分子家族。其中，大约有十几个群组经常因威胁动物健康而受到关注。具有最大公共利益和农业经济意义的真菌毒素的实例包括黄曲霉毒素(AF)、赭曲霉素(OT)、单端孢霉烯族毒素(T；包括DON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、伏马菌素(F)、致肿瘤毒素和麦角生物碱。真菌毒素与急性和慢性疾病有关，其生物学效应主要因其化学结构的多样性而不同，也因生物、营养和环境因素而不同。真菌毒素的病理生理学是真菌毒素与动物细胞中的功能分子和细胞器相互作用的结果，其可能导致致癌性、遗传毒性、蛋白合成抑制、免疫抑制、皮肤刺激和其他代谢紊乱。在敏感动物物种中，真菌毒素可能引发复杂且叠加的毒性作用。真菌中毒症不会传染，也不会对免疫系统产生显著刺激。
[0008]脱氧雪腐镰刀菌烯醇，也称为呕吐毒素，是一种B型三烯，主要存在于小麦、大麦、燕麦、黑麦和玉米等谷物中，也存在于水稻、高粱和小黑麦中。脱氧雪腐镰刀菌烯醇的出现主要与禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)(玉米赤霉)和黄色镰刀菌(Fusariumculmorum)有关，这两种植物病原体都是导致小麦枯萎病以及玉米赤霉和枯萎病的重要植物病原体。小麦枯萎病发病率与脱氧雪腐镰刀菌烯醇污染之间存在直接关系。枯萎病的发病率与开花时的水分密切相关，而降雨的时间而不是数量是最关键的因素。此外，DON含量受品种对镰刀菌属种的易感性、以前的作物、耕作方法和杀菌剂使用的显著影响。禾谷镰刀菌在25℃的温度下生长最佳，而黄色镰刀菌则在21℃下生长最佳。因此，禾谷镰刀菌是出现在温暖气候中的更常见的物种。
[0009]DON与人类和农场动物的真菌中毒事件有关。该毒素属于单端孢霉烯族毒素，是蛋白质合成的强抑制剂。暴露于DON会导致大脑对氨基酸色氨酸的摄取减少，进而减少血清素的合成。血清素水平的降低被认为是DON引起食欲不振作用的原因。胃肠道刺激也可能在减少采食量方面发挥作用，也可能部分解释在拒绝进食期间观察到的母猪食管旁胃溃疡的高发病率。
[0010]DON诱导的真菌毒素中毒的预防性治疗目前仅限于减少作物真菌毒素产生的良好农业实践，以及食品和饲料商品的控制计划，以确保真菌毒素水平保持在一定限度以下本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于保护猪免于猪圆环病毒2型感染、猪肺炎支原体感染和脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)诱导的霉菌中毒的疫苗，其包含组合的猪圆环病毒2型(PCV2)的非复制免疫原、猪肺炎支原体的非复制免疫原和缀合的DON。2.根据权利要求1所述的疫苗，其特征在于所述PCV2的非复制免疫原是PCV2的ORF2蛋白。3.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗，其特征在于所述PCV2的非复制免疫原是重组表达的PCV2的ORF2蛋白。4.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗，其特征在于所述猪肺炎支原体的非复制免疫原是猪肺炎支原体菌苗。5.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗，其特征在于所述猪肺炎支原体的非复制免疫原包含灭活的全猪肺炎支原体。6.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗，其特征在于所述缀合的DON是与分子量高于10.000Da的蛋白质缀合的DON。7.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗，其特征在于所述缀合的DON是与匙孔血蓝蛋白(KLH)或卵清蛋白(OVA)缀合的DON。8.根据前述权利要求中任一项所述的疫苗，其特征在于所述疫苗包含胞内劳森氏菌的非复制免疫原。9.根据前述权利要求中任一项...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：英特维特国际股份有限公司，
类型：发明
国别省市：