一种鹅GnIH受体RFRPR高效可溶性原核表达体系构建的方法技术

本发明专利技术公开了一种鹅GnIH受体RFRPR高效可溶性原核表达体系构建的方法，涉及分子生物学领域，本发明专利技术的技术方案包括如下：设计RFRPR引物并利用RFRPR引物对cDNA模板进行PCR扩增和产物纯化；构建、筛选与鉴定RFRPR基因原核表达质粒；重组RFRPR蛋白的诱导表达、纯化及WB鉴定。成功将鹅RFRPR基因CDS区克隆到原核表达载体PET28a(+)中，优化表达条件获得了RFRPR可溶性的表达产物，其浓度达到30mg/L，且融合蛋白保留了蛋白的7跨膜完整结构，具有一定的生物活性，该表达系统为后续研究RFRPR的生理功能、制备多克隆抗体、筛选高亲和性多肽和GnIH受体类似物药物等奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及分子生物学领域，特别是涉及一种鹅gnih受体rfrpr高效可溶性原核表达体系构建的方法。

技术介绍

1、促性腺激素抑制激素(gonadotropin inhibitory hormone,gnih)是2000年在鸟类首先发现的一种下丘脑神经肽，gnih及其受体在脑和多种器官分布，广泛参与繁殖调控、性行为、摄食和体重等多种生理活动。gnih受体有rfrpr和npffr两种，都属于g蛋白偶联受体家族成员，具有典型的7个跨膜结构域特征。前人研究表明：在鸟类，gnih与rfrpr亲和力是其与npffr的100倍以上，是gnih的主要受体。

2、目前，pet系统已成为在大肠杆菌(escherichia coli)中蛋白表达的首选，其中pet28a(+)含有很强的噬菌体t7启动子和t7终止子，带有kan抗性基因，自带his·tag标签的基因序列，是目前利用大肠杆菌表达外源基因的最理想的原核表达载体之一，而蛋白酶缺陷型bl21(de3)菌降低了重组产物表达后被细胞降解或剪切的概率，提高了表达目的蛋白的稳定性，表达效率高。p>

3、gnr本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种鹅GnIH受体RFRPR高效可溶性原核表达体系构建的方法，其特征在于，原核表达载体系统通过基因克隆，将外源目的基因克隆到原核表达载体，并将载体转化到表达工程菌株中，进行外源目的基因的表达。

2.根据权利要求1所述一种鹅GnIH受体RFRPR高效可溶性原核表达体系构建的方法，其特征在于：原核表达系统使用的表达载体为PET28a(+)，表达工程菌株为BL21(DE3)菌。

3.根据权利要求1所述一种鹅GnIH受体RFRPR高效可溶性原核表达体系构建的方法，其特征在于：包括步骤如下：RFRPR产物通过双酶切克隆到PET28a(+)载体，构建PET28a(+)-R...

【技术特征摘要】

1.一种鹅gnih受体rfrpr高效可溶性原核表达体系构建的方法，其特征在于，原核表达载体系统通过基因克隆，将外源目的基因克隆到原核表达载体，并将载体转化到表达工程菌株中，进行外源目的基因的表达。

2.根据权利要求1所述一种鹅gnih受体rfrpr高效可溶性原核表达体系构建的方法，其特征在于：原核表达系统使用的表达载体为pet28a(+)，表达工程菌株为bl21(de3)菌。

3.根据权利要求1所述一种鹅gnih受体rfrpr高效可溶性原核表达体系构建的方法，其特征在于：包括步骤如下：rfrpr产物通过双酶切克隆到pet28a(+)载体，构建pet28a(+)-rfrpr穿梭质粒，重组质粒转化bl21(de3)工程菌，iptg诱导目的基因表达，镍柱亲和层析法收集蛋白，利用his标签蛋白作wb鉴定。

4.根据权利要求1所述一种鹅gnih受体rfrpr高效可溶性原核表达体系构建的方法，其特征在于：克隆的目的基因为鹅的rfrp...

【专利技术属性】
技术研发人员：张克山，高广亮，钟航，周莉，王珍，陈主平，王郁石，
申请(专利权)人：重庆市畜牧科学院，
类型：发明
国别省市：