G型产气荚膜梭菌的重组蛋白、疫苗及应用制造技术

本申请提供了一种G型产气荚膜梭菌的重组蛋白、疫苗及其应用。具体地，G型产气荚膜梭菌的重组蛋白具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。通过免疫本申请的重组蛋白，能够有效地防治G型产气荚膜梭菌引起的鸡坏死性肠炎；并且具有安全、可靠、制备方法简单等特点。可靠、制备方法简单等特点。可靠、制备方法简单等特点。

【技术实现步骤摘要】
G型产气荚膜梭菌的重组蛋白、疫苗及应用


[0001]本申请涉及生物
，特别是涉及一种G型产气荚膜梭菌的重组蛋白、疫苗及应用。

技术介绍

[0002]产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)广泛分布在人类、动物和鸟类的肠道中。产气荚膜梭菌可以侵染人类和动物的许多组织，从而引起肠毒性疾病；该菌的滑动运动与其毒性功能相关，有助于菌株的粘附能力和生物膜形成。
[0003]产气荚膜梭菌的毒性可归因于它拥有20多种强毒素和水解酶。根据不同菌株的产毒模式，产气荚膜梭菌可以产生多种外毒素和侵袭性酶，根据产生的毒素类型，可将菌株分为七种毒素型(A型、B型、C型、D型、E型、F型和G型)。其中，G型产气荚膜梭菌是禽类坏死性肠炎(Necrotic enteritis，NE)的主要病原菌。
[0004]目前，家禽产业中主要是通过使用抗生素对禽类坏死性肠炎进行预防性处理。然而，越来越多的细菌被报道对抗生素产生了抗性，因此迫切需要一种安全、有效的预防禽类坏死性肠炎的方法。

技术实现思路

[0005]基于此，本申请提供了一种能够有效防治禽类坏死性肠炎的G型产气荚膜梭菌的重组蛋白、疫苗及应用。
[0006]根据本申请的一个方面，提供了一种G型产气荚膜梭菌的重组蛋白，所述重组蛋白具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。
[0007]一种分离的核酸，编码上述的重组蛋白。
[0008]在其中一个实施例中，所述核酸的序列如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示。
[0009]一种重组载体，含有上述的核酸。
[0010]一种宿主细胞，其基因组中掺有上述的核酸或上述的重组载体。
[0011]在其中一个实施例中，所述宿主细胞为原核细胞。
[0012]一种疫苗，含有上述的重组蛋白、上述的核酸或上述的重组载体。
[0013]在其中一个实施例中，还包括佐剂。
[0014]成套的试剂盒，包含上述的疫苗，以及用于接种所述疫苗的容器。
[0015]根据本申请的另一方面，提供了上述的重组蛋白、上述的核酸或上述的重组载体在制备防治G型产气荚膜梭菌感染的药物中的应用。
[0016]与传统技术相比，本申请具有如下有益效果：
[0017]本申请针对G型产气荚膜梭菌的α毒素和NetB毒素，研制了氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的重组蛋白。该重组蛋白能够对G型产气荚膜梭菌产生有效的免疫保护，并且具有安全、稳定、无毒副作用等特点。
[0018]此外，本申请的重组蛋白能够通过分子疫苗或口服疫苗的形式使用，有效预防和
治疗G型产气荚膜梭菌所引起的家禽坏死性肠炎。
附图说明
[0019]为了更清楚地说明本申请实施例中的技术方案、更完整地理解本申请及其有益效果，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍。显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本申请的一些实施例，对本领域技术人员来说，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0020]图1为本申请实施例2中构建的重组质粒图谱；
[0021]图2为本申请实施例2中菌落PCR鉴定的凝胶电泳图；
[0022]图3为本申请实施例2中重组蛋白的纯化与鉴定结果图；
[0023]图4为本申请实施例3中构建的重组质粒图谱；
[0024]图5为本申请实施例3中菌落PCR鉴定的凝胶电泳图；
[0025]图6为本申请实施例4中鸡只的肠道病变结果图。
具体实施方式
[0026]为使本申请的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，对本申请的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本申请。但是本申请能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本申请内涵的情况下做类似改进，因此本申请不受下面公开的具体实施例的限制。
[0027]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本申请的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本申请的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本申请。除非另有特别说明，本申请中用到的各种原材料、试剂、仪器和设备等均可通过市场购买得到或者可通过现有方法制备得到。
[0028]本文所使用的术语“和/或”、“或/和”、“及/或”的选择范围包括两个或两个以上相关所列项目中任一个项目，也包括相关所列项目的任意的和所有的组合，所述任意的和所有的组合包括任意的两个相关所列项目、任意的更多个相关所列项目、或者全部相关所列项目的组合。需要说明的是，当用至少两个选自“和/或”、“或/和”、“及/或”的连词组合连接至少三个项目时，应当理解，在本申请中，该技术方案毫无疑问地包括均用“逻辑与”连接的技术方案，还毫无疑问地包括均用“逻辑或”连接的技术方案。比如，“A及/或B”包括A、B和A+B三种并列方案。又比如，“A，及/或，B，及/或，C，及/或，D”的技术方案，包括A、B、C、D中任一项(也即均用“逻辑或”连接的技术方案)，也包括A、B、C、D的任意的和所有的组合，也即包括A、B、C、D中任两项或任三项的组合，还包括A、B、C、D的四项组合(也即均用“逻辑与”连接的技术方案)。
[0029]本申请的一些实施方式提供了一种G型产气荚膜梭菌的重组蛋白，其具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。
[0030]具体地，SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列为：
[0031]MGSDPSVGNNVKELVAYISTSGEKDAGTDDYMYFGIKTKDGKTQEWEMDNPGNDFMAGSKDTYTFKLKDENLKIDDIQNMWIRKRKYTAFPDAYKPENIKVIANGKVVVDKDINEWEAAAKYYGKMKWPETYRINVKSADVNNNIKIANSIPKNTIDKKDVSNSIGYSIGGNISVEGKTAGAGINASYNVQNTISYEQPDFRTIQRKDDANLASWDIKFVETK
DGYNIDSYHAIYGNQLFMKSRLYNNGLE
[0032]本申请还提供了一种分离的核酸，编码上述的重组蛋白。
[0033]核酸可以为RNA或DNA。
[0034]在其中一些实施方式中，针对不同的宿主细胞，对上述核酸的核苷酸序列进行密码子优化。
[0035]密码子优化是指在不改变氨基酸序列的情况下，利用宿主细胞的偏爱密码子，对目的基因进行优化，提高重组蛋白的表达效率。
[0036]在其中一些实施方式中，上述的核酸具有如SEQ ID NO.1或SEQ ID NO.2所示的核苷酸序列。
[0037]此外，上述的重组蛋白的氨基酸序列还可以与选自SEQ ID NO：3的氨基酸序列实质上相似的序列。所述核酸的核苷酸序列还可以与选自SEQ ID NO：1或SEQ ID NO:2的核苷酸序列实质上相似的序列。“实质上相似”意本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种G型产气荚膜梭菌的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。2.一种分离的核酸，其特征在于，编码权利要求1所述的重组蛋白。3.根据权利要求2所述的核酸，其特征在于，所述核酸的序列如SEQ IDNO.1或SEQ ID NO.2所示。4.一种重组载体，其特征在于，含有权利要求2～3任一项所述的核酸。5.一种宿主细胞，其特征在于，其基因组中掺有权利要求2～3任一项所述的核酸或权利要求4所述的重组载体。6.根据权利要求5...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔡海明，胡俊菁，申翰钦，孙铭飞，廖申权，戚南山，李娟，吕敏娜，林栩慧，宋勇乐，肖文婉，张小慧，张健騑，
申请(专利权)人：广东省农业科学院动物卫生研究所，
类型：发明
国别省市：