ROR2突变体及其应用制造技术

本发明专利技术涉及基因技术领域，尤其涉及ROR2的突变体及其应用。核酸，与序列为SEQ ID NO：1的野生型ROR2基因相比，具有c.2257delT突变。多肽，与序列为SEQ ID NO：2的野生型ROR2蛋白多肽相比，多肽具有p.Ser753ProfsTer21突变。检测核酸和/或多肽的试剂在制备试剂盒或设备中应用，试剂盒或设备用于筛查或诊断先天性短指/趾。特异性改变核酸的试剂在制备药物中的用途，药物用于治疗先天性短指/趾；核酸与野生型ROR2基因相比，具有c.2257delT突变。本发明专利技术为现有的基因领域提供了新的突变型基因，并进一步研究确认了该突变基因的在先天性短指/趾中新用途。中新用途。中新用途。

【技术实现步骤摘要】
ROR2突变体及其应用


[0001]本专利技术属于生物
，尤其涉及ROR2突变体及其应用。

技术介绍

[0002]先天性短指/趾(brachydactyly，BD)畸形是指(趾)骨和(或)掌(跖)骨发育不良导致指(趾)短小、缺失或融合，是一种家族遗传性疾病。短指(趾)畸形也可伴有其他手/足部畸形，如并指(趾)畸形、多指(趾)畸形、缩小畸形。与所有先天性畸形一样，短指畸形可以单独出现或作为复杂畸形综合征的一部分出现。短指畸形可分为5种类型(A～E型)，相同类型的短指表型差异可能很大。B型短指畸形(brachydactyly type B,BDB)是短指畸形中最严重的一种，可分为B1(MIM 113000)和B2(MIM 611377)2个亚型。B1型短指畸形(brachydactyly type B1,BDB1)主要临床特征包括食指到小指末梢发育不全，伴有指甲部分或完全缺失，拇指受累少，偶可见拇指/趾宽大畸形，脚也受到类似影响，但程度较轻，严重程度因人而异。
[0003]ROR2基因(OMIM 602337)编码受体酪氨酸激酶样孤儿受体2，致病性突变可导致常染色体隐性遗传Robinow综合征(OMIM 268310)或常染色体显性遗传B1型短指/趾畸型(BDB1，OMIM 113000)。PubMed数据库文献报道，目前发现的BDB1致病突变多位于ROR2的8、9号外显子上，且多为无义突变或移码突变，导致ROR2蛋白胞内区TK附近的结构域缺失。BDB1主要临床特征包括：食指到小指末梢发育不全，伴有指甲部分或完全缺失，拇指受累少，偶可见拇指/趾宽大畸形，脚也受到类似影响，但程度较轻，严重程度因人而异。
[0004]目前对于先天性短指/趾的研究还有待进一步补充完善，尤其是引起先天性短指/趾的ROR2基因突变还有很多未被发现。因此，研究人员通过对不同病例的情况进行研究，发现一些新的突变位点，并未研究这些位点的致病性，同时也在相应突变位点的基础上研究疾病的可治性。

技术实现思路

[0005]针对上述问题，本专利技术提供ROR2突变体及其应用，主要为了填补部分对ROR2基因研究的空白，同时对ROR2基因突变体的致病性尚不明确等问题。
[0006]为了解决上述问题，本专利技术采用如下技术方案：
[0007]本专利技术第一方面涉及核酸，包括含下列目标片段，
[0008]所述目标片段与序列为SEQ ID NO：1的野生型ROR2基因相比，具有c.2257delT突变。
[0009]在前述基础上，所述核酸的类型包括DNA、RNA或cDNA，核酸的类型不做具体的限定，只要其与野生型ROR2基因相比具有特定的突变，则应当认定其为本条范围内的核酸。
[0010]本专利技术第二方面涉及多肽，与序列为SEQ ID NO：2的野生型ROR2相比，所述多肽具有p.Ser753ProfsTer21突变。
[0011]本专利技术第三方面涉及生物模型在筛选药物中的应用，其特征在于，所述生物模型
至少携带下列之一：
[0012]a.核酸，与序列为SEQ ID NO：1的野生型ROR2基因相比，具有c.2257delT突变，
[0013]b.多肽，与序列为SEQ ID NO：2的野生型ROR2相比，所述多肽具有p.Ser753ProfsTer21突变。
[0014]所述生物模型一种形式为细胞模型。该细胞模型的一种应用方式为进行规模化的药物筛选，可以通过药物对细胞模型进行作用，验证该药物是否具有抑制相应突变的作用，并可据此进一步验证该药物是否可以通过抑制突变实现治疗相应的疾病，比如通过该细胞模型即可实现模拟先天性短指/趾的疾病环境、然后进一步通过该模型实现体外验证部分药物的作用。在本条中，主要考虑的筛选因素是针对相应的突变，暂不具体限定药物的具体治疗对象，该种应用方式主要在药物研发过程中进行使用。其中，所述药物为治疗先天性短指/趾的药物；先天性短指/趾主要是由前述突变导致。更具体的，所述药物为治疗先天性短指/趾B1型的药物。由此，通过本生物模型实现了对一些作用效果未知的物质进行筛查，方便进一步研究该物质是否具有用于治疗先天性短指/趾的预期。
[0015]本专利技术第四方面涉及检测核酸和/或多肽的试剂在制备试剂盒或设备中应用，所述试剂盒或设备用于筛查或诊断先天性短指/趾；其中，
[0016]所述核酸与野生型ROR2基因相比，具有c.2257delT突变；所述多肽与野生型ROR2蛋白相比，具有p.Ser753ProfsTer21突变。筛查先天性短指/趾主要是患病风险排查，便于提前干预；诊断则是对于已经患病的人员进行辅助诊断，当然是否已经患病是以患者机体实际变化为准，不以人的主观认知干预。
[0017]所述试剂包括特异性针对所述核酸和所述多肽的至少之一的抗体、探针、引物以及质谱检测试剂的至少之一。具体为试剂包括特异性检测核酸的产品，还包括特异性检测多肽的产品，该产品至少可为抗体、探针、引物以及质谱检测试剂中任一，同时还可为其他具有相似功能的试剂。另外，试剂盒的形式可为一些与现有产品类似的试剂盒，设备则可为一些序列检测设备。引物和探针均可选择其中任一，也可根据需要进行组合使用。
[0018]更为具体的，所述引物包括序列如下的引物对：
[0019]正向引物：5'TGATCGAGTGCTGGAACGAG3'，
[0020]反向引物：5'CTCCTCCTCCTCTGCTTCCT3'；
[0021]所述探针为GGGCAACCTTTCCAACTACAA；
[0022]优选的，所述先天性短指/趾为先天性短指/趾B1型。制备所得的相应检测产品不仅可以用于筛查和诊断先天性短指/趾，同时可以更为精准的筛查易感先天性短指/趾B1型人群，还可对先天性短指/趾B1型患者进行诊断，相应的探针、引物都具有较高的检测精度和准确性，同时前述探针、引物在进行相应检测过程中具有更好的效果。
[0023]本专利技术第五方面涉及筛选先天性短指/趾生物样品的试剂盒，包含有能检测ROR2基因突变体的试剂；
[0024]与序列为SEQ ID NO：1的野生型ROR2基因相比，所述ROR2基因突变体具有c.2257delT突变，或与序列为SEQ ID NO：2的野生型ROR2相比，所述ROR2基因突变体具有具有p.Ser753ProfsTer21突变。在该种情况下，只要相应的产品应用到了能够检测前述两种ROR2突变体中任一的试剂时，均应当视为应用了本专利技术的技术。
[0025]所述试剂为核酸探针或引物。所述引物包括序列如下的引物对：
[0026]正向引物：5'TGATCGAGTGCTGGAACGAG3'，
[0027]反向引物：5'CTCCTCCTCCTCTGCTTCCT3'；
[0028]所述探针为GGGCAACCTTTCCAACTACAA；
[0029]优选的，先天性短指/趾生物样品为先天性短指/趾B1型样品；该种样品的主要来源为疑似患者，比如本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.核酸，其特征在于，包括含下列目标片段，所述目标片段与序列为SEQ ID NO：1的野生型ROR2基因相比，具有c.2257delT突变；优选的，所述核酸的类型包括DNA、RNA、cDNA。2.多肽，其特征在于，与序列为SEQ ID NO：2的野生型ROR2相比，所述多肽具有p.Ser753ProfsTer21突变。3.生物模型在筛选药物中的应用，其特征在于，所述生物模型至少携带下列之一：a.权利要求1所述的核酸，b.权利要求2所述的多肽；优选的，所述药物为治疗先天性短指/趾的药物；所述生物模型为细胞模型；更优选的，所述药物为先天性短指/趾B1型的药物。4.检测核酸和/或多肽的试剂在制备试剂盒或设备中应用，所述试剂盒或设备用于筛查或诊断先天性短指/趾；其中，所述核酸与野生型ROR2基因相比，具有c.2257delT突变，所述多肽与野生型ROR2蛋白相比，具有p.Ser753ProfsTer21突变。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述试剂包括特异性针对所述核酸和所述多肽的至少之一的抗体、探针、引物以及质谱检测试剂的至少之一；优选的，所述引物包括序列如下的引物对：正向引物：5'TGATCGAGTGCTGGAACGAG3'反向引物：5'CTCCTCCTCCTCTGCTTCCT3'，所述探针为GGGCAACCTTTCCAACTACAA；优选的，所述先天性短指/趾为先天性...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜楠，刘慧，李加山，
申请(专利权)人：青岛市妇女儿童医院青岛市妇幼保健院，青岛市残疾儿童医疗康复中心，青岛市新生儿疾病筛查中心，
类型：发明
国别省市：