一种可广谱抑制人冠状病毒感染的重组蛋白及其应用制造技术

本发明专利技术涉及生物医药技术领域，具体的说是一种可广谱抑制人冠状病毒感染的重组蛋白及其应用。所述重组蛋白含SARS

【技术实现步骤摘要】
targeting the stem helix broadly neutralize diverse betacoronaviruses.Cell Host Microbe,2022.)。晶体结构分析发现，在三聚体S蛋白pre
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fusion构象中，stem helix形成表面暴露的膜
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近端螺旋束(Wang C,van Haperen R,Gutierrez
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Alvarez J,et al.A conserved immunogenic and vulnerable site on the coronavirus spike protein delineated by cross
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reactive monoclonal antibodies.Nat Commun,2021.)；在S2 post
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fusion状态下，stem helix的中间部分被折叠成一个短的、表面暴露的螺旋，与中心coil
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coil结构垂直对接，对HR1和HR2形成的六螺旋结构起到一定的稳固作用(Walls,A.C.；Tortorici,M.A.；Snijder,J.；et al.Tectonic conformational changes of a coronavirus spike glycoprotein promote membrane fusion.Proc Natl Acad Sci U S A,2017.；Cai,Y.；Zhang,J.；Xiao,T.；et al.Distinct conformational states of SARS
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CoV
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2spike protein.Science,2020.)。更重要的是stem helix序列在HCoVs中较为保守(Sauer,M.M.；Tortorici,M.A.；Park,Y.J.；et al.Structural basis for broad coronavirus neutralization.Nat Struct Mol Biol,2021.)，已有研究发现MERS
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CoV
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2S2亚基的疫苗能诱导产生针对stem helix区域的抗体，且其能与β
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CoV S蛋白交叉结合(Hsieh CL,Werner AP,Leist SR,et al.Stabilized coronavirus spike stem elicits a broadly protective antibody.Cell Rep,2021.)。这些发现表明S2亚基中的保守区域，如HR1和stem helix区，可以被设计为开发广谱抗人冠状病毒感染的入侵抑制剂和广谱冠状病毒疫苗的免疫原候选，以更好地应对SARS
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CoV
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2及其变异株、其他人冠状病毒感染。

技术实现思路

[0004]本专利技术目的在于解决目前新型冠状病毒疫苗广谱性不佳的问题，进而提供一种可广谱抑制人冠状病毒感染的重组蛋白及其应用。
[0005]为实现上述目的，本专利技术采用技术方案为：
[0006]一种可广谱抑制人冠状病毒感染的重组蛋白，所述重组蛋白含SARS
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CoV
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2的七螺旋重复域1；或，含SARS
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CoV
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2的七螺旋重复域1，且其区域中部分添加CH区域部分氨基酸序列和/或S2中stem helix区域的stem helix序列。
[0007]所述SARS
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CoV
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2的七螺旋重复域1为将三段HR1序列(TQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALN TLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDKVE)按正向
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反向
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正向的顺序使用连接臂(GKGNQ和GLIDG)进行连接。
[0008]所述正向HR1和反向HR1之间的连接臂为GKGNQ；反向HR1和正向HR1之间的连接臂为GLIDG；
[0009]所述CH区域部分氨基酸序列为AEVQIDRLITGRLQ；
[0010]所述S2中stem helix区域的stem helix序列为LDSFKEELDKYFKNHTSP。
[0011]所述重组蛋白为SARS
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CoV
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2的七螺旋重复域1，C端融合His标签表达，具体氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，即THR1；
[0012]或，所述重组蛋白为重组蛋白THR1中每一段的HR1的C端通过GSGSG连接一段S2中stem helix区域的stem helix序列，具体氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，即THR1S；
[0013]或，所述重组蛋白为重组蛋白THR1中C末端添加CH区域部分氨基酸序列，并通过GSGSG与S2中stem helix区域的stem helix序列连接，具体氨基酸序列如SEQ ID NO:3所
示，即THR1LS。
[0014]一种可广谱抑制人冠状病毒感染的载体，载体含所述的重组蛋白。
[0015]一种可广谱抑制人冠状病毒感染的宿主细胞，含所述载体。
[0016]一种所述可广谱抑制人冠状病毒感染的重组蛋白的应用，所述重组蛋白在制备预防和/或治疗冠状病毒的药物中的应用。
[0017]一种所述可广谱抑制人冠状病毒感染的重组蛋白的应用，所述重组蛋白在作为免疫原用于亚单位疫苗中的应用。
[0018]所述以重组蛋白作为免疫原，其联合佐剂制备预防和/或治疗冠状病毒的疫苗中的应用。
[0019]一种所述可广谱抑制人冠状病毒感染的重组蛋白的应用，所述的重组蛋白在制备冠状病毒检测试剂中的应用。
[0020]本专利技术所具有的优点：
[0021]本专利技术重组蛋白能通过原核表达系统进行表达，具备典型的α螺旋结构，在体外能有效的结合SARS
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CoV
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2的HR2P多肽。而且，上述重组蛋白在体外均能有效中和SARS
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CoV
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2假病毒感染。其中THR1LS活性最佳，同时其也能有效的中和SARS
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CoV
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2Delta、Omicorn突变株和HCoVs(SARS
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CoV、MERS
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CoV、HCoV
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229E和HCoV
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NL63)感染，进而可见本专利技术重组蛋白有潜力进一步开发为广谱抗冠状病毒蛋白类药物。
[0022]本专利技术重组蛋白可以作为免疫原进行亚单位疫苗，将上述THR1、THR1S或THR1LS蛋白分别与铝佐剂混合后免疫Balb/c小鼠，THR1S和THR1LS均能在体内本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种可广谱抑制人冠状病毒感染的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白含SARS
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CoV
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2的七螺旋重复域1；或，含SARS
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CoV
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2的七螺旋重复域1，且其区域中部分添加CH区域部分氨基酸序列和/或S2中stem helix区域的stem helix序列。2.按权利要求1所述的可广谱抑制人冠状病毒感染的重组蛋白，其特征在于，所述SARS
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CoV
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2的七螺旋重复域1为将三段HR1序列(TQNVLYENQKLIANQFNSAIGKIQDSLSSTASALGKLQDVVNQNAQALN TLVKQLSSNFGAISSVLNDILSRLDKVE)按正向
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反向
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正向的顺序使用连接臂(GKGNQ和GLIDG)进行连接。3.按权利要求2所述的可广谱抑制人冠状病毒感染的重组蛋白，其特征在于，所述正向HR1和反向HR1之间的连接臂为GKGNQ；反向HR1和正向HR1之间的连接臂为GLIDG；所述CH区域部分氨基酸序列为AEVQIDRLITGRLQ；所述S2中stem helix区域的stem helix序列为LDSFKEELDKYFKNHTSP。4.按权利要求1
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3任意一项所述的可广谱抑制人冠状病毒感染的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白为SARS
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【专利技术属性】
技术研发人员：王欣玲，陆路，姜世勃，吴凡，孙禄加，
申请(专利权)人：上海市重大传染病和生物安全研究院，
类型：发明
国别省市：