GhALY1基因在提高植物出油率方面的应用制造技术

本发明专利技术属于基因工程领域，具体涉及GhALY1基因在提高植物出油率方面的应用。本发明专利技术通过在酿酒酵母及拟南芥中异源表达GhALY1基因，用气相色谱法(Gas Chromatography简称GC)测定转基因系的油分含量及脂肪酸组分含量，明确了GhALY1基因在提高棉籽出油率方面的应用，同时也明确了GhALY1基因表达的蛋白ALY在提高棉籽出油率方面的应用。出油率方面的应用。

【技术实现步骤摘要】
GhALY1基因在提高植物出油率方面的应用


[0001]本专利技术属于基因工程领域，具体涉及GhALY1基因在提高植物出油率方面的应用。

技术介绍

[0002]棉花是世界上最重要的纤维作物和主要的油料作物，棉籽是商品棉的主要副产物，约占籽棉总产量的60％，棉籽含油量占15.0％～48.7％，棉籽油中含有大量的人体所必需的脂肪酸，其中油酸、亚油酸等不饱和脂肪酸的含量接近80％，使得棉籽油具有较强的抗氧化能力。另外棉籽油与菜籽油和花生油相比棉籽油中含有较高的维生素E，维生素E是一种抗氧化剂，能提高人体抗细胞衰老的能力以及降低人体心脑血管疾病发生几率等功效。此外，棉籽发育时期的脂肪酸组分不仅是决定其营养品质的关键因素而且对棉花纤维的发育也有重要影响，研究发现亚麻酸、棕榈酸在棉花纤维发育阶段有重要调节作用，研究发现超长链饱和脂肪酸能促进棉花纤维伸长，研究发现棉花种仁油分与纤维整齐度指数，伸长率呈显著正相关。说明，棉籽脂肪酸对棉纤维的发育具有促进作用。棉籽油作为生产生物能源燃料也具有广阔的应用前景，石化柴油的碳链长度一般在C15～C18之间，而棉籽油中有99％的脂肪酸碳链长度集中在C16～C18之间，和柴油成分极其相似，棉籽油适合转化生产为生物柴油，并且转化为生物柴油的效率高达95％，另外棉籽油转化而成的生物柴油富含氧而不含硫，因此可使生物柴油的燃烧更为彻底且不污染环境。由于我国近10年种植面积从2004年的569.287万公顷到2013年的434.563万公顷，总体呈现逐年下降的趋势。因此通过利用基因工程手段提高单位面积上棉籽的油脂含量，是维持棉籽油产量以至于提高棉花副产品利用效率的必由之路。
[0003]TREX是mRNA输出复合体，由Aly、UAP56、Tex1和THO复合体组成，Aly和THO都具有连接TREX和核帽结合复合体的功能，并且是TREX组分与剪接的mRNA结合所必需的。Pfaff等研究发现拟南芥AtALY1基因在调节根长、种子大小和胚珠发育中起重要作用。此外，AtALY的四重突变体莲座叶和花絮减少，植株矮小，并且花的形态异常，角果变短，因此缺乏ALY蛋白会导致营养和生殖发育的严重缺陷。然而，在棉花中还没有关于ALY基因的研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供了GhALY1基因在提高植物出油率方面的应用。GhALY1基因序列如SEQ NO.1所示。
[0005]进一步的，GhALY1基因可调控的植物包括拟南芥和棉花。
[0006]本专利技术还提供了GhALY1基因表达的蛋白ALY在提高植物出油率方面的应用。蛋白ALY的氨基酸序列如SEQ NO.2所示。
[0007]本专利技术还提供了一种包含GhALY1基因的基因表达载体以及该载体在提高植物出油率方面的应用。
[0008]本专利技术还提供了调控GhALY1基因表达的调控剂在制备用于调控植物出油率制剂中的应用。
[0009]本专利技术具有以下有益效果：本专利技术通过在酿酒酵母及拟南芥中异源表达GhALY1基因，用气相色谱法(Gas Chromatography简称GC)测定转基因系的油分含量及脂肪酸组分含量，明确了GhALY1基因在提高植物出油率方面的应用，同时也明确了GhALY1基因表达的蛋白ALY在提高植物出油率方面的应用。
附图说明
[0010]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0011]图1GhALY1基因的克隆；
[0012]图2GhALY1加Infusion接头M:DL2000 Marker，1和2为目的片段；
[0013]图3将HindⅢ和BamH I酶切的质粒pYES2与目的基因GhALY1进行体外连接；
[0014]图4GhALY1连接pYES2载体菌液PCR鉴定M:DL2000 Marker，1
‑
10为含有目的片段的菌株；
[0015]图5酵母菌液PCR鉴定；
[0016]图6转基因酵母qRT
‑
PCR结果；
[0017]图7转基因酵母酵母油分含量(a)及脂肪酸组分含量(b)；
[0018]图8GhALY1连接PDONR ZEO载体菌液鉴定；
[0019]图9GhALY1连接pEarleyGate 101载体菌液鉴定；
[0020]图10Basta筛选GhALY1转基因拟南芥阳性苗；
[0021]图11GhALY1转基因拟南芥阳性苗PCR鉴定；
[0022]图12GhALY1转基因拟南芥阳性苗Western Blot鉴定；
[0023]图13转基因拟南芥油分含量(a)及脂肪酸组分含量(b)。
具体实施方式
[0024]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，实施例中方法如无特殊说明均采用常规方法，使用试剂如无特殊说明，均为常规市售试剂或采用常规方法配置的试剂。该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0025]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值，以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0026]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的
文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0027]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见得的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。
[0028]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0029]实施例1棉花中GhALY1基因的克隆
[0030]1所需工具酶、试剂盒药品
[0031](1)酶及试剂盒：2
×
Max Master Mix(P515)高保真酶、2
×
Taq Plus Master Mix II(Dye Plus)、Invitrogen
TM Gateway
TM BP Clonase
TM II Enzyme mix、Invit本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.GhALY1基因在提高植物出油率方面的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述GhALY1基因序列如SEQ NO.1所示。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述植物包括拟南芥和棉花。4.一种如权利要求2所述基因表达的蛋白ALY在提高植物出油率方面的应用。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述蛋白ALY...

【专利技术属性】
技术研发人员：于霁雯，宋吉坤，裴文锋，贾冰，马建江，吴嫚，王莉，张兵兵，
申请(专利权)人：中国农业科学院棉花研究所，
类型：发明
国别省市：