分离装置及胞外囊泡的提取方法制造方法及图纸

本发明专利技术涉及一种分离装置及胞外囊泡的提取方法，分离装置包括旋转中心、至少一个提取机构，提取机构包括进样单元、分离单元以及收集单元；进样单元用于样本液的输入和存储；分离单元与进样单元连接且位于进样单元的下游，用于捕获或释放样本液中的提取目标物；收集单元与分离单元连接且位于分离单元的下游，用于收集分离单元释放的提取目标物。本发明专利技术利用该分离装置仅需一次加样，通过控制分离装置旋转，即可达到快速提取胞外囊泡的目的，操作简便，提取速度快效率高，试剂用量低，提取得到的胞外囊泡量大。胞外囊泡量大。

【技术实现步骤摘要】
分离装置及胞外囊泡的提取方法


[0001]本申请涉及生物样品分离的
，更具体地说，它涉及一种分离装置及胞外囊泡的提取方法。

技术介绍

[0002]胞外囊泡是一种由细胞释放到细胞外基质的膜性小囊泡，参与细胞通讯、细胞迁移、血管新生和肿瘤细胞生长等过程，广泛地存在于各种体液和细胞上清中，并稳定携带了一些重要的信号分子。
[0003]胞外囊泡主要由微囊泡和外泌体组成，微囊泡是细胞激活、损伤或凋亡后从细胞膜脱落的小囊泡，直径约为100nm
‑
1000nm；外泌体由细胞内的多泡小体与细胞膜融合后以外分泌的形式释放到细胞外，直径约为40nm
ꢀ‑
100nm。
[0004]胞外囊泡广泛存在于细胞培养上清以及各种体液（血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁）中，携带有细胞来源相关的多种蛋白质、脂类、DNA、mRNA、miRNA等，参与细胞间通讯、细胞迁移、血管新生和免疫调节等过程。
[0005]胞外囊泡的提取方法主要包括差速离心法、密度梯度离心法、聚合物沉淀法（PEG
‑
base沉淀法）、超滤法、磁珠免疫法和试剂盒法等。差速离心法是最常用的胞外囊泡纯化手段，采用低速离心、高速离心交替进行，可分离到大小相近的囊泡颗粒。密度梯度离心法是利用超速离心形成密度阶层，将胞外囊泡进行富集。PEG
‑
base沉淀法利用聚乙二醇（PEG）可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀的特性，早先应用于从血清等样本中收集病毒，现在也被用来沉淀胞外囊泡，其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。超滤离心法是采用不同截留相对分子质量的超滤膜进行选择性分离。磁珠免疫法是利用胞外囊泡表面有其特异性标记物（如CD63、CD9蛋白），用包被抗标记物抗体的磁珠与胞外囊泡囊泡孵育后结合，即可将胞外囊泡吸附并分离出来。但是，采用以上方法提取胞外囊泡通常需要多次加样换样，存在耗费时间长、操作过程繁琐等不足。

技术实现思路

[0006]基于此，有必要提供一种操作简单、胞外囊泡提取效率高的分离装置。
[0007]在第一方面，本申请提供的一种分离装置，采用如下的技术方案：一种分离装置，包括旋转中心、至少一个提取机构，所述提取机构包括进样单元、分离单元以及收集单元；所述进样单元用于样本液的输入和存储；所述分离单元与所述进样单元连接且位于所述进样单元的下游，用于捕获或释放样本液中的提取目标物；所述收集单元与所述分离单元连接且位于所述分离单元的下游，用于收集所述分离单元释放的提取目标物；所述分离单元包括搅拌球（3000）。
[0008]在一些实施方案中，所述分离单元包括载体储存池、载体结合池、载体过滤池和洗脱液池，所述载体储存池用于加装装载液，装载液含有能够与提取目标物结合的载体；所述载体结合池分别与所述进样单元和所述载体储存池连通；所述洗脱液池用于加装能够使提
取目标物与所述载体分离的洗脱液；所述载体过滤池分别与所述载体结合池和所述洗脱液池连通，且所述载体过滤池中设有用于截留所述载体的载体滤膜；所述载体储存池、载体结合池、载体过滤池自旋转中心近心端至远心端依次分布；在一些实施方案中，所述分离单元还包括分离池，所述样品池通过所述分离池与所述载体结合池连通，所述样品池、分离池和所述载体结合池自旋转中心近心端到远心端依次分布。
[0009]在一些实施方案中，所述分离池包括第一腔室、连接部和第二腔室，所述第一腔室通过所述连接部与所述第二腔室连通，且所述连接部的内径小于所述第一腔室和所述第二腔室的内径。
[0010]在一些实施方案中，自旋转中心近心端到远心端，所述分离单元还包括用于加装样本稀释液的稀释液池和稀释混合池，所述稀释液池与所述稀释混合池连通，所述分离池通过所述稀释混合池与所述载体结合池连通；在一些实施方案中，所述分离单元还包括杂质过滤池，所述稀释混合池通过所述杂质过滤池与所述载体结合池连通，所述杂质过滤池中设有用于截留杂质的杂质滤膜；在一些实施方案中，所述分离单元还包括缓冲池，所述洗脱液池通过所述缓冲池与所述载体过滤池连通，所述洗脱液池、缓冲池和载体过滤池自旋转中心近心端至远心端依次分布。
[0011]在一些实施方案中，所述进样单元包括加样孔和样品池，所述加样孔与所述样品池连通以用于向所述样品池输入样本液，所述样品池用于存储样本液。
[0012]在一些实施方案中，所述收集单元包括分别与所述载体过滤池连通的目标物收集池和废液池，所述目标物收集池用于收集来自载体过滤池的提取目标物，所述废液池用于收集来自载体过滤池的废液；在一些实施方案中，所述分离单元还包括流向选择池，所述目标物收集池和所述废液池分别通过所述流向选择池与所述载体过滤池连通，液体由所述载体过滤池流向流向选择池，再由所述流向选择池流向目标物收集池或废液池。
[0013]在一些实施方案中，所述分离池与所述稀释混合池之间通过第一通道连通，所述稀释液池与所述稀释混合池之间通过第二通道连通，所述载体储存池与所述载体结合池之间通过第三通道连通，所述洗脱液池与所述缓冲池之间通过第四通道连通，所述缓冲池与所述载体过滤池之间通过第五通道连通，所述载体结合池与所述载体过滤池之间通过第六通道连通；所述第一通道、所述第二通道、所述第三通道、所述第四通道、第五通道和所述第六通道均交替地朝向所述旋转中心和所述分离装置的边缘弯折，且所述第二通道、所述第三通道、所述第四通道和所述第五通道在每段朝向所述旋转中心延伸的部分均设有毛细阀。
[0014]在一些实施方案中，所述载体过滤池具有载体过滤入口部和载体过滤出口部，所述载体过滤入口部和所述载体过滤出口部之间的底壁开设有放膜槽，所述载体滤膜嵌设于所述放膜槽。
[0015]在第二方面，本专利技术还提供了一种外泌体的提取方法，使用上述分离装置，所述提取方法包括以下步骤：将样本液加至所述进样单元；控制所述分离装置的转速，使所述样本液经过所述
分离单元，且使所述样本液中的外泌体被捕获；将被所述分离单元捕获的外泌体释放至所述收集单元。
[0016]在一些实施方案中，控制所述分离装置的转速的步骤包括：（1）控制所述分离装置在第一速度下离心，使样本液从所述样品池流入所述分离池；（2）按与所述步骤（1）相反的方向控制所述分离装置在第二速度下离心，停止旋转后顺时针启动离心直至达到第三速度后停止，再逆时针启动离心直至达到所述第三速度后停止离心并静置，使所述分离池中的液体和所述稀释液池中的液体流入所述稀释混合池混合并流入所述杂质过滤池，经过所述杂质滤膜到达所述载体结合池，且所述载体储存池中的液体流入所述载体结合池与过滤后的液体混合；（3）按与所述步骤（1）相同的方向控制所述分离装置在第四速度下离心，使所述载体结合池中的液体流入所述载体过滤池，并经过所述载体滤膜到达所述废液池，所述载体被截留，同时所述洗脱液池中的液体流入所述缓冲池；（4）按与所述步骤（1）相反的方向控制所述分离装置在所述第四速度下离心，使所述缓冲池中的液体流入所述载体过滤池，并经过所述载体滤膜到达所述目标物本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分离装置，其特征在于，包括旋转中心（1000）、至少一个提取机构，提取机构包括进样单元（2100）、分离单元以及收集单元；进样单元（2100）用于样本液的输入和存储；分离单元与进样单元（2100）连接且位于进样单元（2100）的下游，用于捕获或释放样本液中的提取目标物；收集单元与分离单元连接且位于分离单元的下游，用于收集分离单元释放的提取目标物；所述分离单元包括搅拌球（3000）。2.根据权利要求1所述的分离装置，所述分离单元包括载体储存池（2201）、载体结合池（2202）、载体过滤池（2203）和洗脱液池（2204），载体储存池（2201）用于加装装载液，装载液含有能够与提取目标物结合的载体；载体结合池（2202）分别与进样单元（2100）和载体储存池（2201）连通；洗脱液池（2204）用于加装能够使提取目标物与载体分离的洗脱液；载体过滤池（2203）分别与载体结合池（2202）和洗脱液池（2204）连通，且载体过滤池（2203）中设有用于截留载体的载体滤膜（22034）；载体储存池（2201）、载体结合池（2202）、载体过滤池（2203）自旋转中心（1000）近心端至远心端依次分布。3.根据权利要求2所述的分离装置，所述分离单元还包括分离池（2205），所述进样单元（2100）通过所述分离池（2205）与所述载体结合池（2202）连通，所述进样单元（2100）、所述分离池（2205）和所述载体结合池（2202）自所述旋转中心（1000）近心端到远心端依次分布。4.根据权利要求3所述的分离装置，其特征在于，所述分离池（2205）包括第一腔室（22051）、连接部（22053）和第二腔室（22052），所述第一腔室（22051）通过所述连接部（22053）与所述第二腔室（22052）连通，且所述连接部（22053）的内径小于所述第一腔室（22051）和所述第二腔室（22052）的内径。5.根据权利要求3或4所述的分离装置，其特征在于，自旋转中心（1000）近心端到远心端，所述分离单元还包括用于加装样本稀释液的稀释液池（2207）和稀释混合池（2208），所述稀释液池（2207）与所述稀释混合池（2208）连通，所述分离池（2205）通过所述稀释混合池（2208）与载体结合池（2202）连通。6.根据权利要求5所述的分离装置，其特征在于，所述分离单元还包括杂质过滤池（2206），所述稀释混合池（2208）通过所述杂质过滤池（2206）与所述载体结合池（2202）连通，所述杂质过滤池（2206）中设有用于截留杂质的杂质滤膜（22064）。7.根据权利要求5所述的分离装置，其特征在于，所述分离单元还包括缓冲池（2209），所述洗脱液池（2204）通过所述缓冲池（2209）与所述载体过滤池（2203）连通，所述洗脱液池（2204）、所述缓冲池（2209）和所述载体过滤池（2203）自旋转中心（1000）近心端至远心端依次分布。8.根据权利要求1所述的分离装置，其特征在于，所述进样单元（2100）包括加样孔（2102）和样品池（2101），加样孔（2102）与样品池（2101）连通以用于向样品池（2101）输入样本液，样品池（2101）用于存储样本液。9.根据权利要求2所述的分离装置，所述收集单元包括分别与所述载体过滤池（2203）连通的目标物收集池（2301）和废液池（2302），所述目标物收集池（2301）用于收集来自载体过滤池（2203）的提取目标物，所述废液池（2302）用于收集来自所述载体过滤池（2203）的废液。10.根据权利要求9所述的分离装置，所述分离单元还包括流向选择池（2211），所述目标物收集池（2301）和所述废液池（2302）分别通过所述流向选择池（221...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴钍荣，徐震宇，林晓东，陈瑛娜，
申请(专利权)人：广州兆瑞医学生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：