用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的稀释剂及检测方法技术

本发明专利技术提供用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的稀释剂及检测方法，该稀释剂为磷酸盐缓冲液。磷酸盐缓冲液包括磷酸二氢钾、氢氧化钠、L

【技术实现步骤摘要】
用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的稀释剂及检测方法


[0001]本专利技术涉及活菌检测
，且特别涉及一种用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的稀释剂及检测方法。

技术介绍

[0002]双色晶球益生菌采用三层晶球包裹的微囊技术将双歧杆菌和乳杆菌包裹在晶球中央，以最大程度保护益生菌的活性，使其保持最大活菌量直达肠道，从而维护肠道菌群平衡，帮助促进食物消化和吸收，促进排便，让肠道保持活力。其中，在双色晶球益生菌中通过两种不同颜色来区分双歧杆菌和乳杆菌。2022年5月中国营养保健食品协会发布团体标准T/CNHFA006
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2022《益生菌食品活菌率分级规范》，新团标对在标签标示的条件下贮存了三分之一保质期时的益生菌活菌率进行明确的分级，确保消费者真正吃进去活的益生菌，发挥对人体肠道的有益作用。因此保质期内活菌稳定性和能有效检出的活菌量是晶球益生菌终端产品最关键的质量指标和功效数据。
[0003]对于双色混合包埋型(微囊)晶球益生菌中同时包含双歧杆菌和乳杆菌的检测，目前国标GB4789.35
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2016《食品微生物学检验乳酸菌检验》中统一的检测方法(检验流程如图1所示)是用生理盐水作为稀释剂先制备1:10的供试液，稀释后选择适宜的浓度，先检测乳酸菌总数，即使用MRS琼脂培养基倾注后在36
±
1℃厌氧培养72
±
2h；另外用添加莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良的MRS琼脂培养基同法选择性检测出双歧杆菌数，然后用乳酸菌总数减去双歧杆菌数得出的就是乳杆菌数(使用2
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1模式)。但是，双歧杆菌属于严格厌氧菌，而乳杆菌属于兼性厌氧菌。因此，在实际检测中，采用上述GB法检测双色混合包埋型(微囊)晶球益生菌中双歧杆菌和乳杆菌时检验误差很大。此外，生理盐水作为稀释剂，不能使包埋型(微囊)晶球益生菌中的乳杆菌和双歧杆菌很好地释放出来，常常导致数据不稳定或计数结果存在偏差，因而无法准确地进行乳杆菌和双歧杆菌的计数检验。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的在于提供一种用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的稀释剂，采用该组合配方式稀释剂可以使益生菌在最佳条件下有效释放，从而提高乳杆菌菌数和双歧杆菌菌数。
[0005]本专利技术的另一目的在于提供一种双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌的检测方法，该检测方法先分别对乳杆菌和双歧杆菌进行计数，再计算得到乳酸菌总数，无需多种培养基，数据稳定，重现性好，更加科学准确。
[0006]本专利技术解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
[0007]本专利技术提出一种用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的稀释剂，所述稀释剂为磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸二氢钾、氢氧化钠、L
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半胱氨酸盐酸盐、吐温80和琼脂粉，其中，所述磷酸缓冲液中，所述磷酸二氢钾、所述氢氧化钠、
所述L
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半胱氨酸盐酸盐、所述吐温80和所述琼脂粉的质量比为6.7～6.9：0.55～0.65：0.4～0.6：1：0.4～0.6。
[0008]本专利技术提出一种双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌的检测方法，包括以下步骤：
[0009]S1、供试液的制备：双色混合包埋型晶球益生菌过筛后，将黄色晶球和白色晶球分开，然后分别将所述黄色晶球和所述白色晶球与所述稀释剂混合，水浴后均质处理，然后用所述稀释剂进行逐级稀释，得到不同细菌浓度的双歧杆菌供试液和不同细菌浓度的乳杆菌供试液，其中，所述黄色晶球中包埋有双歧杆菌，所述白色晶球中包埋有乳杆菌；
[0010]S2、分别将所述双歧杆菌供试液和所述乳杆菌供试液接种至无菌培养皿中，立即倾注BL琼脂培养基混匀凝固后，将所述培养皿倒置在35～37℃下厌氧培养70～74h；
[0011]S3、从所述培养皿中选取菌落数在30～300之间的菌落进行平板计数，得到所述乳杆菌菌数和所述双歧杆菌菌数。
[0012]本专利技术实施例的用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的稀释剂及检测方法的有益效果是：
[0013]本专利技术的稀释剂在磷酸盐缓冲液的基础上进行改良，通过将缓冲液的pH值调节为6.5
±
0.1，可以使制备得到的供试液pH与肠道益生菌生长的pH值相近。另外，通过添加抗氧化剂L
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半胱氨酸盐酸盐可以防止益生菌氧敏感性，添加吐温
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80可以改善包埋型(微囊)晶球在稀释剂中的分散性，并在稀释剂内还添加有适量琼脂粉，从而可以使益生菌在最佳条件下得到有效释放，以提高乳杆菌数和双歧杆菌数。
[0014]本专利技术的乳杆菌和双歧杆菌检测方法先依据晶球颜色挑选出双歧杆菌和乳杆菌，并分别检验双歧杆菌和乳杆菌的菌量，两者的菌量加起来即为乳酸菌的总数(使用1+1模式)。采用该检测方法对两种菌进行检验时仅需一种培养基即可，无需使用多种培养基，简单且方便。另外，使用本方法检测出来的乳杆菌菌数和双歧杆菌菌数均高于使用GB的方法测出来的乳杆菌菌数和双歧杆菌菌数，且数据稳定，重现性好，更加科学准确。
附图说明
[0015]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
[0016]图1为采用国标GB4789.35
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2016中的检测方法进行双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的流程图；
[0017]图2为采用本专利技术实施例2的检测方法进行双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的流程图；
[0018]图3为采用不同检测方法检测第一种规格的双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌的对比图；
[0019]图4为采用不同检测方法检测第二种规格的双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌的对比图；
[0020]图5为采用不同检测方法检测第三种规格的双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌
和双歧杆菌的对比图。
具体实施方式
[0021]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
[0022]下面对本专利技术实施例的用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的组合配方式稀释剂及检测方法进行具体说明。
[0023]本专利技术实施例提供的一种用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的稀释剂，所述稀释剂为磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸二氢钾、氢氧化钠、L
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半胱氨酸盐酸盐、吐温80和琼脂粉，其中，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的稀释剂，其特征在于，所述稀释剂为磷酸盐缓冲液，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸二氢钾、氢氧化钠、L
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半胱氨酸盐酸盐、吐温80和琼脂粉，其中，所述磷酸缓冲液中，所述磷酸二氢钾、所述氢氧化钠、所述L
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半胱氨酸盐酸盐、所述吐温80和所述琼脂粉的质量比为6.7～6.9：0.55～0.65：0.4～0.6：1：0.4～0.6。2.根据权利要求1所述的用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的稀释剂，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的制备包括以下步骤：按照所述重量份数分别称取各组分，接着将所述磷酸二氢钾、所述氢氧化钠和水混合后，得到稀释液，所述稀释液中加入所述L
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半胱氨酸盐酸盐、所述吐温80和所述琼脂粉后加热搅拌，调节pH值并高温灭菌，得到所述磷酸盐缓冲液。3.根据权利要求2所述的用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的稀释剂，其特征在于，所述稀释液中，所述氢氧化钠的摩尔浓度为0.014～0.016mol/L。4.根据权利要求2所述的用于双色混合包埋型晶球益生菌中乳杆菌和双歧杆菌检测的稀释剂，其特征在于，所述pH值为6.5
±
0.1，所述高温灭菌的温度为115～125℃，灭菌时间为15～25min。5....

【专利技术属性】
技术研发人员：喻喜华，陈新颜，寇馨月，田苗苗，谢雅兰，任美玲，邱晓峰，方晓丹，陈喜生，苏志伟，张娟，
申请(专利权)人：国药控股星鲨制药厦门有限公司，
类型：发明
国别省市：