新型冠状病毒T细胞表位肽及应用制造技术

本公开属于医学免疫学和生物学技术领域，具体涉及新型冠状病毒T细胞表位肽及应用。所述表位肽位于新型冠状病毒的ORF3a蛋白上，表位肽的氨基酸序列如SEQIDNO.10、SEQIDNO.12中的任一所示，本发明专利技术提供的表位肽可以被HLA

【技术实现步骤摘要】
新型冠状病毒T细胞表位肽及应用


[0001]本公开属于医学免疫学和生物学
，具体涉及新型冠状病毒T细胞表位肽及应用。

技术介绍

[0002]T细胞在控制病毒感染中起到核心作用，CD8+T细胞通常可以靶向各种新型冠状病毒抗原，并通过T细胞受体(TCR)的一系列组合识别各种病毒抗原表位，这些T细胞受体对病毒清除有重要意义，并且是长期免疫的关键。人类白细胞抗原(HLA)作为病毒抗原呈递途径的重要组成部分，在感染性疾病的发生和发展中起着至关重要的作用。病毒特异性CD8+T细胞识别HLA类肽复合物并诱导受感染细胞的凋亡以控制病毒感染。
[0003]随着病毒株发生突变，肽疫苗可以通过目标人群中的表位识别来快速定制以应对那些特定的突变株；肽疫苗可以根据需要快速响应SARS
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CoV
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2病毒的变化。

技术实现思路

[0004]根据本专利技术的一个方面，本专利技术提供了一种表位肽，所述表位肽的氨基酸序列选自以下组：
[0005](1)表位肽位于新型冠状病毒的ORF3a蛋白上，表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12中的任一所示；
[0006](2)表位肽位于新型冠状病毒的ORF3a蛋白上，表位肽的氨基酸序列是由如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12中的任一所示的序列经取代、缺失、插入和/或添加有1个或多个氨基酸序列形成的氨基酸序列。
[0007]在本专利技术的具体实施方案中，表位肽位于新型冠状病毒的ORF3a蛋白上，表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12中的任一所示。优选地，所述表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.10所示。
[0008]本专利技术的表位肽可利用以往的各种肽合成方法制备。例如可以使用固相肽合成法等有机化学的合成法、或制备编码肽的核酸、使用重组DNA技术进行制备。另外，也可利用市售的化学合成装置合成。
[0009]根据本专利技术的另一个方面，本专利技术提供了一种核酸，其编码前面所述的表位肽。
[0010]编码表位肽的核酸对于使用基因重组技术使宿主内产生表位肽是重要。因为氨基酸密码子在宿主间的密码子使用频率不同，因此优选变更氨基酸的密码子以使其适合产生宿主的密码子使用频率。编码表位肽的核酸就疫苗而言亦为重要，可以以裸露的核酸的形式移送，也可使用适当的病毒或细菌载体移送。适当的细菌载体为沙门氏菌属亚种的细菌。适当的病毒载体例如：反转录病毒载体、EBV载体、痘病毒载体、仙台病毒载体、慢病毒载体。
[0011]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种重组载体，其包含前面所述的核酸。
[0012]所述载体可特别选自pcDNA；pTT(Durocher等，Nucleic Acids Research2002，Vol 30，No.2)；pTT3(具有额外的多克隆位点的pTT)；pEFBOS(Mizushima，S.和Nagata，S.，
(1990)NucleicAcids ResearchVol 18，No.17)；pBV；pJV和pBJ。
[0013]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，其包含前面所述的核酸或导入了前面所述的重组载体。
[0014]用本文所披露的载体转化宿主细胞。优选地，宿主细胞为原核细胞。更优选地，宿主细胞为大肠杆菌(E.coli)。在一个相关实施方案中，宿主细胞为真核细胞。优选地，真核细胞选自原生生物细胞、动物细胞(如哺乳动物细胞、禽类细胞和昆虫细胞)、植物细胞和真菌细胞。更优选地，宿主细胞为哺乳动物细胞，包括但不限于CHO和COS；或为真菌细胞，如酵母细胞，例如酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)；或为昆虫细胞如Sf9。
[0015]可以通过本领域常规的方法将所述重组载体转化、转导或者转染到宿主细胞中，如氯化钙法化学转化、高压电击转化，优选电击转化。
[0016]可以使用本领域常用的方法从重组宿主细胞中分离和纯化本专利技术的表位肽。例如，离心分离培养基和重组宿主细胞，高压匀浆破碎细胞、离心过滤去除细胞碎片，亲和层析纯化表位肽。对于分离纯化所得的产物，可以使用本领域常用的方法进行纯度鉴定。例如，考马斯亮蓝法、凯氏定氮法、双缩脲法、lowry法、紫外吸收法、亲和层析、抗原抗体法、电泳分析(例如十二烷基磺酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)、沉降分析、扩散分析、恒溶度法、蛋白质谱等。
[0017]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了pMHC
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TCR复合物，包括：HLA分子、抗原肽和TCR分子组成，抗原肽包含前述的表位肽。
[0018]TCR与pMHC复合物之间有高亲和力是判断抗原肽的重要因素。目前常用MHC
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抗原肽复合物四聚体技术来增强了pMHC复合物与TCR之间的结合力。这种方法在检测特异性以及筛选上比传统酶联免疫斑点检测(ELISPOT)、单细胞PCR等方法具有优势，此外酵母表面展示技术、质谱流式标记技术以及DNA
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条形码标记技术等也是本领域常用的对pMHC
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TCR的特异性筛选技术。通过结合使用微流控技术、pMHC多聚体标记以及单细胞测序等多项方法可达到高通量pMHC
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TCR的筛选。
[0019]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种疫苗，其包含前面所述的表位肽作为有效成分。
[0020]本专利技术的表位肽在主动免疫疗法中可以作为肽疫苗使用。也就是说，将含有本专利技术的表位肽制备而成的疫苗对患者投予，使T细胞在体内增殖，对于感染的预防和治疗发挥效用。所使用的表位肽可只有1种，或可根据疫苗的使用目的而将2种以上的肽组合、混用。
[0021]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种疫苗，其包含前面所述的核酸作为有效成分。
[0022]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种疫苗，其包含前面所述的重组载体作为有效成分。
[0023]编码本专利技术的表位肽的核酸在主动免疫疗法可用于DNA疫苗、重组病毒载体疫苗等。编码表位肽的核酸序列优选变更为适合重组疫苗、产生重组病毒疫苗的宿主的密码子使用频率。
[0024]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种疫苗，其包含将前面所述的pMHC
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TCR复合物作为有效成分。
[0025]根据本专利技术的又一个方面，本专利技术提供了一种疫苗，其包含将前面所述的表位肽
呈递至HLA的抗原呈递细胞作为有效成分。
[0026]呈递本专利技术的T细胞表位肽的抗原呈递细胞可在主动免疫疗法中作为疫苗使用。呈递T细胞表位肽的抗原呈递细胞是指：
[0027](1)使抗原呈递细胞与表位肽在适当的培养液中混合30分钟至1小时而得到的表位肽脉冲抗原呈递细胞；
[0028](2)使用编码表位肽的核酸，通过基因导入等使抗原呈递细胞呈递表位肽的细胞；
[0029](3)具有人工制备的抗原呈递能力的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种表位肽，其特征在于，所述表位肽位于新型冠状病毒的ORF3a蛋白上，表位肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12中的任一所示。2.一种核酸，其编码权利要求1所述表位肽。3.一种重组载体，其包含权利要求2所述核酸。4.一种宿主细胞，其包含权利要求2所述核酸或导入了权利要求3所述重组载体。5.一种pMHC
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TCR复合物，包括：HLA分子、抗原肽和TCR分子组成，抗原肽包含权利要求1所述表位肽。6.一种疫苗，其包含以下任一项：(1)包含权利要求1所述表位肽作为有效成分；(2)包含权利要求2所述核酸作为有效成分；(3)包含权利要求3所述重组载体作为有效成分；(4)包含权利要求4所述pMHC
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TCR复合物作为有效成分；(5)包含将权利要求1所述表位肽呈递至HLA的抗原呈递细胞作为有效成分。7.一种针对新型冠状病毒的被动免疫疗法剂，其包含新型冠状病毒特异性T细胞，所述T细胞是利用权利要求1所述表位肽或将所述表位肽呈递至HLA的抗原呈递细胞刺激外周血淋巴细胞而得到。8.一种非诊疗目的的方法，所述方法包括以下任一项：(1)一种新型冠状病毒特异性T细胞的定量方法，其包含：用权利要求1所述表位肽刺激来自对象的外周血；获得通过前面步骤产生的新型冠状病毒特异性T细胞；测定获得T细胞所产生的细胞因子和/或趋化因子和/或细胞表面分子；(2)一种新型冠状病毒特...

【专利技术属性】
技术研发人员：李健，梅雪吟，林雪，
申请(专利权)人：东南大学，
类型：发明
国别省市：