一种噬菌体辅助的连续定向进化系统及进化方法技术方案

本发明专利技术涉及基因工程技术领域，具体涉及一种噬菌体辅助的连续定向进化系统及进化方法。该连续定向进化系统包括AP1质粒、AP2质粒、诱变质粒MP和噬菌体，AP1质粒、AP2质粒、诱变质粒MP的核酸序列分别如SEQ IDNO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；AP1质粒携带gVI基因；噬菌体为目的基因替换gVI基因的噬菌体。定向进化方法为将AP1质粒、AP2质粒和诱变质粒MP共转化宿主菌，得到进化用工程菌；将噬菌体和进化用工程菌在含有纤维寡糖的培养基中经过多轮进化培养，在多轮进化培养过程中递减纤维寡糖在培养基中的浓度，以提高筛选压力，实现定向进化。本发明专利技术利用噬菌体gVI基因来构建进化体系，PVI不会赋予宿主噬菌体抗性，具有更高的进化效率和灵敏度。效率和灵敏度。效率和灵敏度。

【技术实现步骤摘要】
一种噬菌体辅助的连续定向进化系统及进化方法


[0001]本专利技术涉及基因工程
，具体涉及一种噬菌体辅助的连续定向进化系统及进化方法。

技术介绍

[0002]在基因组中，大约有30％的基因产物是膜蛋白，这个比例显示膜蛋白在生物体中的重要性。膜蛋白主要包括信号受体、转运蛋白、离子通道蛋白及一些酶类，对细胞代谢、生理平衡、包内调节至关重要。在药物研发设计过程中，很多膜蛋白是药物设计的靶点，然而膜蛋白结构及生化信息的匮乏制约了药物设计的发展，由于膜蛋白的不稳定性及不溶性导致科研人员很难获得高纯度的膜蛋白进行其三维结构的解析及研究。定向进化是一种蛋白、核酸序列进化的一种方法，具有效率高、特异性高的特点；可以使用生物进化的过程产生具有特定功能的生物分子，所生产的生物分子广泛运用于生物工程、医药工程、工业生产等领域。针对膜蛋白的这些特性，定向进化或许可作为强有力的工具帮助科研人员理解膜蛋白结构及其生物功能的关系。
[0003]连续定向进化旨在无人为干预的情况下完成基因突变、蛋白表达、表型选择与筛选的迭代实验。连续定向进化通过缩短每轮的进化时间本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种噬菌体辅助的连续定向进化系统，其特征在于，包括AP1质粒、AP2质粒、诱变质粒MP和噬菌体，所述AP1质粒、AP2质粒、诱变质粒MP的核酸序列分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示；所述AP1质粒携带gVI基因；所述噬菌体为目的基因替换gVI基因的噬菌体。2.根据权利要求1所述的噬菌体辅助的连续定向进化系统，其特征在于，所述目的基因包括膜蛋白基因。3.根据权利要求1所述的噬菌体辅助的连续定向进化系统，其特征在于，所述目的基因替换gVI基因的噬菌体为SPVI
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lacY，是SPVI携带拟进化的目的基因lacY，其替代噬菌体基因组上gVI的位置形成，核酸序列如SEQ ID NO.5所示。4.根据权利要求1所述的噬菌体辅助的连续定向进化系统，其特征在于，所述AP1质粒由pPSP启动子启动，pPSP启动子与RBS之间有功能蛋白CelR的识别位点如SEQ ID NO.6所示，在胞内没有纤维寡糖的情况下，gVI表达处于抑制状态。5.根据权利要求1所述的噬菌体辅助的连续定向进化系统，其特征在于，所述AP2质粒携带CelR蛋白基因和启动子pPSP的调控蛋白基因。6.根据权利要求1所述的噬菌体辅助的连续定向进化系统，其特征在于，所述诱变质粒MP由pPSP启动子启动。7.采用权利要求1～6任意一项所述的噬菌体...

【专利技术属性】
技术研发人员：李小明，崔金明，刘陈立，
申请(专利权)人：广州先进技术研究所，
类型：发明
国别省市：