一种检测土拨鼠肝炎病毒转录后增强元件WPRE的RNA探针及其制备方法与应用技术

本发明专利技术公开了一种检测土拨鼠肝炎病毒转录后增强元件WPRE的RNA探针及其制备方法与应用，属于核酸杂交技术领域，该探针的序列如文中SEQ ID NO.1所示，制备过程包括设计引物、PCR扩增、产物纯化、构建重组质粒、体外转录的过程；本发明专利技术能够特异、敏感、快速、简便地从组织样本中对WPRE的RNA进行检测，可以清晰地可视化检测和定位WPRE的RNA，从而能够在RNA水平上对WPRE基因的转录以及翻译规律进行阐述，该探针适用于检测目前的大部分重组腺相关病毒以及慢病毒等病毒中携带的WPRE元件，能够定性以及半定量检测WPRE在组织中的分布和表达量，在基因编辑和基因治疗领域具有广泛的应用前景。景。景。

【技术实现步骤摘要】
一种检测土拨鼠肝炎病毒转录后增强元件WPRE的RNA探针及其制备方法与应用


[0001]本专利技术涉及核酸杂交
，尤其是涉及一种检测土拨鼠肝炎病毒转录后增强元件WPRE的RNA探针及其制备方法与应用。

技术介绍

[0002]WPRE(wood chuck hepat it i s vi rus post
‑
transcr ipt iona lregu l atory e l ement)即土拨鼠肝炎病毒转录后调控元件，属于顺式作用RNA元件。WPRE一般位于多聚腺苷酸化信号之前,可显著增加mRNA的表达水平和翻译效率，进而增强基因的表达，也可用来增强病毒的包装滴度。因此WPRE被广泛应用于慢病毒，重组腺相关病毒以及逆转录病毒等病毒载体的构建中。
[0003]重组腺相关病毒(rAAVs)具有毒性低、长期稳定的转基因表达和宿主免疫应答低等重要特性，被广泛用于神经科学研究领域以及神经系统疾病的治疗研究中。许多基因缺陷性脑疾病的治疗需要向整个大脑中的每个细胞补偿正确的基因，如何快速定量检测经重组腺相关病毒递送的转基因的表本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测土拨鼠肝炎病毒转录后增强元件WPRE的RNA探针，其特征在于：具有SEQ ID NO.1所示的碱基序列结构：cctctggattacaaaatttgtgaaagattgactggtattcttaactatgttgctccttttacgctatgtggatacgctgctttaatgcctttgtatcatgctattgcttcccgtatggctttcattttctcctccttgtataaatcctggttgctgtctctttatgaggagttgtggcccgttgtcaggcaacgtggcgtggtgtgcactgtgtttgctgacgcaacccccactggttggggcattgccaccacctgtcagctcctttccgggactttcgctttccccctccctattgccacggcggaactcatcgccgcctgccttgcccgctgctggacaggggctcggctgttgggcactgacaattccgtggtgttgtcggggaaatcatcgtcctttccttggctgctcgcctAtgttgccacctggattctgcgcgggacgtccttctgctacgtcccttcggccctcaatccagcggaccttccttcccgcggcctgctgccggctctgcggcctcttccgcgtcttcgccttcgccctcagacgagtcggatctccctttgggccg。2.根据权利要求1所述的RNA探针，其特征在于：所述RNA探针的长度不小于574nt。3.一种如权利要求1所述的RNA探针的制备方法，其特征在于：包括如下步骤：Sp1：设计引物：根据WPRE的碱基序列设计引物，得到正义链引物和反义链引物，其中，正义链引物和反义链引物的序列如下：正义链：cctctggattacaaaatttgtg，反义链：gcccaaagggagatccgac；Sp2：在上述正义链和反义链两端分别加上限制性内切酶XbaI和HindIII序列，所述限制性内切酶XbaI和HindIII序...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜舒，来香茹，江颖纯，梁佳莹，罗玉珠，徐玲，
申请(专利权)人：深圳市恩辑生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：