用于将生物素递送至线粒体的方法和组合物技术

某些示例性实施方案涉及被配置为将生物素靶向递送至线粒体的生物活性物质组合物(及其用途)，该组合物包含与水溶性的、细胞渗透性的肽序列缀合的第一D

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于将生物素递送至线粒体的方法和组合物
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求未决的2020年9月9日提交的美国临时专利申请63/075,996(代理人案号1255
‑
003)以及于2020年9月9日提交的美国临时专利申请63/076,022(代理人案号1255
‑
004)的优先权并且通过引用以其整体并入本文。
[0003]附图简述
[0004]参考所附的示例性附图，通过本文提供的对某些示例性实施方案的非限制性、非穷举性描述，将更容易地理解各种各样潜在的、可行的和/或有用的实施方案，在附图中：
[0005]图1A、图1B和图1C是示出生物素可以如何与靶向线粒体的肽序列缀合的化学结构图。
[0006]图2是与某些示例性化合物的细胞摄取相关的荧光显微图像。
[0007]图3是示出示例性细胞摄取的图。
[0008]图4是与某些示例性化合物的细胞摄取相关的荧光显微图像。
[0009]图5是示出示例性细胞摄取的图。
[0010]图6是与某些示例性化合物的靶向线粒体相关的荧光显微图像。
[0011]图7是示出示例性细胞存活力的图。
[0012]图8是示出示例性细胞数量的显微图像。
[0013]图9是示出示例性细胞存活力的图。
[0014]图10是示出示例性细胞ATP水平的图。
[0015]图11是示出示例性细胞ATP水平的图。
[0016]图12是示出示例性细胞ATP水平的图。
[0017]图13是示出线粒体电位的荧光显微图像。
[0018]图14是示出示例性线粒体电位的荧光显微图像。
[0019]图15是与某些示例性化合物相关的划痕区域的显微图像。
[0020]图16是示出示例性划痕面积的图。
[0021]图17是示出示例性划痕面积的图。
[0022]图18是与某些示例性化合物相关的划痕区域的显微图像。
[0023]图19是示出示例性划痕面积的图。
[0024]图20是与某些示例性化合物的细胞增殖相关的显微图像。
[0025]图21是示出示例性细胞增殖的图。
[0026]图22是与某些示例性化合物的细胞增殖相关的显微图像。
[0027]图23是示出示例性细胞增殖的图。
[0028]图24是与某些示例性化合物的线粒体电位相关的显微图像。
[0029]图25是示出示例性线粒体电位的图。
[0030]图26是与某些示例性化合物的视网膜摄取相关的荧光显微图像。
[0031]图27是与某些示例性化合物的视网膜摄取相关的荧光显微图像。
[0032]详述
[0033]本文描述的某些示例性实施方案可以涉及用于增强生物素的细胞和/或线粒体摄取的方法和组合物。生物素靶向递送至线粒体可以提高功效并且避免使用高剂量的生物素。
[0034]本文描述的某些示例性实施方案可以提供一种用于使用水溶性的、细胞渗透性的、靶向线粒体的肽序列将生物素递送至线粒体的方法。
[0035]本文描述的某些示例性实施方案涉及选自具有通用的芳香族
‑
阳离子基序的多肽组的短水溶性的肽序列，这意味着多肽组的氨基酸可以布置为例如[芳香族
‑
阳离子
‑
芳香族
‑
阳离子]或[阳离子
‑
芳香族
‑
阳离子
‑
芳香族]。
[0036]本文描述的某些示例性实施方案可以包括包含天然存在的氨基酸的多肽。
[0037]本文描述的某些示例性实施方案可以包括D氨基酸，D氨基酸可以帮助使肽对肽酶的水解更耐受。本文描述的某些示例性实施方案可以包括包含一个或更多个非天然存在的氨基酸的多肽。非天然存在的氨基酸是那些通常不在活生物体中的正常代谢过程中合成的氨基酸，并且不天然存在于蛋白中。非天然存在的氨基酸可以包括天然存在的氨基酸的衍生物。
[0038]可用于本专利技术的肽可以包含一个或更多个非天然存在的氨基酸。非天然存在的氨基酸可以是L
‑
氨基酸、右旋(D)氨基酸或其混合物。最佳地，肽不具有天然存在的氨基酸。
[0039]非天然存在的氨基酸是那些不天然存在于蛋白中的氨基酸。此外，可用于本专利技术中的非天然存在的氨基酸优选地也不被普通蛋白酶识别。
[0040]非天然存在的氨基酸可以存在于肽的任何位置处。例如，非天然存在的氨基酸可以在N
‑
末端处、C
‑
末端处或者N
‑
末端与C
‑
末端之间的任何位置处。
[0041]非天然氨基酸可以例如包含烷基、芳基或烷基芳基基团。烷基氨基酸的一些实例包括α
‑
氨基丁酸、β
‑
氨基丁酸、γ
‑
氨基丁酸、δ
‑
氨基戊酸和ε
‑
氨基己酸。芳基氨基酸的一些实例包括邻氨基苯甲酸、间氨基苯甲酸和对氨基苯甲酸。烷基芳基氨基酸的一些实例包括邻氨基苯乙酸、间氨基苯乙酸和对氨基苯乙酸，以及γ
‑
苯基
‑
β
‑
氨基丁酸。
[0042]非天然存在的氨基酸也包括天然存在的氨基酸的衍生物。天然存在的氨基酸的衍生物可以例如包括将一个或更多个化学基团添加至天然存在的氨基酸。
[0043]例如，一个或更多个化学基团可以添加至苯丙氨酸或酪氨酸残基的芳香族环的2
′
、3
′
、4
′
、5
′
或6
′
位置，或者色氨酸残基的苯并环的4
′
、5
′
、6
′
或7
′
位置中的一个或更多个。基团可以是可以添加至芳香族环的任何化学基团。这样的基团的一些实例包括支化的或非支化的C1‑
C4烷基，诸如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丁基、异丁基或叔丁基，C1‑
C4烷氧基(即烷氧基)，氨基，C1‑
C4烷基氨基和C1‑
C4二烷基氨基(例如，甲基氨基、二甲基氨基)，硝基，羟基，卤代(例如，氟代、氯代、溴代或碘代)。天然存在的氨基酸的非天然存在的衍生物的一些特定实例包括正缬氨酸(Nva)、正亮氨酸(Nle)和羟脯氨酸(Hyp)。
[0044]可用于本专利技术方法的肽中氨基酸修饰的另一实例是肽的天冬氨酸或谷氨酸残基的羧基基团的衍生化。衍生化的一种实例是用氨或用伯胺或仲胺(例如甲胺、乙胺、二甲胺或二乙胺)进行酰胺化。衍生化的另一实例包括与例如甲醇或乙醇酯化。
[0045]另一种这样的修饰包括对赖氨酸、精氨酸或组氨酸残基的氨基基团的衍生化。例如，这样的氨基基团可以被酰化。一些合适的酰基基团包括例如包含以上提及的C1‑
C4烷基基团的苯甲酰基基团或烷酰基基团，诸如乙酰基或丙酰基基本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种生物活性物质组合物，包含与位于水溶性的、细胞渗透性的、靶向线粒体的肽序列的C
‑
末端处的赖氨酸缀合的第一D
‑
生物素，其中所述靶向线粒体的肽序列：包含最少四个氨基酸且最多六个氨基酸；以及具有通用的交替的芳香族
‑
阳离子基序。2.根据权利要求1所述的组合物，其中所述靶向线粒体的肽序列选自由以下组成的多肽组：D
‑
Arg
‑
L
‑
(2
’6’‑
二甲基Tyr)
‑
L
‑
Lys
‑
L
‑
Phe
‑
NH2；D
‑
Arg
‑
L
‑
Tyr
‑
D
‑
Arg
‑
L
‑
Phe
‑
L
‑
Lys
‑
NH2；D
‑
Trp
‑
D
‑
Arg
‑
D
‑
Trp
‑
D
‑
Lys
‑
OH；L
‑
Trp
‑
L
‑
Arg
‑
L
‑
Trp
‑
L
‑
Lys
‑
NH2；D
‑
Trp
‑
D
‑
Arg
‑
D
‑
Trp
‑
D
‑
Lys
‑
NH2；以及L
‑
Trp
‑
L
‑
Arg
‑
L
‑
Trp
‑
L
‑
Lys
‑
OH。3.根据权利要求1所述的组合物，其中第二D
‑
生物素与所述靶向线粒体的肽序列的N
‑
末端α
‑
胺缀合。4.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含以下的一种或更多种：D
‑
生物素
‑
D
‑
Arg
‑
L
‑
(2
’6’‑
二甲基Tyr)
‑
L
‑
Lys
‑
L
‑
Phe
‑
NH2；和D
‑
生物素
‑
D
‑
Trp
‑
D
‑
Arg
‑
D
‑
Trp
‑
D
‑
Lys
‑
OH。5.根据权利要求1所述的组合物，其中所述第一D
‑
生物素与所述靶向线粒体的肽序列的C
‑
末端处的赖氨酸的ε
‑
胺缀合。6.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含以下的一种或更多种：D
‑
Trp
‑
D
‑
Arg
‑
D
‑
Trp
‑
D
‑
Lys(生物素基)
‑
OH；L
‑
Trp
‑
L
‑
Arg
‑
L
‑
Trp
‑
L
‑
Lys(生物素基)
‑
NH2；以及D
‑
Arg
‑
L
‑
Tyr
‑
D
‑
Arg
‑
L
‑
Phe
‑
L
‑
Lys(生物素基)
‑
NH2。7.根据权利要求1所述的组合物，其中所述第一D
‑
生物素与所述靶向线粒体的肽序列的C
‑
末端处的赖氨酸的ε
‑
胺缀合，并且第二D
‑
生物素与N
‑
末端α
‑
胺缀合。8.根据权利要求1所述的组合物，其中所述组合物包含以下的一种或更多种：D
‑
生物素
‑
L
‑
Trp
‑
L
‑
Arg
‑
L<...

【专利技术属性】
技术研发人员：黑兹尔，
申请(专利权)人：社会利益网络公司，
类型：发明
国别省市：