一种里氏木霉重组菌株、其制备方法及其应用技术

本发明专利技术提供了一种里氏木霉重组菌株、其制备方法及其应用，该里氏木霉重组菌株为里氏木霉TrEP

【技术实现步骤摘要】
一种里氏木霉重组菌株、其制备方法及其应用


[0001]本专利技术涉及农业生物
，具体而言，涉及一种里氏木霉重组菌株、其制备方法及其应用。

技术介绍

[0002]纤维素是通过β
‑
1，4糖苷键连接葡萄糖而成的同聚多糖，它是植物细胞壁的主要成分，是地球上最丰富的可再生资源。纤维素酶是一种能够将纤维素降解为葡萄糖的复合酶系，根据在纤维素上的作用位点可以分为内切葡聚糖酶、外切葡聚糖酶以及β
‑
葡萄糖苷酶。以纤维素为底物时，内切葡聚糖酶能够识别并切割纤维素内部非结晶区的β
‑
1，4葡萄糖苷键，从而释放出不同长度的短链纤维寡糖和纤维多糖，为外切葡聚糖酶和β
‑
葡萄糖苷酶提供底物。因此，内切葡聚糖酶在纤维素的水解过程中扮演着重要角色，内切葡聚糖酶活力的高低往往直接影响纤维素酶对纤维素的水解效率。
[0003]里氏木霉(Trichoderma reesei)是当前生物界中分泌纤维素酶能力最强的微生物之一，并且其胞外分泌的纤维素酶系较全，其内切葡聚糖酶具有很好的热稳定性并且在酸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种里氏木霉重组菌株，其特征在于，所述里氏木霉重组菌株为里氏木霉TrEP
‑
4，所述里氏木霉TrEP
‑
4为能够过表达伴侣蛋白的里氏木霉。2.根据权利要求1所述的里氏木霉重组菌株，其特征在于，所述里氏木霉重组菌株中包含编码所述伴侣蛋白的核酸分子的重组质粒；优选地，所述伴侣蛋白为二硫键异构酶PDI1；优选地，编码所述伴侣蛋白PDI1的核酸分子为表达盒Pcbh1
‑
pdi1
‑
Tcbh1，其中，Pcbh1表示纤维二糖水解酶I启动子Pcbh1，pdi1表示伴侣蛋白基因pdi1，Tcbh1表示纤维二糖水解酶I终止子Tcbh1；优选地，所述重组质粒还包括氨苄青霉素抗性基因AmpR及筛选标记基因pyr4；优选地，所述里氏木霉重组菌株的出发菌株为包含所述重组质粒的里氏木霉TU
‑
6；优选地，所述里氏木霉TU
‑
6保藏号为ATCC MYA
‑
256。3.根据权利要求2述的里氏木霉重组菌株，其特征在于，所述表达盒中的所述纤维二糖水解酶I启动子Pcbh1、所述伴侣蛋白基因pdi1及所述纤维二糖水解酶I终止子Tcbh1均来自里氏木霉；优选地，所述伴侣蛋白基因pdi1的DNA序列如SEQ ID NO：1所示。4.一种生产纤维素酶的方法，其特征在于，所述方法包括：利用权利要求1
‑
3中任一项所述的里氏木霉重组菌株制备孢子悬液；将所述孢子悬液进行种子培养，得到种子液；将所述种子液进行摇瓶发酵，得到发酵后的上清液，即为所述纤维素酶。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述制备孢子悬液包括：将所述里氏木霉重组菌株接种至PDA培养基，进行产孢培养，得到所述孢子悬液；优选地，所述产孢培养的温度为28
‑
30℃；优选地，所述产孢培养的时间为5
‑
6d；优选地，所述孢子悬液中孢子浓度为1
×
107‑
108个/mL。6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述种子培养包括：将所述孢子悬液接种至种子培养基中，进行摇瓶培养，得到所述种子液；优选地，所述孢子悬液接种量为5
‑
6ml；优选地，所述种子培养基量为50
‑
60ml；优选地，所述种子培养的温度为30
‑
32℃；优选地，所述摇瓶培养的转速为200
‑
220rpm；优选地，以质量分数计，所述种子培养基包括2
‑
3％葡萄糖、0.50
‑
0.55％酵母粉、0.50
‑
0.55％磷酸氢二钾、0.50
‑
0.55％磷酸二氢钾、0.02
‑
0.04％硫酸镁及0.02
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：牛硕，覃先武，徐素吟，张彦，田迎春，李明，郑贤良，余华顺，
申请(专利权)人：安琪酵母股份有限公司，
类型：发明
国别省市：