新型冠状病毒核衣壳蛋白的B细胞免疫优势表位肽及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种新型冠状病毒核衣壳蛋白的B细胞免疫优势表位肽及其制备方法和应用，属于冠状病毒检测技术领域。本发明专利技术采用间接ELISA法检测筛选新冠病毒核衣壳蛋白特异性IgG和IgM抗体阳性血清样本，并将新冠病毒核衣壳蛋白重叠合成得到68条短肽，再将68条短肽合成8个肽库，然后筛选得到新冠病毒核衣壳蛋白的IgG和IgM免疫优势肽库，最后再次筛选出序列如SEQ ID NO.66所示的免疫优势表位肽。该免疫优势表位肽不含不必要的部分，可用于血清学检测及疫苗的效果评估的补充，具有较大的疫苗应用价值以及制备表位疫苗的潜力。用价值以及制备表位疫苗的潜力。

【技术实现步骤摘要】
新型冠状病毒核衣壳蛋白的B细胞免疫优势表位肽及其制备方法和应用


[0001]本专利技术涉及冠状病毒检测
，特别涉及一种新型冠状病毒核衣壳蛋白的B细胞免疫优势表位肽及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]严重急性呼吸系统综合症冠状病毒2(Severe acute respiratory syndrome coronavirus 2,SARS
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CoV
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2)是一种新型病毒，属于冠状病毒家族。
[0003]通过对SARS
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2的不断研究，已开发出多种针对SARS
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2的疫苗，其中灭活病毒疫苗因其成本低、安全性高、保护效力良好而成为疫苗最佳选择之一，目前被批准使用的SARS
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2灭活病毒疫苗有11种。这些灭活病毒疫苗通过实验证明了可以在非人类灵长类动物(NHP)和人类及其它各种动物模型中引发强烈的抗体应答，并具有良好的保护效果，同时研究显示BBIBP
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CorV、CoronaVac和BBV152的保护效力分别为78.1％、83.5％和77.8％，其中BBIBP
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CorV的应用范围最广。
[0004]SARS
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2的基因组编码4种结构蛋白、16种非结构蛋白(NSP1
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16)以及9种辅助蛋白，其中结构蛋白包括刺突蛋白(Spikeprotein,S)、包膜蛋白(envelope protein,E)、膜蛋白(membrane protein,M)和核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,N)。核衣壳蛋白具有强的免疫原性并且在不同的β属冠状病毒及变异株之间具有高度的同源性。通过研究表明在完整两剂BBIBP
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CorV疫苗接种后核衣壳蛋白特异性抗体持续时间较刺突蛋白的受体结合位点(Receptor binding site，RBD)特异性抗体更为持久。研究发现核衣壳蛋白与病毒的感染性存在潜在关联，有研究者通过构建核衣壳蛋白R203K/G204R突变病毒，并分析其在细胞系、仓鼠和人类气道组织模型中的感染性变化，发现核衣壳蛋白R203K/G204R突变导致病毒复制增强，并最终增加病毒的感染性和适应性。另外，与刺突蛋白相比核衣壳蛋白具有极高的保守性，对广谱性疫苗或药物的研发具有重要意义。
[0005]B细胞表位是抗原刺激机体产生抗体应答的最小单位，全抗原引起的免疫应答主要来自免疫优势表位引起的应答，然而SARS
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2灭活疫苗接种后的表位和表位优势应答并不明确，因此无法揭示SARS
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2灭活疫苗接种后抗原特异性抗体在免疫保护或免疫损伤中的具体分子机制。近些年，疫苗免疫的表位研究热点主要集中在刺突蛋白，有研究者通过对BBIBP
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CorV接种人群多肽特异性IgG(Immunoglobulin G，免疫球蛋白G)应答分析筛选出了S蛋白特异性IgG应答的优势表位。而N蛋白表位应答特征研究的重要性常常被忽视，目前尚无疫苗接种后的核衣壳蛋白表位特异性抗体应答的相关研究。如果能得到一种核衣壳蛋白的B细胞免疫优势表位肽，则有利于研究SARS
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2的保护机制以及对SARS
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2的检测。

技术实现思路

[0006]本专利技术基于重叠多肽通过间接ELISA法筛选出一个核衣壳蛋白免疫优势线性B细
胞表位，以解决核衣壳蛋白表位较少的问题。
[0007]为了实现上述目的，本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种新型冠状病毒核衣壳蛋白B细胞免疫优势表位肽，其特征在于，所述B细胞免疫优势表位肽是如SEQ ID NO.66所示的IgG和IgM免疫优势表位肽。
[0009]具体地，所述免疫优势表位肽序列为TVTLLPAADLDDFSKQLQ。
[0010]一种新型冠状病毒核衣壳蛋白的B细胞免疫优势表位肽，其特征在于，所述B细胞免疫优势表位肽是如SEQ ID NO.64所示的IgG免疫亚优势表位肽。
[0011]具体地，所述IgG免疫亚优势表位肽为TQALPQRQKKQQTVTLLP。
[0012]在其中一个实施例中，一种鉴定所述新型冠状病毒核衣壳蛋白的B细胞免疫优势表位肽的方法，具体步骤包括：
[0013]步骤1：检测筛选新型冠状病毒核衣壳蛋白特异性IgG和IgM抗体阳性血清样本；
[0014]步骤2：通过步移法合成覆盖新型冠状病毒核衣壳蛋白全长的重叠18肽，得到68条短肽；
[0015]步骤3：根据相邻8
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9条肽合成1个肽库的原则，将步骤2的68条短肽合成8个肽库；
[0016]步骤4：利用步骤3的8个肽库结合核衣壳蛋白抗体阳性血清筛选出B细胞应答优势肽库，再将步骤1的阳性血清样本结合步骤3获得的优势肽库筛选得到新型冠状病毒核衣壳蛋白的IgG和IgM免疫优势区域，再通过计算覆盖IgG和IgM免疫优势区域的重叠18肽的优势频率从而得到IgG免疫优势核心区域；
[0017]步骤5：用步骤4筛选的阳性血清样本结合覆盖IgG和IgM免疫优势区域的重叠短肽筛选得到新型冠状病毒核衣壳蛋白的IgG和IgM免疫优势表位肽或IgG免疫亚优势表位肽。
[0018]在其中一个实施例中，所述步骤4中IgG和IgM免疫优势区域的氨基酸序列如SEQ ID NO.76所示。
[0019]具体地，所述免疫优势区域序列为KHIDAYKTFPPTEPKKDKKKKADETQALPQRQKKQQTVTLLPAADLDDFSKQLQQSMSSADSTQA。
[0020]在其中一个实施例中，所述步骤4中IgG免疫优势核心区域的氨基酸序列如SEQ ID NO.77所示。
[0021]具体地，所述IgG免疫优势核心区域序列为TQALPQRQKKQQTVTLLPAADLDDFSKQLQ。
[0022]在其中一个实施例中，所述步骤2中68条短肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.1
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SEQ ID NO.68所示。
[0023]在其中一个实施例中，所述步骤3中8个肽库的氨基酸序列如SEQ ID NO.69、SEQ ID NO.70、SEQ ID NO.71、SEQ ID NO.72、SEQ ID NO.73、SEQ ID NO.74、SEQ ID NO.75、SEQ ID NO.76所示。
[0024]所述一种新型冠状病毒核衣壳蛋白的B细胞免疫优势表位肽在制备新型冠状病毒疫苗或新型冠状病毒检测抗原中的应用。
[0025]本专利技术的有益效果如下：
[0026]本专利技术通过肽库和单个重叠短肽并结合间接ELISA法分析本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种新型冠状病毒核衣壳蛋白B细胞免疫优势表位肽，其特征在于，所述B细胞免疫优势表位肽是如SEQ ID NO.66所示的IgG和IgM免疫优势表位肽。2.一种新型冠状病毒核衣壳蛋白的B细胞免疫优势表位肽，其特征在于，所述B细胞免疫优势表位肽是如SEQ ID NO.64所示的IgG免疫亚优势表位肽。3.一种鉴定权利1或2所述新型冠状病毒核衣壳蛋白的B细胞免疫优势表位肽的方法，其特征在于，具体步骤包括：步骤1：检测筛选新型冠状病毒核衣壳蛋白特异性IgG和IgM抗体阳性血清样本；步骤2：通过步移法合成覆盖新型冠状病毒核衣壳蛋白全长的重叠18肽，得到68条短肽；步骤3：根据相邻8
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9条肽合成1个肽库的原则，将步骤2的68条短肽合成8个肽库；步骤4：利用步骤3的8个肽库结合核衣壳蛋白抗体阳性血清筛选出B细胞应答优势肽库，再将步骤1的阳性血清样本结合获得的优势肽库筛选得到新型冠状病毒核衣壳蛋白的IgG和IgM免疫优势区域，再通过计算覆盖IgG和IgM免疫优势区域的重叠18肽的优势频率从而得到IgG免疫优势核心区域；步骤5：用步骤4筛选的阳性血清样本结合覆盖IgG和IgM免疫优势区域的重叠短肽筛选得到新型冠状病毒核衣壳蛋白的IgG和Ig...

【专利技术属性】
技术研发人员：吴超，王秦晋，宁洁，翟爱霞，李滨，何涛君，陈盈，张芳，陈星池，叶开接，
申请(专利权)人：中山大学附属第八医院深圳福田，
类型：发明
国别省市：