一种BMP2的应用及其慢病毒构建方法技术

本发明专利技术提供了一种BMP2的应用及其慢病毒构建方法，属于生物化学技术领域，具体为BMP2在制备促进肌细胞转分化为脂肪细胞的试剂中的应用，其解决了现目前BMP2在促进肌细胞转分化为脂肪细胞过程尚不明确的技术问题。化为脂肪细胞过程尚不明确的技术问题。

【技术实现步骤摘要】
一种BMP2的应用及其慢病毒构建方法


[0001]本专利技术属于生物化学
，具体公开了一种BMP2在制备促进肌细胞转分化为脂肪细胞的试剂中的应用。

技术介绍

[0002]肌肉和脂肪组织是人和动物体内重要的两大器官，特别是它们的生长与发育都受到多种因素的影响，并对体内的能量代谢和平衡有着重要的调控作用。肌肉和脂肪的发育失调会导致人和动物的诸多能量代谢相关疾病，如肌肉萎缩、肥胖症、糖尿病等。肌肉和脂肪之间有着密不可分的联系。研究发现肌细胞会在特殊生理条件或者受到外源刺激(药物、细胞因子等)的情况下失去生肌能力而转分化为具有脂肪生成和储存能力的脂肪细胞或脂肪细胞样细胞。而脂肪前体细胞或者脂肪干细胞也能转分化为肌细胞。
[0003]骨形态发生蛋白
‑
2(BMP
‑
2)是一种参与生物机体机能发生和调节的分泌蛋白，与细胞增殖和分化、细胞凋亡、形态发生、癌症等多个生物学过程相关。BMP2作为BMP家族成员之一，有研究显示其可以促进3T3
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L1细胞分化为成熟的脂肪细胞。而Schnurri 2基因作为BMP2的下游分子，当其在小鼠体内缺失时，则会导致小鼠白色脂肪细胞减少。这些研究表明BMP2是脂肪细胞分化的一个关键转录因子。然而肌细胞的生脂是一个明显不同的分化代谢过程，在这个过程中BMP2的表达变化和功能发挥扮演怎样的角色还不清楚，有待深入研究。此外，探索肌细胞的生脂调控机制也将有助于我们更好地理解肌肉与脂肪组织发育过程和有利于肌肉与脂肪代谢相关疾病的治疗。
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技术实现思路

[0004]本专利技术的第一目的在于提供一种BMP2在制备促进肌细胞转分化为脂肪细胞的试剂中的应用，其解决了现目前BMP2在促进肌细胞转分化为脂肪细胞过程尚不明确的技术问题。
[0005]本专利技术的第二目的在于提供一种促进肌细胞转分化为脂肪细胞的试剂，其能够使肌细胞转分化为脂肪细胞的过程更加稳定。
[0006]本专利技术的第三目的在于提供一种含有BMP2的慢病毒构建方法，以方便对其他细胞进行侵染，从而得到促进成肌细胞的成脂分化的分子标记物BMP2。
[0007]本专利技术是通过如下技术方案实现的：
[0008]首先，本专利技术提供了一种BMP2在制备促进肌细胞转分化为脂肪细胞的试剂中的应用。
[0009]其次，本专利技术还提供了一种促进肌细胞转分化为脂肪细胞的试剂，包括上述的BMP2。
[0010]通过提供了具体的试剂产品，从而使BMP2在促进肌细胞转分化为脂肪细胞的实际应用中能够更加便利和稳定的进行调控这一转化过程。
[0011]进一步地，上述试剂包括如下原料：8
×
107‑2×
108TU/mL含有BMP2的慢病毒、终浓
度为0.8
‑
1.2μmol/L的地塞米松、终浓度为4
‑
6μg/mL的胰岛素、终浓度为0.5
‑
1.5％wt的青霉素
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链霉素混合液和终浓度为0.4
‑
0.6mmol/L的3
‑
异丁基
‑1‑
甲基黄嘌呤。
[0012]本试剂通过加入双抗以避免试剂在使用过程中被其他杂菌污染，并通过加入胰岛素以诱导目的细胞摄取糖分，从而提高目的细胞的代谢效率，进而提高肌细胞转分化为脂肪细胞的速率，而通过加入地塞米松为脂肪细胞的形成提供有利环境，通过加入3
‑
异丁基
‑1‑
甲基黄嘌呤以进一步提高BMP2诱导肌细胞转分化为脂肪细胞的效果。
[0013]进一步地，上述试剂包括如下原料：8
×
107‑2×
108TU/mL含有BMP2的慢病毒、终浓度为4
‑
6μg/mL的胰岛素、终浓度为0.5
‑
1.5％wt的青霉素
‑
链霉素混合液和终浓度为8
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12μM的罗格列酮。
[0014]本试剂通过加入双抗以避免试剂在使用过程中被其他杂菌污染，并通过加入胰岛素以诱导目的细胞摄取糖分，从而提高目的细胞的代谢效率，进而提高肌细胞转分化为脂肪细胞的速率，而通过加入罗格列酮能够提高肌细胞对葡萄糖的利用，从而提高肌细胞转分化为脂肪细胞的速率。
[0015]另外，本专利技术还提供了上述试剂的制备方法，包括如下步骤：将含BMP2的慢病毒接种到DMEM/F12培养基内，将各原料加入培养基内培养2
‑
4d，即得到试剂。其中上述两种试剂可以分别使用，以促进目的细胞进行分化，也可以共同使用(共同使用时，按照先后顺序进行使用，如当目的细胞接种在含地塞米松的试剂内培养后2
‑
3d后，再更换其中的原料，换为含罗格列酮的试剂中的原料进一步培养2
‑
3d，即完成培养)，从而进一步提高目的细胞的分化速度。
[0016]通过DMEM/F12培养基能够为目的细胞提供必要的生长和代谢环境，从而为肌细胞转分化为脂肪细胞提供必要的转分化场所和条件，具体使用方法为将待转分化细胞添加到试剂中培养2
‑
4d，即可完成转分化。
[0017]最后，本专利技术还提供了一种包括上述BMP2的慢病毒构建方法，包括如下步骤：将293T细胞接种于DMEM培养基后传代培养，得到传代细胞，将传代细胞与含BMP2序列的穿梭质粒、包装质粒和RNAi
‑
Mate混合并于培养箱培育4
‑
6h后离心收集得到上清液，将上清液过滤后浓缩即得到BMP2慢病毒。
[0018]通过构建慢病毒以对目的细胞进行侵染，从而从目的细胞中提取得到促进成肌细胞的成脂分化的分子标记物BMP2，上述所使用的BMP2序列为鼠源BMP2序列，其中鼠源BMP2的序列如SEQ ID NO.1所示。
[0019]与现有技术相比，本专利技术至少具有如下的优点与积极效果：
[0020]本专利技术提供了一种BMP2的应用及其慢病毒构建方法，解决了现目前BMP2在促进肌细胞转分化为脂肪细胞过程尚不明确的技术问题，并通过试剂的形式更加稳定和便捷的使BMP2促进肌细胞转分化为脂肪细胞；而该慢病毒构建方法则有利于后期从目的细胞中提取BMP2，以将其具体应用于试剂中。
附图说明
[0021]为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本专利技术的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这
些附图获得其他相关的附图。
[0022]图1为本专利技术中含鼠源BMP2的序列的穿梭质粒和包装质粒的示意图；
[0023]图2为本专利技术试验例1中电镜下细胞结构示意图及电泳图；
[0024]图3为本专利技术试验例2中转染慢病毒过表达载体、正常诱导和转染siRNA肌细胞的油红O和BODIPY染色图；
[0025]图4本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.BMP2在制备促进肌细胞转分化为脂肪细胞的试剂中的应用。2.一种含有如权利要求1所述的BMP2的慢病毒构建方法，其特征在于，包括如下步骤：将293T细胞接种于DMEM培养基后传代培养，得到传代细胞，将所述传代细胞与含BMP2序列的穿梭质粒、包装质粒和RNAi
‑
Mate混合并于培养箱培育4
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6h后离心收集得到上清液，将所述上清液过滤后浓缩即得到含有BMP2的慢病毒。3.一种促进肌细胞转分化为脂肪细胞的试剂，其特征在于，包括如权利要求2所述的含有BMP2的慢病毒。4.根据权利要求3所述的试剂，其特征在于，包括如下原料：8
×
107‑2×
108TU/mL所述含有BMP2的慢病毒、终浓度为0.8
‑
1.2μmol/L的地塞米松、终浓度为4
‑
6μ...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱小宇，齐仁立，杨飞云，王琪，王敬，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：