PD-L1单克隆抗体、重链、轻链可变区、单克隆细胞株及运用和试剂盒制造技术

本申请涉及单克隆抗体领域，更具体地说，它涉及PPD

【技术实现步骤摘要】
PD
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L1单克隆抗体、重链、轻链可变区、单克隆细胞株及运用和试剂盒
[0001]本申请要求2021年12月7日提交的中国专利申请第202111485905.9号(专利技术名称“PD
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L1单克隆抗体、重链、轻链可变区、单克隆细胞株及运用和试剂盒”)的优先权。该申请以其全文内容通过引用并入本文。


[0002]本申请涉及单克隆抗体领域，更具体地说，它涉及PD
‑
L1单克隆抗体、重链、轻链可变区、单克隆细胞株及运用和试剂盒。

技术介绍

[0003]程序性死亡受体1(PD
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1)是一种重要的免疫抑制分子，其具有两个天然配体，分别为PD
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L1和PD
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L2，PD
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L1可以在多种肿瘤细胞中检测表达，如非小细胞肺癌、恶性黑素肿瘤、胃癌、乳腺癌、食管癌、胶质瘤等。因此，对PD
‑
L1可以作为肿瘤治疗和诊断的靶点，在临床上具有重要的意义。
[0004]目前，市面上常用的用于检测PD
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L1的方法是免疫组化法，主要通过PD
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L1抗体对PD
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L1抗原及逆行免疫识别，并通过其他显色剂对抗原
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抗体进行显色，进而对PD
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L1进行表征。同时，通过特异性靶向PD
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L1靶点，具有良好的靶向用药的潜力，因此，开发高亲和力、高特异性的PD
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L1抗体，在精确诊断和合理用药方面具有重要的意义。

技术实现思路

[0005]为了，本申请提供PD
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L1单克隆抗体，具有高亲和力、高特异性的优势，同时，本申请提供了该单克隆抗体的重链、轻链可变区、单克隆细胞株及运用和试剂盒。
[0006]首先，本申请提供了PD
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L1单克隆抗体重链、轻链可变区，重链可变区包括如下互补决定区：CDRH1：SYWIE；CDRH2：EILPGSGNTNYNEKLKG；CDRH3：ERRGDY；轻链可变区包括如下互补决定区：CDRL1：SASQGIYNYLN；CDRL2：YTSSLHS；CDRL3：QQYSKLPYT。
[0007]可选的，重链序列如SEQ ID No.2所示，轻链序列如SEQ ID No.3所示。
[0008]具有如上互补决定区的重链、轻链可变区对抗原具有较好的结合性和选择性，在实际检测和诊断治疗领域中具有显著的优势。
[0009]同时，本申请还提供PD
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L1单克隆抗体，包括上述重链、轻链可变区。
[0010]具有上述重链、轻链可变区的抗体具有高选择性，亲和力和特异性都较好，具有效
价高、灵敏度高、线性良好等优点。
[0011]具有上述互补决定区的抗体可以为鼠源抗体，也可以将具有上述互补决定区的可变区运用于人鼠嵌合抗体，或将上述互补决定区运用于人源的改型抗体。
[0012]同时，对上述抗体可以进行表面重塑，或进行修饰或替换其中非互补决定区部分的氨基酸序列。
[0013]抗体的种类可以为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE型，可以为可选的，重链恒定区为鼠源IgG1恒定区。
[0014]重链的序列如SEQ ID No.4所示，轻链的序列如SEQ ID No.5所示。
[0015]该抗体具有高亲和力、高特异性，经实验正式，具有较好的线性和灵敏度。
[0016]可选的，抗体经过人源化改造。
[0017]经人源化改造后，可以激活人体免疫系统，避免诱导HAMA反应，适用于免疫治疗。
[0018]人源化改造包括恒定区替换为人源，或直接将互补决定区植入到人源抗体中替代人员抗体的互补决定区，或其他有助于减少HAMA反应且不影响抗体特异结合性能的改性方式。
[0019]另外，本申请还提供用于表达上述单克隆抗体的单克隆细胞株。
[0020]单克隆细胞株可以为啮齿类动物的抗原激活后的B细胞与骨髓瘤细胞融合细胞，也可以是其他具有表达上述抗体的能力细胞株。
[0021]另外，本申请还提供了上述PD
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L1单克隆抗体的运用，运用于PD
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L1抗原的表达检测或肿瘤细胞的免疫杀伤领域。
[0022]其中，抗原表达检测可以为酶联免疫吸附测定法、免疫组化测定法或其他应用抗原和抗体质检相互结合的测定方法，也包括上述单克隆抗体与其他单克隆抗体形成夹心配对并对抗原进行检测的测定方法。
[0023]免疫杀伤领域可以用于体内、体外不同区域，作用目标可以为人、除人外的动物、细胞、阻止、器官或其他生物活性成分，目的在于针对肿瘤体、肿瘤细胞、癌细胞的抑制、杀灭、诱导凋亡、限制扩散、减轻症状等作用。
[0024]另外，本申请还提供一种试剂盒，包含上述单克隆抗体或含有上述重链、轻链可变区的任意单克隆抗体。
[0025]该试剂盒可为酶联免疫吸附试剂盒、免疫荧光试剂盒或其他运用上述单克隆抗体或含有上述重链、轻链可变区的单克隆抗体与抗原发生特异性免疫反应后对产物进行检测的试剂盒，其具有特异性高、灵敏度高的优点，具有较好的运用前景。
附图说明
[0026]图1为PD
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L1抗原SDS
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PAGE电泳图，左边为纯化前，右边为纯化后；图2为抗体1和抗体2的SDS
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PAGE电泳图，其中，从左至右依次为抗体2纯化后和抗体1纯化后；图3为抗体1和抗体2进行夹心免疫反应检测抗原效价线性分析图。
具体实施方式
[0027]以下结合附图和实施例对本申请作进一步详细说明。
[0028]实施例1，PD
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L1单克隆抗体、重链、轻链可变区、单克隆细胞株及运用，其中PD
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L1单克隆抗体的序列具体如表1所示。表1、抗体PD
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L1的序列表
[0029]该PD
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L1单克隆抗体通过如下步骤制备得到。
[0030]一、构建PD
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L1表达载体从美国国家生物技术信息中心(NCBI)中人PD
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L1的基因序列(NP_054862)选取N端(1
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238aa)氨基酸片段，通过基因合成克隆至pcDNA3.1(+)表达载体，最终合成构建为pcDNA3.1(+)
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PD
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L1载体。同时基因合成时，在PD
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L1氨基酸C端添加6个组氨酸(His)标签，上述载体所表达重组PD
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L1分子量约32KD，氨基酸序列为SEQ ID NO:1。
[0031]二、免疫原细胞的表达1、转化及抽提质粒将上述pcDNA3.1(+)
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PD
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L1载体转化至大肠杆菌DH5α(天根公司)感受态细胞中，均匀涂布到含10本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.PD
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L1单克隆抗体重链、轻链可变区，其特征在于，重链可变区包括如下互补决定区：CDRH1：SYWIE；CDRH2：EILPGSGNTNYNEKLKG；CDRH3：ERRGDY；轻链可变区包括如下互补决定区：CDRL1：SASQGIYNYLN；CDRL2：YTSSLHS；CDRL3：QQYSKLPYT。2.根据权利要求1所述的PD
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L1单克隆抗体重链、轻链可变区，其特征在于，重链序列如SEQ ID No.2所示，轻链序列如SEQ ID No.3所示。3.PD
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L1单克隆抗体，其特征在于，包含如权利要求1～2中任意一项所述的重链、轻链可变区。4.根据权利要求3所述的PD
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L1单克隆抗体，其特征在于，重链恒定区为鼠源IgG1恒定区。5.根据权利要求3或4所述的PD
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L1单克隆抗体，其特征在于，重链...

【专利技术属性】
技术研发人员：周嘉颖，徐震宇，林晓东，
申请(专利权)人：广州兆瑞医学生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：