一种用于牛复合鉴定多态性遗传标记的引物组、试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于牛复合鉴定多态性遗传标记的引物组、试剂盒及其应用，属于分子鉴定技术领域。本发明专利技术引物组或试剂盒可以一次性同时扩增得到13个具有良好多态性和高个体识别力的STR基因座信息。本发明专利技术所述的引物组或试剂盒适用于牛的生物样本，具有灵敏度高、特异性好、稳定性强及准确性高等特点，其为牛的种属鉴定、个体识别、亲缘鉴定等提供有效的检测手段。检测手段。检测手段。

【技术实现步骤摘要】
一种用于牛复合鉴定多态性遗传标记的引物组、试剂盒及其应用


[0001]本专利技术属于分子鉴定
，尤其涉及一种用于牛复合鉴定多态性遗传标记的引物组、试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]近年来，DNA技术在繁育优良动物品种、保障食品质量安全和打击违法犯罪等方面有着广泛的研究和应用。随着与动物相关的民事和刑事案件越来越多，利用DNA技术对各种动物进行物种鉴定、种内谱系关系鉴定和个体识别的需求也日益增大。牛作为畜牧业中最常见的动物之一，也是许多民事纠纷和违法犯罪中的主要对象。
[0003]在现代牧场育种中，人工授精和胚胎移植等方法已经广泛应用于奶牛、肉牛的繁殖育种。与此同时，建立和完善动物系谱图谱，明确动物之间亲缘关系，进行有效的留种，对于遗传繁育意义重大。此前，Visscher等通过对568头英国奶牛的研究发现，毛发样本系谱错误率为8.8％，牛奶样本系谱错误率为13.1％，总体系谱记录错误率为10％；Geldrmann等发现德国奶牛系谱错误率为13％，导致牛奶和乳脂产量降低8％
‑
16.9％。研究结果说明，在部分情况下仍存在无法确认牛个体间血缘关系以致影响育种工作开展的情况。此外，在种公牛冷冻精液生产和质量检测实践中，个别商贩有意进行以次充好的违法犯罪活动。而随着当代社会的发展、人类人口规模的增长和社会富裕程度普遍提高，不同动物肉类消费逐年升高，世界各地偶尔会发生肉类欺诈和掺假事件，不仅严重破坏了市场秩序，还增加了宗教和种族冲突的风险。因此，采取有效措施(如开发准确的肉类物种鉴定技术)以确保肉类产品真实性对解决上述问题具有重要的现实意义。
[0004]短串联重复序列(shorttandem repeats，STR)是核心序列由2
‑
6个碱基串联组成的寡核苷酸序列，因其具有灵敏度高、鉴别能力强、种属特异性好、准确性高以及易于标准化等优点，被广泛应用于司法鉴定领域的个体识别、亲缘鉴定和群体调查，并成为司法鉴定中应用最广泛的遗传标记。同样地，针对动物STR基因座的研究也逐渐发展起来。2012年，Ogden等构建了15个STR基因座的检测体系用于对狗进行个体识别和亲缘鉴定。2013年，Rosa等用包含24个STR基因座进行山谷贝利切羊的亲缘鉴定。2014年，美国赛默飞公司推出了针对牛的商业化试剂盒(Stock Kits for Cattle)，包含11个STR基因座，但各STR基因座图谱中分型效果差，且试剂盒价格高。
[0005]此外，现有研究中涉及的牛STR基因座的核心序列大多是二核苷酸重复，扩增时会产生较高的stutter峰，不利于法医学鉴定应用，而四核苷酸重复的STR基因座较少，进行亲缘关系鉴定的累计非父排除率较低。因此，开发包含多个有效的牛STR基因座的国产试剂盒，对涉及牛的民事纠纷和违法犯罪中牛检材种属的鉴定、身份的确定及其亲代来源判定等具有重要的作用。

技术实现思路

[0006]本专利技术的目的提供一种用于牛复合鉴定多态性遗传标记的引物组、试剂盒及其应用，实现牛的种属鉴定、个体识别及亲缘鉴定，为建立牛的STR数据库提供理论基础和检测方法。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0008]技术方案一：一种用于牛复合鉴定多态性遗传标记的引物组，包括：
[0009]用于扩增THLA126的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；
[0010]用于扩增BT66的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；
[0011]用于扩增BT165的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；
[0012]用于扩增ETH10的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示；
[0013]用于扩增CSM0113的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：10所示；
[0014]用于扩增INRA005的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：11所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：12所示；
[0015]用于扩增BT54的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：13所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：14所示；
[0016]用于扩增BT61的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：15所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 16所示；
[0017]用于扩增INRA023的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：17所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 18所示；
[0018]用于扩增BM2113的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：19所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 20所示；
[0019]用于扩增G18833的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：21所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 22所示；
[0020]用于扩增UMN0929的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：23所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 24所示；
[0021]用于扩增INRA063的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：25所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 26所示。
[0022]技术方案二：一种包括权利要求1所述引物组的试剂盒。
[0023]技术方案三：一种利用权利要求1所述的引物组或权利要求2所述的试剂盒对牛的13个STR基因座进行检测的方法，其特征在于，包括利用所述引物组对牛样本进行PCR复合扩增后，取PCR扩增产物进行分型检测。
[0024]进一步地，所述引物组中各对引物的反应终浓度具体为：THLA126基因的上游引物和下游引物分别为1.5μM；BT66基因的上游引物和下游引物分别为0.6μM；BT165基因的上游引物和下游引物分别为0.6μM；ETH10基因的上游引物和下游引物分别为1μM；CSM0113基因
的上游引物和下游引物分别为2.5μM；INRA005基因的上游引物和下游引物分别为2.5μM；BT54基因的上游引物和下游引物分别为1.5μM；BT61基因的上游引物和下游引物分别为2.25μM；INRA023基因的上游引物和下游引物分别为2.5μM；BM2113基因的上游引物和下游引物分别为3μM；G18833基因的上游引物和下游引物分别为2.5μM；UMN0929基因的上游引物和下游引物分别为4μM；INRA063基因的上游引物和下游引物分别为5μM。
[0025]进一步地，所述复合扩增的反应体系还包括：2
×
Multiplex PCR Master Mix、5
×
Q
‑
Solution本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于牛复合鉴定多态性遗传标记的引物组，其特征在于，包括：用于扩增THLA126的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示；用于扩增BT66的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示；用于扩增BT165的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：5所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示；用于扩增ETH10的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：7所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：8所示；用于扩增CSM0113的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：9所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：10所示；用于扩增INRA005的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：11所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：12所示；用于扩增BT54的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：13所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：14所示；用于扩增BT61的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：15所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 16所示；用于扩增INRA023的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：17所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 18所示；用于扩增BM2113的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：19所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 20所示；用于扩增G18833的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：21所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 22所示；用于扩增UMN0929的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：23所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 24所示；用于扩增INRA063的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：25所示，下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 26所示。2.一种包括权利要求1所述引物组的试剂盒。3.一种利用权利要求1所述的引物组或权...

【专利技术属性】
技术研发人员：张素华，李成涛，夏若成，陶瑞旸，
申请(专利权)人：司法鉴定科学研究院，
类型：发明
国别省市：