一种骨软骨类器官自组装方法及应用技术

本发明专利技术涉及生物材料领域，具体涉及一种骨软骨类器官自组装方法及应用。本发明专利技术提供一种基于普通微载体进行个性化改造的策略，利用透明质酸诱导干细胞成软骨分化的特性，以及羟基磷灰石诱导干细胞成骨分化的特性，制备出具有更强成软骨和成骨诱导分化能力的微载体。软骨微载体和骨微载体具有良好的生物相容性，能够促进细胞增殖和粘附，与普通微载体相比，双向自组装微载体具有更强的成软骨和成骨诱导分化能力，本发明专利技术所得微载体在骨软骨损伤修复领域将发挥重要作用和广阔的应用前景。域将发挥重要作用和广阔的应用前景。域将发挥重要作用和广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】
一种骨软骨类器官自组装方法及应用


[0001]本专利技术涉及生物材料领域，具体涉及一种用于骨软骨类器官自组装方法及应用。

技术介绍

[0002]三维多孔细胞培养载体能够模拟三维细胞生长环境，有利于保留细胞的生理特性；三维多孔结构能够为细胞的粘附、增殖生长提供巨大的空间，而且能够更好地模拟细胞在体内的微环境，并且能够具有大量扩增细胞的潜力。专利《多孔微冰胶细胞三维培养载体及其制备方法和制备系统》(申请公布号CN106978384A)和《多孔微冰胶细胞三维培养载体的制备系统》(授权公告号CN207405148U)所涉及到多孔微载体，该微载体孔隙率较大，能够在较高水平上维持细胞活性，促进细胞功能，同时还具有较强的机械弹性，能够很好的保护所培养的细胞免受生物反应器内较强机械剪切力的损伤，提高其存活率。
[0003]关节软骨由于无血液供应、神经支配和淋巴循环的特殊结构，导致其损伤后难以自我修复。关节软骨损伤往往伴随着软骨下骨损伤，由于二者微环境的不同，导致其再生难度较大。因此，再生修复材料除了良好的生物相容性及可注射性等优势以外，还需要具备更强的本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种骨软骨类器官自组装方法，其特征在于，所述方法包括：(1)将软骨微载体与干细胞置于成软骨分化培养基中进行预分化共培养，获得软骨微载体
‑
预分化软骨细胞；(2)将骨微载体与干细胞置于成骨分化培养基中进行预分化共培养，获得骨微载体
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预分化成骨细胞；(3)将所述软骨微载体
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预分化软骨细胞与所述骨微载体
‑
预分化成骨细胞接触，置于混合培养基中进行混合共培养，以便获得自组装后的骨软骨类器官，其中，所述软骨微载体中含有透明质酸；所述骨微载体中含有羟基磷灰石；所述混合培养基中含有成软骨分化培养基和成骨分化培养基。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述干细胞源自成体干细胞；任选地，所述干细胞源自人源成体干细胞，所述人源成体干细胞包括选自间充质干细胞、诱导性多功能干细胞、骨髓干细胞中的至少之一；任选地，步骤(1)和(2)中所述预分化共培养时间为4
‑
8天；任选地，步骤(1)和(2)中所述预分化共培养时间为6
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8天；任选地，步骤(1)和(2)中所述预分化共培养时间为7天。3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述接触的方式为面接触；任选地，步骤(3)中，所述混合培养基中成软骨分化培养基和成骨分化培养基的体积比为1：(0.5
‑
3)；任选地，所述混合培养基中成软骨分化培养基和成骨分化培养基的体积比为1：(1
‑
2)；任选地，所述混合培养基中成软骨分化培养基和成骨分化培养基的体积比为1:1；任选地，所述混合共培养时间为4
‑
8天；任选地，所述混合共培养时间为6
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8天；任选地，所述混合共培养时间为7天。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述软骨微载体的制备方法包括：(a)将明胶与透明质酸混合，制备软骨前体溶液；(b)制备交联剂溶液；(c)将所述软骨前体溶液与所述交联剂溶液混合，并将混合液倒入模具进行冷冻处理，获得软骨微载体，其中，所述明胶与所述透明质酸的质量比为(2
‑
20)：(0.01
‑
1)。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述明胶溶液的质量体积浓度为2％
‑
20％；任选地，所述明胶溶液的质量体积浓度为5
‑
10％；任选地，所述明胶溶液的质量体积浓度为8％；任选地，所述透明质酸的质量体积浓度为0.01％
‑
1％；任选地，所述透明质酸的质量体积浓度为0.1％
‑
0.5％；任选地，所述透明质酸的质量体积浓度为0.25％；任选地，所述交联剂溶液中的交联剂包括选自1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐、四甲基乙二胺、硫酸铵、京尼平、二乙烯基苯、二异氰酸酯、转谷酰胺酶中的至少之
一；任选地，所述交联剂溶液为1
‑
(3
‑
二甲氨基丙基)
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐水溶液，所述1
‑
(3...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨振，林剑浩，邢丹，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，
类型：发明
国别省市：