一种马克思克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法技术

本发明专利技术属于微生物检测技术领域，具体提供了一种马克思克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法，包括以下步骤：(1)配制培养基并向培养基中加入那他霉素和羟苯乙酯；(2)取马克思克鲁维酵母产品，加入无菌生理盐水，混匀制成菌悬液；(3)菌悬液用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释得到稀释液；(4)将稀释液涂布于培养基中进行培养后，对细菌菌落进行计数。本发明专利技术提供的这种计数方法将那他霉素和羟苯乙酯相结合，能够抑制马克斯克鲁维酵母生长，对细菌没有抑制作用，不影响细菌总数的计数，提高了计数准确性。此外，羟苯乙酯价格低于那他霉素，与那他霉素结合使用不仅起到很好的作用效果，还能够降低成本。降低成本。

【技术实现步骤摘要】
一种马克思克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法


[0001]本专利技术属于微生物检测
，具体涉及一种马克思克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法。

技术介绍

[0002]细菌总数是判定饲料或微生物产品被污染程度的标志之一，可为被检样品的卫生学评价提供依据。马克斯克鲁维酵母是Kluyveromyces属的微生物，其形态是圆形、白色、凸起、透明、表面光滑、边缘整齐。由于马克斯克鲁维酵母在国标总菌计数方法中用到的培养基上也能生长，导致细菌总数计算严重超标，因此，国标总菌计数方法不适用于马克斯克鲁维酵母产品的细菌总数测试。在对酵母的总菌进行计数时最常用的抑制剂是放线菌酮，但放线菌酮是一种对人体有毒的化学样品，长期使用会影响操作人员健康。那他霉素是一种天然抗真菌化合物，属于多烯环内酯类，既可以广泛有效地抑制各种霉菌、酵母菌的生长，又能抑制真菌毒素的产生。且那他霉素对细菌没有抑制作用，因此不影响细菌总数的计数。但那他霉素成本较高，为此，本专利技术利用那他霉素与羟苯乙酯协同作用，代替放线菌酮，提供了一种作用效果好，成本低的马克斯克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法。

技术实现思路

[0003]本专利技术的目的是克服现有技术中马克斯克鲁维酵母会干扰细菌计数，常用抑制剂安全性低、成本高的问题。
[0004]为此，本专利技术提供了一种马克思克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法，包括以下步骤：
[0005](1)配制培养基并向培养基中加入那他霉素和羟苯乙酯；
[0006](2)取马克思克鲁维酵母产品，加入无菌生理盐水，混匀制成菌悬液；
[0007](3)菌悬液用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释得到稀释液；
[0008](4)将稀释液涂布于培养基中进行培养后，对细菌菌落进行计数。
[0009]具体的，上述步骤(1)中每升培养基包括10.0g蛋白胨、3.0g牛肉膏粉、5.0g氯化钠、20g琼脂，余量为水。
[0010]具体的，上述步骤(1)中那他霉素为0.01
‑
0.03g/ml的那他霉素溶液。
[0011]具体的，上述那他霉素溶液的制备方法为：称取那他霉素，在无菌条件下加入灭菌缓冲液中，振荡混匀，得到那他霉素溶液。
[0012]具体的，上述步骤(1)中那他霉素溶液的添加量为培养基体积的0.01
‑
0.03％。
[0013]具体的，上述步骤(1)中羟苯乙酯为0.01
‑
0.03g/ml的羟苯乙酯悬浊液。
[0014]具体的，上述羟苯乙酯悬浊液的制备方法为：称取羟苯乙酯，在无菌条件下加入灭菌去离子水，80℃水浴锅中加热5分钟。
[0015]具体的，上述羟苯乙酯悬浊液的添加量为培养基体积的0.01
‑
0.03％。
[0016]具体的，上述步骤(2)中马克思克鲁维酵母产品与无菌生理盐水的重量体积比为
(0.5
‑
5):100；所述步骤(3)中梯度稀释倍数为10
‑6以上。
[0017]具体的，上述步骤(4)中培养条件为30℃培养72小时。
[0018]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点和有益效果：
[0019]本专利技术提供的这种马克思克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法将那他霉素和羟苯乙酯相结合，能够抑制马克斯克鲁维酵母生长，对细菌没有抑制作用，不影响细菌总数的计数，提高了计数准确性。此外，羟苯乙酯价格低于那他霉素，与那他霉素结合使用不仅起到很好的作用效果，还能够降低成本。
具体实施方式
[0020]下面将结合实施例对本专利技术中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。尽管已经详细描述了本专利技术的代表性实施例，但是本专利技术所属
的普通技术人员将理解，在不脱离本专利技术范围的情况下可以对本专利技术进行各种修改和改变。因此，本专利技术的范围不应局限于实施方案，而应由所附权利要求及其等同物来限定。
[0021]下面通过具体实施例对本专利技术的马克思克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法的效果进行研究。
[0022]除特殊说明外，本专利技术实施例中所用的试剂均为分析纯，水均为符合GB/T 6682中规定的二级水。
[0023]实施例1：
[0024]本实施例研究了那他霉素与羟苯乙酯相结合用于马克思克鲁维酵母产品中细菌计数的效果，具体方法如下。
[0025](1)配制NA培养基：将蛋白胨10.0g、牛肉膏粉3.0g、氯化钠5.0g、琼脂20g加入到水中至1000mL，调pH 7.3
±
0.1。分装至500mL锥形瓶中，121℃高压灭菌20min。
[0026]配制LB营养琼脂培养基：将胰蛋白胨10.0g、酵母提取物5.0g、氯化钠10.0g、琼脂20.0g加入到水中至1000mL,调pH 7.0
±
0.2。分装至500mL锥形瓶中，121℃高压灭菌20min。
[0027]配制琼脂培养基：称3.6g琼脂于400mL蒸馏水中，调pH值至6.8～7.2。121℃高压灭菌20min。
[0028]配制生理盐水：取8.5g氯化钠于1000mL蒸馏水中，121℃高压灭菌20min。
[0029]配制缓冲液：称取磷酸二氢钾34g溶于500mL蒸馏水中，用1mol/L氢氧化钠溶液175mL，校正至pH值至7.0～7.2，再用蒸馏水稀释至1000mL，取上述液体1.25mL，用蒸馏水稀释至1000mL。分装至500mL锥形瓶中，121℃高压灭菌20min。
[0030]配制那他霉素溶液：称0.5g那他霉素于无菌三角瓶中，加24.5mL灭菌缓冲液，振荡摇匀。
[0031]配制羟苯乙酯悬浊液：称0.5g羟苯乙酯于无菌三角瓶中，加24.5mL去离子水，80℃水浴锅中加热5分钟。用前振荡摇匀。
[0032]配制含放线菌酮的NA培养基：将2mL DTM添加剂(1ml含放线菌酮100mg)加于400mL NA培养基中(浓度0.05％)。121℃高压灭菌20min。
[0033]样品提取及稀释：取25g菌活为10
10
CFU/g的马克斯克鲁维酵母，加入225mL无菌生理盐水置于室温下振荡混匀，制成菌悬液；取菌悬液用无菌生理盐水依次进行10倍稀释得
到稀释液。
[0034](2)分四组进行马克思克鲁维酵母抑菌实验，其中：
[0035]空白对照组1：依次取1ml稀释梯度为10
‑6、10
‑7和10
‑8的马克斯克鲁维酵母菌稀释液于不同培养皿中，向培养皿中加入NA培养基溶液混匀；
[0036]放线菌酮组1：依次取1ml稀释梯度为10
‑6、10
‑7和10
‑8的马克斯克鲁维酵母菌稀释液于不同培养皿中，向培养皿中加入含放线菌酮的NA培养基溶液；
[0037]那他霉素组1：依次取1ml稀释梯度为10
‑6、1本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种马克思克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)配制培养基并向培养基中加入那他霉素和羟苯乙酯；(2)取马克思克鲁维酵母产品，加入无菌生理盐水，混匀制成菌悬液；(3)菌悬液用无菌生理盐水进行10倍梯度稀释得到稀释液；(4)将稀释液涂布于培养基中进行培养后，对细菌菌落进行计数。2.如权利要求1所述的马克思克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法，其特征在于：所述步骤(1)中每升培养基包括10.0g蛋白胨、3.0g牛肉膏粉、5.0g氯化钠、20g琼脂，余量为水。3.如权利要求1所述的马克思克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法，其特征在于：所述步骤(1)中那他霉素为0.01
‑
0.03g/ml的那他霉素溶液。4.如权利要求3所述的马克思克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法，其特征在于，所述那他霉素溶液的制备方法为：称取那他霉素，在无菌条件下加入灭菌缓冲液中，振荡混匀，得到那他霉素溶液。5.如权利要求3所述的马克思克鲁维酵母产品中细菌总数的计数方法，其特征在于：所述步骤(1)中那他霉素溶液的添加量为培养基体...

【专利技术属性】
技术研发人员：苏丹，徐丽，陈雪姣，邓晓旭，程瑛，程超，辜玲芳，詹志春，周樱，
申请(专利权)人：武汉新华扬生物股份有限公司，
类型：发明
国别省市：