衰老细胞判定系统技术方案

本发明专利技术提供非破坏性且迅速地判定成肌细胞等培养目标细胞的衰老程度的手段。对于在培养液中贴附于培养基材表面时细胞质在培养基材上铺展的该铺展而言，越是衰老程度高的细胞则铺展得越广，利用这一点基于亮度、反射率或图像处理结果来检测铺展的程度，从而判定衰老的程度。也可以根据铺展的速度来判别衰老的程度。度。度。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】衰老细胞判定系统


[0001]本专利技术涉及进行用于培养目标细胞的细胞制品的、衰老细胞的判定的系统。

技术介绍

[0002]近年来，为了修复损伤的组织等，进行了移植各种细胞的尝试。例如，为了修复因心绞痛、心肌梗塞等缺血性心脏病而损伤的心肌组织，尝试了利用胎儿心肌细胞、骨骼肌成肌细胞、间充质干细胞、心脏干细胞、ES细胞、iPS细胞等(非专利文献1)。
[0003]作为这样的尝试的一环，开发了：利用支架而形成的细胞结构物；将细胞形成为片状而得的片状细胞培养物(非专利文献2)。
[0004]关于片状细胞培养物在治疗中的应用，进行了下述研究：培养表皮片在由烧伤等引起的皮肤损伤中的利用、角膜上皮片状细胞培养物在角膜损伤中的利用、口腔黏膜片状细胞培养物在食道癌的内镜下的切除中的利用等，其中一部分已进入临床应用的阶段。
[0005]这样的治疗中使用的骨骼肌成肌细胞通常从要移植的对象的骨骼肌组织中分离骨骼肌成肌细胞及肌卫星细胞等CD56阳性细胞而得到，作为使得从骨骼肌组织分离的细胞中包含的CD56阳性细胞的比例提高的策略，例如，已知下述方法等：将骨骼肌组织在蛋白质降解酶溶液中浸渍规定的时间来进行酶处理，将得到的酶处理液废弃后，再次在蛋白质降解酶溶液中浸渍规定的时间来进行酶处理，将得到的酶处理液中包含的细胞回收(专利文献1)。
[0006]在将骨骼肌成肌细胞制成例如作为用于制作片状细胞培养物的材料的细胞制品的情况下，对细胞进行培养使细胞数增加，但若细胞衰老，则增殖在中途停止，无法得到一定数目的细胞。r/>[0007]为了避免这样的风险，需要判定供于培养的细胞的衰老程度，对作为判定对象的含细胞的液体中的、衰老细胞的含有率是否在容许范围内进行判定。
[0008]以往，为了知晓用于细胞培养的细胞的衰老程度，将包含细胞的液体的一部分取样后进行分析检查，因此不能说是非破坏检查，细胞的一部分因检查而损失。另外，分析耗费时间。
[0009]作为在细胞存活的状态下判定分裂的活跃度的技术，使用即使结合、细胞也不会死亡的色素进行显微镜观察的技术是已知的(专利文献2)。
[0010]然而，该观察法是人进行显微镜观察来判别，无法自动地判别例如大量的对象细胞。另外，还存在下述这样的问题：判断耗费大量时间；人进行目视观察的情况下，判断产生偏差。
[0011]现有技术文献
[0012]专利文献
[0013]专利文献1：日本特开2007
‑
89442号公报
[0014]专利文献2：日本特开平8
‑
136536号公报
[0015]非专利文献
[0016]非专利文献1：Haraguchi等人,StemCells Transl Med.2012Feb；1(2):136
‑
41
[0017]非专利文献2：Sawa等人,Surg Today.2012Jan；42(2):181
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技术实现思路

[0018]专利技术所要解决的课题
[0019]以往，在想要将培养的细胞以细胞制品的形式供给的情况下，若包含在进一步培养细胞制品时增殖在中途停止这样的衰老的细胞，则作为细胞制品是不合格的，因此需要预先判定细胞制品的衰老程度，若能够非破坏性地进行判定，则能够在不损失细胞的情况下避免供给不合格品的风险，这样的判定是令人期待的。
[0020]另外，期望非破坏性细胞衰老判定能够迅速简便地进行。此外，对于衰老程度的判定，期望没有偏差的精度高的判定。
[0021]用于解决课题的手段
[0022]本申请的专利技术人为了解决上述问题而进行了深入研究，结果发现，在要进行培养的细胞贴附于培养基材时，其细胞质的面积铺展，而其铺展方式在衰老的细胞与未衰老的细胞之间大不相同，另外，在细胞增殖之后的状态下，在衰老的细胞与未衰老的细胞之间铺展也不同。
[0023]进一步发现，细胞质的面积的铺展可非破坏性地通过光的反射率、细胞的亮度或拍摄的图像信息来检测。然后，基于这样的见解进一步反复进行研究，结果发现，作为培养对象的目标细胞的衰老程度可利用非破坏性方法且迅速地检测，也能够使细胞制品的品质检查自动化，从而完成了本专利技术。
[0024]另外，还发现细胞质面积自贴附于培养基材后扩大的速度、以及细胞增殖时扩大的速度、即面积的时间变化率也根据培养细胞的衰老程度而有所不同，因此，通过检测每单位时间的面积变化率也能够判定培养细胞的衰老程度，本专利技术也包括该内容。
[0025]即，本专利技术涉及以下内容。
[0026][1]目标细胞衰老判定系统，其为用于判定目标细胞的衰老的系统，包含：
[0027]检测部，其对培养基材上的目标细胞的细胞质的面积变化进行检测；和
[0028]判定部，其根据检测部的检测结果来判定细胞的衰老。
[0029][2]如[1]所述的系统，其中，判定部根据目标细胞贴附于培养基材以后的面积变化来判定衰老。
[0030][3]如[1]或[2]所述的系统，其中，检测部通过细胞的亮度、反射率或图像信息来检测细胞质的面积变化。
[0031][4]如[1]～[3]中任一项所述的系统，其通过面积的时间变化率来检测细胞质的面积变化。
[0032][5]如[1]～[4]中任一项所述的系统，其中，通过使判定部学习实测的衰老程度，从而判定部对细胞质面积变化因衰老程度而产生的差异进行判定。
[0033][6]如[1]～[5]中任一项所述的系统，其中，目标细胞为成肌细胞。
[0034]专利技术的效果
[0035]本专利技术能够非破坏性地迅速判定目标细胞的衰老程度，因此能够在不损失细胞的情况下迅速地判定细胞制品的品质。另外，能够非破坏性且非接触地利用光并使用检测器、
图像处理机构来进行判定，因此能够实现不经人手的自动判别，判断产生偏差的可能性也大幅降低，也能够实现判定基准的客观化、稳定化。
附图说明
[0036][图1]图1为对本专利技术所检测的、细胞质的铺展进行说明的说明图。
具体实施方式
[0037]本说明书中，除非另有定义，本说明书中使用的全部技术术语及科学术语具有与本领域技术人员通常理解的含义相同的含义。本说明书中参照的全部专利、申请及其他出版物、信息通过参考其整体援引至本说明书中。
[0038]本专利技术中，所谓“细胞”，可以包含从来自生物体的组织中分离得到的任意细胞。可非限定性地举出心肌细胞、成纤维细胞、上皮细胞、内皮细胞、肝细胞、胰腺细胞、肾细胞、肾上腺细胞、牙周膜细胞、牙龈细胞、骨膜细胞、皮肤细胞、滑膜细胞、软骨细胞等及干细胞(例如，成肌细胞(例如，骨骼肌成肌细胞)(成肌细胞包括肌卫星细胞)、间充质干细胞(例如，源自骨髓、脂肪组织、外周血、皮肤、发根、肌肉组织、子宫内膜、胎盘、脐带血的间充质干细胞细胞等)、心脏干细胞等组织干细胞、胚性干细胞等)。本专利技术中的细胞可以是在呈平面接触的多个膜之间与多个膜直接接触或者以与多个膜相邻的方本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.目标细胞衰老判定系统，其为用于判定目标细胞的衰老的系统，包含：检测部，其对培养基材上的目标细胞的细胞质的面积变化进行检测；和判定部，其根据检测部的检测结果来判定细胞的衰老。2.如权利要求1所述的系统，其中，判定部根据目标细胞贴附于培养基材以后的面积变化来判定衰老。3.如权利要求1或2所述的系统，其中，检测部通过细胞的亮度、反射率...

【专利技术属性】
技术研发人员：野口枝莉，松村匡记，
申请(专利权)人：泰尔茂株式会社，
类型：发明
国别省市：