一种外泌体上CA15-3蛋白用于间质性肺部疾病诊断的试剂盒及应用制造技术

本申请涉及一种外泌体上CA15

【技术实现步骤摘要】
一种外泌体上CA15
‑
3蛋白用于间质性肺部疾病诊断的试剂盒及应用


[0001]本申请属于蛋白质检测
，一种外泌体上CA15
‑
3蛋白质用于辅助诊断间质性肺部疾病的试剂盒、检测方法及应用。

技术介绍

[0002]糖类抗原15
‑
3(CA15
‑
3)来自于乳腺上皮细胞，是由其表面糖抗原变异而来，释放入血液循环中。CA15
‑
3是粘蛋白1(Mucin1或MUC1)经水解后的一种可溶形式。最初发现CA15
‑
3是一种同时被单克隆抗体DF3和115D8识别的肿瘤抗原，其中DF3识别MUC1核心蛋白，115D8识别MUC1上的部分聚糖链。MUC1是一种表达于胃肠道、食管等组织上皮细胞顶端表面的高度糖基化膜结合蛋白，属粘蛋白家族，分子量约为400
‑
450kDa。MUC1由α和β亚单位组成，N末端α亚单位具有细胞粘附性，可作为粘附蛋白或抗粘附蛋白为上皮细胞提供保护性粘液屏障，防止细菌和酶的攻击，MUC1的C末端β亚单位可通过磷酸化和蛋白质相互作用，参与调节ERK、SRC和NF
‑
kappa
‑
B通路细胞信号传导，在活化T细胞中，还会影响Ras/MAPK通路，促进肿瘤发展；CA15
‑
3被认为是比较有前景的血清学指标，但CA15
‑
3与ILD病变的发生、进展、药物疗效及预后的研究较少。
[0003]外泌体是指直径在40nm
‑
160nm，平均直径为100nm的细胞外囊泡，目前已成为各种疾病诊断和治疗研究的热点。CA15
‑
3是一种定位在细胞膜上的糖蛋白，故理论上，该膜蛋白可以通过外泌体分泌进入循环系统，外泌体CA15
‑
3的检测在血清学诊断方面具有重要的潜在临床价值。多种细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，但外泌体上CA15
‑
3与间质性肺炎的关系目前尚未见报道。
[0004]现有基于血清中的靶点对于间质性肺疾病辅助诊断的检测试剂灵敏度较低，临床获益不明显，因此，建立一种通过准确检测外泌体上肺部疾病相关蛋白质的方法，用于判断间质性肺炎的疾病类型和进展状态具有重要的临床价值和研究价值。

技术实现思路

[0005]本申请的目的是提供一种外泌体上CA15
‑
3蛋白质作为标志物用于间质性肺部疾病辅助诊断的试剂盒及其检测方法、应用。
[0006]第一方面，本申请提供一种外泌体上CA15
‑
3蛋白在制备诊断肺部疾病试剂盒中的应用，采用如下的技术方案：一种外泌体上CA15
‑
3蛋白在制备诊断肺部疾病试剂盒中的应用。
[0007]上述试剂盒可用于间质性肺炎和其他肺部疾病的辅助诊断。
[0008]第二方面，本申请提供一种诊断肺部疾病的试剂盒，采用如下的技术方案：一种诊断肺部疾病的试剂盒，包括样本处理液、CA15
‑
3捕获抗体包被的磁珠、发光物标记的CA15
‑
3检测抗体、发光底物和CA15
‑
3校准品。
[0009]本申请公开了一种外泌体上CA15
‑
3蛋白质检测作为标志物用于间质性肺部疾病
辅助诊断的试剂盒，进一步的，该试剂盒用于间质性肺炎或其他肺部疾病的辅助诊断。
[0010]在一个具体的可实施方案中，样本处理液包括以下重量百分比的原料：TRIS 0.5
‑
1.5％、NaCl 0.3
‑
3％、BSA 0.5
‑
3％、Triton X
‑
100 0.1
‑
1％、Tween
‑
80 0.1
‑
0.5％、EDTA
‑
2Na0.01
‑
0.1％、聚乙烯吡咯烷酮
‑
K30(PVP
‑
K30)0.1
‑
1.0％、bicine(N，N
‑
二羟乙基甘氨酸)0.2
‑
2％、还原剂0.1
‑
0.3％、ProClin 300 0.05
‑
0.5％，其余为水。
[0011]优选的，还原剂为DTT、DEAET、β
‑
巯基乙醇、TCEP中至少一种。
[0012]预处理方式的增设减少了外泌体提取洗脱液中成分对外泌体蛋白检测的影响，有效缩短了检测时间，有利于外泌体蛋白全自动化检测的实现；并且预处理后可以进一步提高检测准确性，且不需要额外的孵育，可以极大缩短检测时间。
[0013]经过研究发现，ILD患者外泌体上CA15
‑
3蛋白检测发光值显著高于健康人群外泌体上CA15
‑
3蛋白检测发光值，且表现出非常显著的差异。所以，外泌体CA15
‑
3检测间质性肺部疾病具有较高的灵敏度和特异性，且能够有效识别目前常见的血清KL
‑
6检测试剂无法诊断到的样本，表明外泌体CA15
‑
3检测在间质性肺部疾病辅助诊疗过程中可能具有重要的潜在价值。
[0014]第三方面，本申请提供一种外泌体上CA15
‑
3蛋白检测的化学发光检测方法，采用如下的技术方案：上述试剂盒用于外泌体上蛋白含量的检测方法，步骤如下：待测外泌体样本检测之前，先对待测外泌体样本进行预处理，将待测外泌体样本与样本处理液混合，得到预处理后的待测外泌体样本。
[0015]外泌体样本使用样本处理液进行预处理后，样本中的外泌体被裂解，外泌体上CA15
‑
3蛋白被释放到溶液中，并通过与磁珠包被物工作液和发光物标记抗体工作液反应，形成免疫复合物，利用化学发光法检测发光强度并计算浓度值。
[0016]在一个具体的可实施方案中，试剂盒用于外泌体上CA15
‑
3蛋白含量的检测方法，具体步骤如下：一种外泌体上CA15
‑
3蛋白检测的化学发光检测方法，步骤如下：(1)对待测外泌体样本进行预处理：待测外泌体样本与样本处理液混合反应，得到预处理后的待测外泌体样本；(2)将步骤(1)得到的预处理后的待测外泌体样本与磁珠包被物工作液混合，反应得到磁珠
‑
抗原复合物；(3)将步骤(2)得到的磁珠
‑
抗原复合物与发光物标记抗体工作液混合，反应得到磁珠
‑
抗原
‑
检测抗体复合物；(4)将步骤(3)得到的磁珠
‑
抗原
‑
检测抗体复合物与发光底物混合，反应，检测发光强度；(5)使用标准曲线法，根据步骤(4)检测得到的发光强度计算得到待测外泌体样本中蛋白的含量。
[0017]在一个具体的可实施方案中，步骤(1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种外泌体上CA15
‑
3蛋白在制备诊断肺部疾病试剂盒中的应用。2.一种诊断肺部疾病的试剂盒，其特征在于：包括样本处理液、CA15
‑
3捕获抗体包被的磁珠、发光物标记的CA15
‑
3检测抗体。3.根据权利要求2所述的一种诊断肺部疾病的试剂盒，其特征在于：试剂盒还包括发光底物以及蛋白校准品。4.根据权利要求2所述的一种诊断肺部疾病的试剂盒，其特征在于，样本处理液包括以下重量百分比的原料：TRIS 0.5
‑
1.5%、NaCl 0.3
‑
3%、BSA 0.5
‑
3%、Triton X
‑
100 0.1
‑
1%、Tween
‑
80 0.1
‑
0.5%、EDTA
‑
2Na 0.01
‑
0.1%、聚乙烯吡咯烷酮
‑
K30 0.1
‑
1.0%、bicine 0.2
‑
2%、还原剂 0.1
‑
0.3%、ProClin 300 0.05
‑
0.5%,其余为水。5.根据权利要求4所述的一种诊断肺部疾病的试剂盒，其特征在于，还原剂为DTT、DEAET、β
‑
巯基乙醇、TCEP中至少一种。6.一种利用权利要求1
‑
5任一项所述试剂盒检测外泌体上蛋白含量的方法，其特征在于，检测方法的步骤如下：（1）将待测外泌体样本与样本处理液混合，得到预处理后的待测外泌体样本；（2）将步骤（1）得到的预处理后的待测外泌体样本与磁珠包被物工作液混合，反应得到磁珠
‑
抗原复合物；（3）将步骤（2）得到的磁珠
‑
抗原复合物与发光物标记抗体工作...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晨旭，洪锐槟，
申请(专利权)人：广州兆瑞医学生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：