一种丝状真菌氧化还原指示传感器及其构建方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种丝状真菌氧化还原指示传感器及其构建方法和应用。本发明专利技术所涉及的传感器，以avGFP为原型，通过定点突变氨基酸位点并在avGFP的149和202位引入一对半胱氨酸最终形成相应序列；以哈茨木霉NJAU 4742的基因组DNA为模板，克隆长度为1308 bp的U3基因片段，基因合成潮霉素B抗性表达片段，以哈茨木霉NJAU 4742的基因组DNA为模板，克隆长度为532bp的U3基因上游同源臂，克隆长度为1663bp的强启动子片段，以pUC57质粒为模板扩增的氧化还原指示传感器功能性片段以及长度为1185bp的U3基因下游同源臂，并将6个片段利用融合PCR技术进行融合，再通过转化的方式最终形成氧化还原指示荧光菌株。本发明专利技术的传感器，将为实现丝状真菌胞内氧化还原状态的可视化操作提供理论和应用基础。操作提供理论和应用基础。

【技术实现步骤摘要】
一种丝状真菌氧化还原指示传感器及其构建方法和应用


[0001]本专利技术属于微生物
，具体涉及一种丝状真菌氧化还原指示传感器及其构建方法和应用。

技术介绍

[0002]氧化还原状态是评估细胞生理和病理状态的重要指标。在正常情况下，细胞内的氧化还原反应维持在一个平衡状态，随着外界条件的变化或细胞自身的代谢失衡，细胞内的氧化还原状态会发生改变，细胞内活性氧(ROS)大量累积，造成DNA、蛋白质损伤以及脂质过氧化等，影响细胞结构和功能，严重情况下会造成细胞凋亡。哈茨木霉菌NJAU 4742(Trichoderma guizhouense NJAU 4742，以下简称NJAU 4742)是一种在自然界中分布较广的根际有益丝状真菌。因其自身对植物生长具有明显的促生作用、对土传病原菌具有有效的拮抗作用以及对木质纤维素的高效降解作用而被广泛应用于各类研究。NJAU 4742定殖于植物根部后能与植物形成共生体，显著促进根际养分的转化并通过分泌次级代谢产物和植物生长调节剂来促进植物的生长，有效地施用NJAU 4742菌株及其相关的生物有机肥产品，也是减少我本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种丝状真菌氧化还原指示传感器，其特征在于，通过将avGFP蛋白的氨基酸序列的第69位氨基酸由丙氨酸突变成谷氨酰胺，第150位氨基酸由缬氨酸突变成天冬氨酸，并在avGFP的149和202位引入一对半胱氨酸得到。2.权利要求1所述的丝状真菌氧化还原指示传感器的功能性片段的编码基因，其特征在于，其核苷酸序列如 SEQ ID NO.1 所示。3.权利要求2所述的一种丝状真菌氧化还原指示传感器的编码基因的构建方法，其特征在于，主要通过以下方法构建：以哈茨木霉NJAU 4742的基因组DNA为模板，克隆长度为1308 bp的U3基因片段，基因合成潮霉素B抗性表达片段，以哈茨木霉NJAU 4742的基因组DNA为模板，克隆长度为532bp的U3基因上游同源臂，克隆长度为1663bp的强启动子片段，以pUC57质粒为模板扩增的氧化还原指示传感器功能性片段以及长度为1185bp的U3基因下游同源臂，并将6个片段按以上顺序，利用融合PCR技术进...

【专利技术属性】
技术研发人员：沈其荣，刘东阳，朱瀚，李驰，李托，刘洋，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：