【技术实现步骤摘要】
一种铜敏感型恶臭假单胞菌基因敲除突变株及其应用
[0001]本专利技术涉及基因工程领域,具体涉及一种铜敏感型恶臭假单胞菌基因敲除突变株及其应用。
技术介绍
[0002]铜是人类最早使用的金属之一,具有延展性好、导热性好和电导率高等优点,广泛应用于电缆、电器和电子元器件等,也可作为原料与其他金属组成各种性能优越的合金材料。此外,铜的化合物还被用于纺织品媒染剂、水池消毒剂和农业杀菌剂(如波尔多液)等产品。铜的广泛使用也导致了大量含铜废水的产生,主要包括冶炼废水、印制电路板蚀刻废水和电镀废水等。铜超标废水的排放对水体和土壤都具有较大的危害。
[0003]随着工业的高速发展,许多地区的生态环境遭到破坏,重金属污染物是其中重要的因素之一,环境中主要的重金属污染物包括汞、镉、铅、铬以及类金属砷等。铜也属于重金属,但由于其生物毒性相对较低,受关注程度不如上述高度毒性的重金属,但是,当环境铜离子浓度超出微生物的耐受范围时,对环境微生物生态将产生较大影响。铜离子可破坏微生物细胞壁进入细胞后可影响许多酶的活性,造成代谢混乱,从而表现出抑菌活性。环境中的微生物为抵抗重金属胁迫,进化出完善的响应和抗性机制,利用筛选或改造的微生物对重金属离子进行吸附和固化是治理水体和土壤的重金属污染问题的有效途径。此外,利用改造的微生物指示环境中重金属污染问题也是环境监测中的一种重要手段。开发更高效的微生物工具,将有利于提高微生物对环境重金属污染的修复和监测。
技术实现思路
[0004]本专利技术针对恶臭假单胞菌对Cu
2+< ...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种对Cu
2+
敏感的恶臭假单胞菌双基因簇敲除突变株,其特征在于,是将恶臭假单胞菌中的copRS1基因簇和copRS2基因簇敲除;copRS1基因簇的序列如SEQ ID NO.1所示;copRS2基因簇的序列如SEQ ID NO.2所示。2.根据权利要求1所述的突变株,其特征在于,是将copRS1基因簇从第147位到第1761位之间的编码序列以及copRS2基因簇从第185位到第1852位之间的编码序列敲除。3.根据权利要求1所述的突变株,其特征在于,所述的恶臭假单胞菌为恶臭假单胞菌KT2440。4.一种权利要求1或2所述的突变株的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)以恶臭假单胞菌基因组为模板,使用引物copRS1upS/copRS1upA和copRS1dnS/copRS1dnA分别扩增copRS1的上下游片段,使用引物copRS2upS/copRS2upA和copRS2dnS/copRS2dnA分别扩增copRS2的上下游片段,作为基因敲除的同源臂;(2)分别将copRS1和copRS2的上下游片段同时通过重组酶连接连入经过SacI酶切的线性化质粒pDS3.0中,热激转化大肠杆菌S17
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1λpir,得到pDS
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copRS1和pDS
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copRS2;(3)将pDS
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copRS1通过接合转移从大肠杆菌S17
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1λpir中导入恶臭假单胞菌中,涂布含庆大霉素和氯霉素的LB平板,得到第一次同源重组的菌株;(4)将第一次同源重组的菌株扩大培养后,使用含蔗糖的培养基筛选发生第二次同源重组的菌株,在含氯霉素的LB平板上分离单菌落,使用引物copRS1wyzS/copRS1wyzA进行PCR验证,得到copRS1敲除突变株;(5)pDS
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copRS2通过接合转移从大肠杆菌S17
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1λpir中导入copRS1敲除突变株中,涂布含庆大霉素和氯霉素的LB平板,得到第一次同源重组的copRS1突变株;(6)将第一次同源重组的copRS1突变株扩大培养后,使用含蔗糖的培养基筛选第二次同源重组的菌株,在含氯霉素的LB平板上分离单...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘惠忠,谢小保,王颖思,施庆珊,
申请(专利权)人:广东省科学院微生物研究所广东省微生物分析检测中心,
类型:发明
国别省市:
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