毕赤酵母及其培养方法技术

本申请公开了一种保藏编号为CGMCC NO.26401的毕赤酵母及毕赤酵母的培养方法。本申请的毕赤酵母的胶原蛋白产量高，经连续传代试验，菌种状态稳定，表现出较高的工业应用潜力。本申请的培养毕赤酵母的方法使得在整个细胞发酵阶段，细胞结构完整、活性高，表达能力强，提高了外源蛋白表达量。提高了外源蛋白表达量。

【技术实现步骤摘要】
毕赤酵母及其培养方法


[0001]本申请涉及微生物发酵工程领域，特别涉及一种产胶原蛋白的毕赤酵母及毕赤酵母的培养方法。

技术介绍

[0002]蛋白类药物和工业酶的异源表达在各类生物制药产业和工业应用中具有重要意义。巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)作为最为成功的真核蛋白表达系统之一，相比大肠埃希菌(Escherichia coli)和枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)等传统原核表达体系，毕赤酵母具备如下显著优势。
①
蛋白表达量高。毕赤酵母的甲醇代谢启动子AOX1是已知效果最强的启动子之一，在甲醇充分诱导下，AOX1转录产物占整个细胞转录产物的30％以上，相当多的外源蛋白的表达量达到g/L级别。
②
分泌效率高。与在原核表达系统中易形成难复性、难纯化、活性低的包涵体不同，外源蛋白在毕赤酵母中通常能够得到较好的分泌。
③
较为完备的后加工处理能力。作为真核表达系统，毕赤酵母能够为外源蛋白的折叠、糖基化及其他后加工过程提供较为适宜的环境和条件。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种毕赤酵母(Pichia pastoris)，其在中国普通微生物菌种保藏管理中心的保藏编号为CGMCC NO.26401。2.一种毕赤酵母的培养物，其通过培养权利要求1所述的毕赤酵母(Pichia pastoris)得到。3.一种毕赤酵母的培养方法，其中所述培养方法包括：在甲醇诱导阶段，当毕赤酵母开始代谢甲醇时，添加第一补料、第二补料、第三补料中的一种、两种或三种，并控制发酵液的溶解氧浓度为30
‑
70％，维持40
‑
50h。4.根据权利要求3所述的培养方法，其中所述补料培养基均由去离子水和营养物复配得来，其中第一补料包括25％
‑
50％(V/V)的葡萄糖和25％
‑
50％的蛋白胨(V/V)，优选地，包括25％
‑
30％(V/V)葡萄糖和25％
‑
30％蛋白胨(V/V)，余量为水，进一步优选地，包括25％(V/V)葡萄糖和25％蛋白胨(V/V)，余量为水。5.根据权利要求3或4所述的培养方法，其中所述第二补料包括70％(V/V)甲醇和3
‑
5g/L柠檬酸铵，余量为水，优选地，包括70％(V/V)甲醇和4
‑
5g/L柠檬酸铵，余量为水，进一步优选地，包括70％(V/V)甲醇和5g/L柠檬酸铵，余量为水。6.根据权利要求3
‑
5中任一项所述的培养方法，其中所述第三补料包括2
‑
5g/L酪蛋白水解物、3...

【专利技术属性】
技术研发人员：范代娣，宋养斌，段志广，严建亚，
申请(专利权)人：陕西巨子生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：