新型冠状病毒抗原多肽及其重组腺相关病毒和制备疫苗的应用制造技术

本发明专利技术公开了SARS

【技术实现步骤摘要】
新型冠状病毒抗原多肽及其重组腺相关病毒和制备疫苗的应用


[0001]本专利技术涉及生物
，更具体地，涉及新型冠状病毒抗原多肽及其重组腺相关病毒和制备疫苗的应用。

技术介绍

[0002]新型冠状病毒(Severe Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2，SARS
‑
CoV
‑
2)隶属β
‑
冠状病毒属，是一种单链RNA病毒，基因组大小约为30kDa。SARS
‑
CoV
‑
2隐匿性和传染性很强，随着SARS
‑
CoV
‑
2在各国扩散，其自身不断发生变化或发生基因变异，新的病毒变异在死亡率、传播和逃避疫苗方面有所升高，使其更具破坏性。SARS
‑
CoV
‑
2变异的突变动态所造成的免疫逃逸对整个世界构成了不可预见的危险，因此，必须加快针对变异型毒株疫苗的开发。
[0003]现有技术中SARS
‑
CoV
‑
2疫苗基本对变异型毒株如Delta的效力都极大降低，中国专利公开了一种针对新冠病毒变异型毒株Delta的融合蛋白、喷鼻式疫苗及其制备方法，其融合蛋白为蛋白S、蛋白M和核衣壳蛋白N融合形成，但该疫苗需要包括其所用3种蛋白的编码基因，基因序列较长，表达的蛋白较为复杂，且疫苗效果单一。为了丰富应对SARS
‑
COV
‑
2变异型毒株Delta，且应对SARS
‑
COV
‑
2的变异，需要开发更多简单稳定且可对多种SARS
‑
COV
‑
2变异型毒株Delta和Omicron均有效的高传播性及位点突变的新型疫苗。

技术实现思路

[0004]本专利技术为了克服上述现有技术的不足，研发设计了SARS
‑
COV
‑
2新型抗原多肽，并提供了该抗原多肽的表达载体、抗原多肽重组腺相关病毒的制备方法，以及重组腺相关病毒在制备预防新冠病毒肺炎疫苗中的应用。
[0005]本专利技术的目的是提供SARS
‑
COV
‑
2病毒新型抗原多肽。
[0006]本专利技术再一目的是提供包含上述抗原多肽的重组腺相关病毒表达载体。
[0007]本专利技术再一目的是提供上述抗原多肽及其重组腺相关病毒在制备新冠肺炎疫苗中的应用。
[0008]本专利技术再一目的是提供一种SARS
‑
COV
‑
2病毒疫苗。
[0009]本专利技术再一目的是提供一种SARS
‑
COV
‑
2病毒疫苗的制备方法。
[0010]本专利技术为了实现上述目的，采用以下技术方案：
[0011]本专利技术提供一种SARS
‑
COV
‑
2抗原多肽，其氨基酸序列为以下氨基酸序列中的一种：
[0012](1)SEQ ID NO.1所示序列；
[0013](2)SEQ ID NO.2所示序列；
[0014](3)SEQ ID NO.3所示序列；
[0015](4)SEQ ID NO.4所示序列。
[0016]其中，SEQ ID NO.1为将SARS
‑
CoV
‑
2变异型毒株Delta的S蛋白的R
682
RAR
685
位点突变为G
682
SAS
685
，和K
986
V
987
位点突变为P
986
P
987
得到的第13
‑
1208氨基酸序列；
[0017]SEQ ID NO.2为将SARS
‑
CoV
‑
2变异型毒株Delta的S蛋白的K
986
V
987
位点突变为P
986
P
987
得到的第13
‑
1208氨基酸序列；
[0018]SEQ ID NO.3为将SARS
‑
CoV
‑
2变异型毒株Delta的S蛋白的R
682
RAR
685
位点突变为S
682
RAG
685
，和K
986
V
987
位点突变为P
986
P
987
得到的第13
‑
1208氨基酸序列；
[0019]SEQ ID NO.4为SARS
‑
CoV
‑
2变异型毒株Delta的基因序列的第319
‑
593的氨基酸序列，其为S蛋白的刺突蛋白受体RBD结构域。
[0020]本方案还请求保护编码上述抗原多肽的核苷酸序列。
[0021]进一步的，所述编码抗原多肽的核苷酸序列经过人源密码子优化；
[0022]本方案还请求保护包含上述抗原多肽的重组腺病毒表达载体。
[0023]进一步的，所述表达载体含有腺相关病毒反向末端重复序列、编码信号肽的核苷酸序列，以及编码上述抗原多肽的核苷酸序列。
[0024]优选的，所述腺相关病毒反向末端重复序列选自如下序列：SEQ ID NO.8
‑
10.
[0025]进一步的，所述的表达载体还含有必须的表达调控元件，如启动子序列、上游调节区域、编码区、转录调控元件、终止子等。
[0026]进一步的，上述信号肽为以下信号肽中的一种：
[0027](1)tPA信号肽：氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；
[0028](2)新型tPA信号肽：氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；
[0029](3)天然信号肽：氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。
[0030]tPA信号肽为人类组织型纤溶酶原激活物的信号肽；新型tPA信号肽为tPA信号肽第22位氨基酸由脯氨酸(P)突变为丙氨酸(tPA22P/A)；天然信号肽为新冠病毒S刺突蛋白的信号肽。
[0031]进一步的，所述的腺相关病毒反向末端重复序列来自血清型腺相关病毒2型。
[0032]本方案还请求保护上述抗原多肽、编码上述抗原多肽的核苷酸序列、包含上述抗原多肽的表达载体或上述重组腺相关病毒在制备预防新冠病毒肺炎疫苗中的应用。
[0033]优选的，所述新冠病毒肺炎由变异型毒株Delta和或变异型毒株Omicron引起的。
[0034]进一步的，所述的疫苗还包含药学上可接受的稀释剂和/或赋形剂。
[0035]本方案还请求保护以上述抗原多肽为抗原制备得到的SARS
‑
COV
...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.SARS
‑
COV
‑
2病毒抗原多肽，其特征在于，其氨基酸序列为以下氨基酸序列中的一种：(1)SEQ ID NO.1所示序列；(2)SEQ ID NO.2所示序列；(3)SEQ ID NO.3所示序列；(4)SEQ ID NO.4所示序列。2.编码权利要求1所述抗原多肽的核苷酸序列。3.一种重组腺相关病毒表达载体，其特征在于，含有权利要求2所述核苷酸序列。4.根据权利要求3所述的重组腺相关病毒表达载体，其特征在于，含有腺相关病毒反向末端重复序列、编码信号肽的核苷酸序列，以及编码权利要求1所述抗原多肽的核苷酸序列。5.根据权利要求4所述的重组腺相关病毒表达载体，其特征在于，所述信号肽为以下中的一种：(1)tPA信号肽：氨基酸序列如SEQ ID NO.5所示；(2)新型tPA信号肽：氨基酸序列如SEQ ID NO.6所示；(3)天然信号肽：氨基酸序列如SEQ ID NO.7所示。6.权利要求1所述抗原多肽、权利要求2所述DNA分子、权利要求3
‑
5任一所述表达载体...

【专利技术属性】
技术研发人员：李展如，
申请(专利权)人：广州国家实验室，
类型：发明
国别省市：